对微量淋巴细胞毒试验结果观察的改进

微量淋巴细胞毒试验被广泛应用于HLA等试验研究中,从事该工作的技术人员经常要对上万个反应孔进行倒置显微镜下的镜检工作。由于种种原因,有些应读的反应孔难以读数,造成人为的漏检。最近我们对国际通用的NIH法进行了一些小的改进,结果提高了视野的分辨率,减少了漏检,避免了盖玻片法的弊病,使镜检的效果有一定的提高。材料和方法 1.标准的微量淋巴细胞毒试验NIH法(赵桐茂主编:《ILLA分型原理和应用》,第22页,上海科学技术出版社,上海,1984)。 2.改进步骤:补体依赖性微量淋巴细胞毒试验结束后1小时,不加玻片覆盖,往     

抗HLA-DR单克隆抗体鉴定B淋巴细胞纯度

HLA是迄今所知最为复杂的一个人类遗传多态性系统,是一种移植抗原。通过HLA配型能改善移植物的存活率和减轻GVHD。为了配合我院骨髓移植工作,我室进行了HLA抗原分型。实验中要求T、B淋巴细胞的纯度和活性达90％以上,其鉴定方法有荧光染色法、玫瑰花结法、酯酶染色法等,但都不如单克隆抗体简便、易行、特异性高等优点。过去我们用美国Terasaki试验室提供的抗体作为标准抗B抗体,但来源有限,近一年多来采用了抗     

系统性红斑狼疮与HLA相关联研究

<正> 使用HLA抗原型别作遗传标志,研究它与疾病的相关性,借以阐明疾病病因与遗传基因的内在联系,是一个引人注目的研究课题。近年来研究证明,不少疾病与HLA相关联。但是,系统性红斑狼疮(SLE)与HLA的相关性尚无一致意见。为此,本实验室对30例SLE患者进行了HLA-A、B、C和DR抗原调查。     

造血干细胞移植供受体人群HLA-Cw基因遗传多态性研究

目的调查了人类白细胞抗原（human leucocyte antigen，HLA）Cw位点在中国汉族人群中的等位基因分布规律，为进一步研究Cw位点的遗传特征提供背景资料。方法采用序列特异性引物扩增技术对1285名无关个体进行HLA-Cw基因特异性分析，并对其分布规律进行统计学分析。结果共检测到23种HLA-Cw位点的等位基因，其中HLA-Cw＊01、＊03、＊07、＊08为主要基因型，其基因频率分别为0．1529、0．2385、0．1747、0．1004，并检出HLA-Cw＊12、＊14、＊15、＊16、＊17等血清学方法不能鉴定的HLA-Cw基因；统计结果表明HLA-Cw位点的基因分布符合Hardy-Weinberg平衡（χ^2=73．74，df=98，P〉0．5）。结论本研究结果为中国汉族人群提供了一套较为完整HLA-Cw基因遗传学参数。     

IL-6D24-Linker-PE40重组毒素的分子生物学特性预测

目的：探讨重组毒素ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０融合蛋白及其接头设计的合理性。方法；应用核酸和蛋白质序列分析软件系统－ＧＯＬＤＫＤＥＹ软件，对ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０重组毒索融合蛋白柔性、抗原性、亲水性、表位等分子生物学特性进行计算机模拟预测，并做Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ分析进行验证。结果：ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０分别保留了ＩＬ－６Ｄ２４和ＰＥ４０的表位特征，没有     

Ⅱ号氟碳代血液临床应用及对补体影响的观察

我们对29名手术、2名脑梗塞及1名急性乐果重度中毒病人输注Ⅱ号氟碳代血液(FCBS),并观察了对其中20名病人补体系统的影响。31例输后无不良反应,脑梗塞及乐果中毒各1例有较好疗效。CH_(50),C_3及IgG于输后l天内分别降至输前的50%,65.8%和77%,输后3天CH_(30)恢复至输前水平,C_3和IgG分别回升至输前的86.27%(P<0.05)和83.8%(P>O.05)。IgA和IgM输注前后无显著变化。本文结果表明,Ⅱ号FCBS是安全、有效的代血液,具有广泛临床应用的前景。     

新霉素耐药基因(NeoR)的整合与表达并不改变人乳癌细胞(MDA)的原有生物学特性

目的：通过对比ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 与ＭＤＡ 人乳癌细胞的生物学特征,阐明原核标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达是否对乳癌细胞原有的生物学特性产生影响。方法：对已建立且证实表达ＮｅｏＲ 基因＞ ６ 个月的７ 株ＭＤＡ－ＮｅｏＲ 细胞系进行Ｇ４１８ 抗性、表面抗原、细胞倍增时间、细胞周期、肿瘤细胞集落形成及裸鼠体内成瘤能力的检测。结果：ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 细胞对高浓度的Ｇ４１８ 仍产生抗性并表达Ｎｅｏ Ｒ 基因;其细胞倍增时间、Ｓ 期分数、肿瘤细胞体外集落形成率与ＭＤＡ 无明显区别（ Ｐ＞ ０－０５） ;角蛋白ＣＫ１９ 与表面膜抗原ＥＭＡ 的表达在两组是等同的;并且ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ ７ 细胞系在裸鼠体内的成瘤能力与ＭＤＡ 细胞也是相似的。结论：外源标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达对ＭＤＡ 人乳癌细胞的原有生物学特性无明显影响     

IL-6受体在人白血病细胞膜上的表达及亲和力

目的：研究各种白血病细胞膜ＩＬ－６Ｒ的表达、密度及亲和力,为深入探讨对ＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒ系统介导ＩＬ－６－ＰＥ４０外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的敏感性提供可靠依据。方法：采用放射性配基结合实验（ＲＢＡ）并结合Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法,系统分析ＩＬ－６Ｒ在８种极具代表性的人类白血病细胞系Ｕ９３７,ＨＬ－６０,ＫＧ１,ＴＦ１,Ｋ５６２,ＣＥＭ,ＨｕＴ２８和Ｒａｊｉ上的表达密度及亲和力,同时应用流式细胞术（ＦＡＣＳ）检测ＩＬ－６Ｒ的α和β亚单位在这些白血病细胞上的表达。结果：ＲＢＡ表明,粒、单、红白血病细胞系ＩＬ－６０,Ｕ９３７,ＫＧ１和ＴＦ１表面存在着高亲和力ＩＬ－６Ｒ,平均ＩＬ－６Ｒ密度／细胞分别为２５０２个,２８７４个,２３１９个及９３２９个,而淋系白血病细胞系ＣＥＭ,ＨｕＴ２８和Ｒａｊｉ以及慢粒Ｋ５６２     

GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究

目的 :进一步探索GVHD的发病机理 ,提高临床移植疗效。方法 :采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养方法 ;基因分型采用PCR SSP方法 ,对基因亚型进行DNA测序 ,再进行HLA三维结构模拟。结果 :① 4名骨髓移植患者中 ,例 1供 受体间HLA Ⅰ、Ⅱ类血清学分型相合 ,DQB1基因亚型不同 ,例 2、3、4均有 1个Ⅰ类抗原 (分别为HLA A、B和A)血清学分型不合和 1个基因亚型不同。HLA三维结构模拟例 1、3、4供 受者差别明显 ,骨髓移植后发生了Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;例 2三维结构模拟差别不明显 ,仅发生Ⅰ度GVHD ;② 4个病例供 受体间HLA分子分别相差 14、17、2 0、12个氨基酸 ,相差数量与GVHD无相关性 ;3例重度GVHD供 受体的HLA分子三维结构均在抗原结合区的β转角处出现明显差异 ,而 1例轻度GVHD则无明显差异。 结论 :当异基因骨髓移植供 受体间HLA基因亚型不同时 ,移植后发生GVHD的程度与HLA分子三维结构差别大小有密切关系 ;三维结构的差别又与差异氨基酸所处的位置有关 ;GVHD与抗原氨基酸差别的数量多少没有直接关系。     

HLA基因多态性与慢性粒细胞白血病的关联性研究

目的探讨人类白细胞抗原（HLA）基因多态性与慢性粒细胞白血病（CML）的关联性。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物（PCR-SSP）分型技术对234例CML患者以及1370例无血缘关系健康对照者进行HLA-A/B/C/DRB1/DQB1基因分型,采用病例对照研究方法进行基因频率、单倍型频率以及疾病发生相对危险度（RR）的研究。结果 CML患者中HLA-Cw3及Cw7的基因频率较对照组显著升高（P〈0.05）,其RR分别为1.4777和3.0595。而HLA-Cw4基因型频率则显著降低（P=0.0020）,其RR为0.4331。扩展单倍型A2-B51-Cw14-DR9-DQ9与A11-B13-Cw3-DR12-DQ07的频率亦有显著性差异（P〈0.05）,其RR分别为3.1027和3.1606。两位点单倍型A2-Cw3、A24-Cw3、B15-Cw1与B40-Cw3的频率也存在显著性差异（P〈0.05）,其RR分别为2.5574、2.2544、3.8587及1.6853。结论通过大样本量的病例对照研究HLA基因多态性与CML之间的关联性探讨取得了初步结果：HLA-Cw3及Cw7与CML的易感性相关;HLA-Cw4则与CML发生呈负相关,可能是CML的保护性基因;某些HLA单倍型或扩展单倍型亦与CML的发生有关。