rhGM—CSF对小鼠口腔粘膜损伤的防治作用

目的：观察rhGM-CSF对TMX致实验性小鼠口腔粘膜损伤的疗效。方法：按随机分组原则将501只昆明种小白鼠分成8组，分别在相应时间给予不同药物（MTX，CF或rhGM-CSF）的处理因素，于第1－10天光镜下观察小鼠口腔粘膜的病理改变和积分情况。结果：IDMTX致口腔粘膜损伤病变率（45％－63％）和积分率（19．4％－56％）较其它组高，且死亡率很低（小于5％）；IDMTX＋GM0（或GM2）组的口腔粘膜损伤病变率（30．53％和30．99％）和积分率（19．47％和17．25％）比IDMTX组（55．56％和36．31％）明显减少，且溃疡严重程度较轻，二者相差显著（P＜0．01）。结论：IDMTX致小鼠口腔粘膜损伤模型可以用于粘膜损伤的研究；rhGM-CSF可以减少MTX致小鼠口腔粘膜损伤，并促进粘膜损伤恢复。     

rhGM-CSF对小鼠口腔粘膜损伤的防治作用

目的：探讨rhGM-CSF促进口腔腔溃愈合的作用机制。方法：取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞，用rhGM-CSF刺激成纤维细胞后第2、4、6天用细胞计数及^3H－胸腺嘧啶掺入法（^3H-TdR）测定其增殖情况，结果rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用，在80－100ng/ml时，细胞生长达到最佳状态，过高浓度rhGM-CSF的刺激作用反而下降。结论：rhGM-CSF可以通过刺激成纤维细胞增殖及DNA合成促进口腔溃疡愈合。     

地塞米松诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨地塞米松（Ｄｅｘ）体外抑制结肠癌细胞株的增殖并诱导其凋亡的作用机制。方法：采用ＭＴＴ及流式细胞仪检测细胞增殖抑制及凋亡,ＲＴ-ＰＣＲ检测ＧＲ、ＩκＢ及Ｂcl-２的表达改变,凝胶迁移或电泳迁移率实验（ＥＭＳＡ）检测Ｄｅｘ作用过程中的ＮＦ-κＢ活性改变。结果：Ｄｅｘ体外作用后,对４种结肠癌细胞株ＬｏＶｏ、ＨＣＴ-１１６、ＨＴ-２９及ＳＷ-４８０均有抑制作用,ＬｏＶｏ和ＨＣＴ-１１６细胞作用最显著。流式细胞仪检测显示,Ｄｅｘ（１×１０^-4mol/L）诱导７２ｈ后,在ＬｏＶｏ和ＨＣＴ-１１６细胞检测到细胞凋亡和坏死峰,明显高于未加Ｄｅｘ的对照组,具有显著性差异。ＲＴ ＰＣＲ检测显示Ｄｅｘ作用后ＧＲα、ＩκＢ表达升高,Ｂｃｌ-２无明显改变,ＥＭＳＡ结果也显示ＮＦ-κＢ活性明显降低。结论：地塞米松可能通过上调ＧＲα、ＩκＢ表达,抑制ＮＦ-κＢ活性来抑制ＬｏＶｏ细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3及其在脐血CD34+细胞中的表达

目的构建真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3配体,为研究Flt3配体对急性放射复合伤造血功能恢复作用提供实验物质基础.方法实验于2003-05/09在第三军医大学劳动卫生教研室完成.先用SalⅠ和BglⅡ双酶切pUMVC3-hFLT3配体,得到全长的人FLT3配体序列(0.8kb),两端抹平后克隆至pIRES2-EGFP载体的BglⅡ位点.然后用NheⅠ和XhoⅠ酶切鉴定;最后用脂质体转染的方法将重组质粒转入脐血CD34+细胞中,经过G418筛选,在荧光显微镜下观察其表达.结果①构建了双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-FLT3.②重组质粒pIRES2-EGFP-FLT3能在脐血CD34+细胞中的表达,凝胶电泳和测序结果证明将FLT3 cDNA亚克隆入pIRES2-EGFP内,荧光显微镜下可见脐血CD34+细胞胞体发出绿色荧光.③转染效率为10.3%.结论①携带标记基因的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3能稳定地转入真核细胞表达载体.②该质粒转染到分离纯化的脐血CD34+细胞中,并获得阳性转染细胞的克隆.     

急性淋巴细胞白血病自发缓解1例

急性白血病患者如果没有进行有效的抗白血病治疗,很难取得完全缓解,诊断明确后病程一般不超过半年。我们遇到1例,诊断为急性淋巴细胞白血病（急淋）后自发缓解,半年后复发,实属罕见,现报告如下。     

糖皮质激素受体αsiRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建糖皮质激素受体α(GRα)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并检测其抑制结肠癌细胞株Lovo中糖皮质激素受体α表达的效果.方法 根据基因文库中GRα的cDNA序列,设计并合成两段siRNA,分别插入到pGenesil-1质粒中,并对重组质粒(命名为pGenesil-1/GRα1和pGenesil-1/GRα2)进行测序鉴定.脂质体介导下转染Lovo细胞株,RT-PCR和Western Blot检测转染后GRα的表达.结果 成功构建GRαsiRNA 真核表达载体(pGenesil-1/GRα1和pGenesil-1/GRα2);pGenesil-1/GRα2转染(脂质体法)Lovo细胞后,RT-PCR和Western blot检测细胞内GRα的表达显著降低.结论 GRαsiRNA真核表达载体的成功构建为进一步研究GR在结肠癌化疗中的作用奠定了重要的实验基础.     

电磁辐射对CD34+造血干细胞JAK2和STAT5蛋白活化的影响及意义

目的 观察电磁辐射对CD34+造血干细胞JAK2和STAT5蛋白活化的影响,探讨JAK2和STAT5蛋白在电磁辐射致造血干细胞损伤中的作用。方法 从脐血中分离培养CD34+造血干细胞,分别用平均功率为1、5、25 mW/cm²的电磁波辐射20 min,干预组(平均辐射强度为25 mW/cm²)使用AG490(终浓度10^-6 mol/L)预处理CD34+造血干细胞30 min。检测正常组、辐射组和干预组12、24和48 h时细胞活力(MTT法)、细胞凋亡率(流式细胞术)、Caspase-3蛋白水平(WB法)、磷酸化JAK2和STAT5蛋白水平(WB法)。结果 与正常组比较,辐射组细胞12和24 h活力降低、细胞凋亡率升高,具有剂量效应,磷酸化JAK2和STAT5蛋白表达呈升高后降低的趋势。干预组12和24 h细胞活力显著高于辐射25 mW/cm²组,细胞凋亡率显著低于辐射25 mW/cm²组,磷酸化JAK2和STAT5蛋白水平较辐射25 mW/cm²组低。结论 JAK2和STAT5蛋白参与了1～25 mW/cm²功率范围内的电磁辐射对CD34+造血干细胞的损伤过程,阻断JAK2和STAT5蛋白活化可缓解CD34+造血干细胞凋亡的发生。     

异基因外周血干细胞移植后胸腔积液一例

患者男,23岁,体重52 kg,血型为O型Rh阳性.确诊慢性髓细胞白血病慢性期3个月.拟行非血缘异基因外周血造血干细胞移植（allO-PBSCT）,于2008年11月22日入院,既往史无特殊.供者男性,血型为AB型Rh阳性,HLA-A、B、CW、DRBl、DQBl等位基因位点全相合.预处理方案为经典Bu/Cy方案,采用环孢素（CsA）＋短程甲氨蝶呤（MTX）＋抗淋巴细胞免疫球蛋白（ATG-Fresenius S）＋吗替麦考酚酯胶囊（MMF）预防移植物抗宿主病（GVHD）,前列腺素El、熊去氧胆酸、低分子肝素钙预防肝静脉闭锁综合征（HVOD）.     

氧氟沙星致急性溶血1例

患者王××,女,５７岁。因全身表浅淋巴结肿大,左下肺炎而入我科。查体：体温３８Ｃ,脉搏１００次／分,呼吸２０次／分,血压１２／７ｋＰａ。意识清晰,皮肤巩膜无黄染。两侧颈部,腋下,腹股沟各们及２～３枚１．５×２．５×１．０ｃｍ淋巴结,质中,轻触痛。双肺呼吸音粗糙,左下肺闻及少量中细湿罗音。心率１００次／分,律齐,心尖区闻及水Ⅲ／ⅥＳＭ腹软,肝脾不大。实验室检查：Ｈｂ８７ｇ／Ｌ,ＷＢＣ１４．７×１０９／Ｌ,ＢＰＣ３９５×１０９／Ｌ;肝肾功能,尿常规,Ｃｏｏｍｂ’ｓｔ,Ｈａｍ’ｓｔ均正常;骨髓象：感染…     

Tiam1-SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响

目的研究Tiam1-SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤中淋巴管生成的影响。探讨Tiam1与结肠癌淋巴管生成的关系。方法裸鼠10只随机分为对照组(n=5)和Tiam1-SiRNA组(n=5),将含Tiam1-SiRNA质粒的HCT116细胞进行裸鼠皮下接种,5周后处死动物,留取肿瘤标本。利用Western blot和免疫组化SP法检测Tiam1、Rac1、VEGF-C/D蛋白水平的表达,并进行肿瘤淋巴管染色计数。结果干扰组移植瘤中Tiam1、Rac1、VEGF-C、VEGF-D蛋白表达较对照组显著降低(P<0.01),肿瘤内淋巴管生成也显著减少(P<0.01)。结论通过RNA干扰技术抑制Tiam1的表达,在裸鼠体内可显著抑制移植瘤组织内淋巴管生成。