两种抗T细胞免疫毒素对靶细胞杀伤效应的比较

免疫毒素杀伤靶细胞的关键取决于抗体对靶细胞的特异性识别和毒素对靶细胞的杀伤效率。本研究比较了我们所研制的两种抗Ｔ细胞免疫毒素（ＣＤ５：ｒＲＡ和ＣＤ５：Ｒｉｃｉｎ）对靶细胞的特异性杀伤效应。实验结果证实：①两种免疫毒素在１０＾－９－１０％－１１ｍｏｌ／Ｌ浓度范围内均可有效地清除ＣＤ５＾＋Ｔ细胞群,并对ＣＤ２５＾＋ＣＤ３＾＋激人有剂量依赖性抑制作用;②两种免疫毒素均对混合淋巴细胞增殖反应有明显抑制作用     

IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的新策略

目的:利用细胞因子-受体的特异性结合来靶向杀伤肿瘤是新一代导向杀伤策略.鉴于白血病细胞异常高地表达IL6/IL6R系统,而正常造血细胞几乎不表达抑或微量表达这一事实,我们率先在国际上开展了利用IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白特异性杀伤高表IL6R白血病新策略的科学性及可行性的探讨.方法:1. IL6-PE40的构建、表达及纯化:常规进行RNA提取、RT-PCR、质粒提取、酶切、回收、连接、转化、鉴定IL6、PE40及IL6-PE40融合基因的序列分析等.将所构建的含IL6-PE40重组质粒在大肠杆菌表达,用HPLC半制备分离其产物,SDS-PAGE及Western-blot鉴定.IL6-PE40的细胞毒活性采用[3H]-亮氨酸掺入U266骨髓瘤细胞检测.     

HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定

目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞,本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物;利用基因重组技术,构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ,将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中,命名为ｐＵＣ－ＩＬ６,并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证,为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。     

PCR-SSP及PCR-SSCP在骨髓移植配型中的联合应用

目的 研究ＨＬＡ抗原分型的方法。方法 对２０例已进行ＨＬＡ抗原血清学分型的骨髓移植供、受者采用序列特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）及单链构象多态性聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）进行ＨＬＡ抗原的基因分型。ＤＮＡ的提取采用快速盐析法。结果 基因分型结果与血清学分型一致者有１８对,基因分型能明确判定而血清学分型无法判断者有２对;ＰＣＲ－ＳＳＰ与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果完全一致者有１９对;１对ＰＣＲ－     

毒素蛋白PE40的基因克隆及序列分析

细胞因子－受体介导的靶向杀伤作为导向治疗白血病与肿瘤的第二代新策略,是现代分子导向药物研究的最新领域之一。它是利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子－细菌外毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体的白血病及肿瘤细胞〔１～３〕...     

低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP基因分型在骨髓移植中的应用

为满足临床骨髓移植对HLA配型的要求,本研究采用先进、快速的DNA提取方法和低分辨率与高分辨率HLA-ⅡPCR-SSP分型方法,对150例临床骨髓移植供、受者进行HLA-Ⅱ类分型研究,并且对分型方法进行了改进,建立了随时间释放DNA聚合酶活性的分型方法。结果表明:DNA提取方法可以满足微量HLA-Ⅱ类DNA分型方法对DNA样本的要求,200μl全血DNA产量为4-12μg,A_(260)/A_(280)为1.7～1.9。低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP均具有良好稳定性、可靠性和准确性。低分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP方法耗时1.5小时,适用于同胞兄弟姐妹间的骨髓移植配型。高分辨率HLA-Ⅱ类亚型PCR-SSP分型方法耗时2小时50分钟,适用于同胞兄弟姐妹间骨髓移植配型的特殊病例和无血缘关系骨髓移植供、受者间的配型。本研究的分型方法对于推动我国骨髓移植工作的开展和未来的发展均具有重要的意义。     

利用供受体HLA三维结构差异快速预测GVHD

目的 对不完全相合造血干细胞移植中GVHD发生的可能性大小进行预测。方法 从诱导免疫排斥的HLA出发,分析供受体HLA三维结构差异大小与移植后排斥反应程度的关系。结果 供受体HLA三维结构差异的大小与移植后GVHD程度成正相关,发生Ⅰ～Ⅱ度GVHD时供受体HLA三维结构差异远小于发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD的供受体。结论 该预测GVHD的方法具有简洁、快速、特异等优点,对不完全相合造血干细胞移植的移植前预处理方案与移植后免疫抑制剂的选用有一定意义。     

HLA-A*110104新等位基因的克隆与序列分析

目的识别并确认中国人群HLA新等位基因。方法采用基因克隆、测序及生物信息学技术,分析HLA新等位基因与HLA已知基因序列的差异。建立HLA新等位基因序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型方法,并对1200名HLA-A*11阳性的造血干细胞移植无关供者(包含100名HLA-A*11纯合子个体)进行HLA新等位基因筛选和频率分析。结果HLA新基因与A*110101的差异只是在外显子3区域中279位碱基发生C→T突变,导致93位密码子由CAC变为CAT,但氨基酸未发生变化,并最终被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*110104。该新基因出现在2个无关家系中,分别具有2～3代遗传史。在1200名无关供者中未发现其他带有新基因的个体。其基因频率为0．000 83。结论HLA-A*110104新基因具有稳定的遗传性和一定的普遍性,对无关供者的选择和人类学、遗传学等的研究具有一定意义。     

我国汉族人群HLAⅠ类经典基因单倍型及连锁分析

本研究旨在探讨我国汉族人群HLAI类经典基因座位HIA—A、HLA—B、HIA—Cw位点的基因频率，单倍型频率及连锁特征。采用序列特异性引物（SSP）PCR低分辨基因分型技术对1014例随机选择的无关个体的经典HIAⅠ类位点进行基因分型，并对其相关遗传学参数进行统计学分析。结果发现汉族人群中较为常见的HIA—Ⅰ类基因是A＊02（0．33）、A＊11（0．24）、B＊15（0．14）、B＊13（0．13）、Cw＊03（0．25）、Cw＊07（0．18）；较为常见的单倍型是A＊02-B＊46（0．071）、A＊11—B＊15（0．051）、A＊02-Cw＊01（0．084）、A＊11—Cw＊03（0．079）、B＊46-Cw＊01（0．095）和B＊13-Cw＊03（0．071）等，其中A＊02-B＊46、A＊30-B＊13、A＊30-Cw＊06、A＊02-Cw＊01、B＊46-Cw＊01和B＊58-Cw＊03等单倍型呈现出显著的连锁不平衡；而A＊02-B＊15、A＊02-B＊40、A＊24-Cw＊03、A＊02-Cw＊03、A＊31—Cw＊03等连锁不平衡性相对较低，其中A＊24-Cw＊03在重组事件中较常出现。此外，A＊02-B＊46-Cw＊01（0．075）、A＊30-B＊13-Cw＊06（0．046）、A＊11—B＊13-Cw＊03（0．045）、A＊33-B＊58-Cw＊03（0．044）、A＊11—B＊15-Cw＊08（0．027）、A＊02-B＊38-Cw＊07（0．023）、A＊11—B＊40-Cw＊07（0．022）等为常见扩展单倍型。结论：本研究较系统地分析了我国汉族人群的HIA遗传学分布特点，为群体进化、临床移植及疾病相关研究等提供了有价值的遗传学资料。     

HLA-DQB1-PCR-SSP方法的建立及其在骨髓移植中的应用研究

为了改进骨髓移植中供、受体配型技术,在已有技术的基础上改进、建立了新的HLA-DQB1-PCR-SSP方法。利用澳大利亚皇家医院赠送的HLA标准分型细胞对自行设计引物的特异性进行鉴定,发现该引物设计合理、扩增特异。通过内部阳性对照引物的设立,可较容易地将纯合子及杂合子分型细胞分开,并对个体DNA进行了尝试。结论表明,HLA-DQB1-PCR-SSP快速、简便、灵敏、重复性好,结果易于判断,适于小样本及急症病人的器官及骨髓移植配型,是比较理想的HLA-Ⅱ类基因分型方法。