Fn、TPO基因修饰对人骨髓间充质干细胞的影响

目的 观察纤维连接蛋白(Fn)、血小板生成素(TPO)融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞(MSC)的影响.方法 构建携带Fn-TPO融合基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSC进行基因修饰;观察Fn-TPO基因在骨髓MSC中的表达,以及基因修饰后骨髓MSC的体外增殖、黏附造血细胞和分泌TPO的能力;并将脐血CD34+细胞接种到基因修饰后骨髓MSC形成的滋养层,培养7d观察修饰后骨髓MSC对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响.结果 成功构建携带Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSC进行体外基因修饰;Fn、TPO基因在骨髓MSC内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSC体外增殖能力[(6.92±0.77)×104/ml]与对照组[(7.18±0.89)×104/ml]比较差异无统计学意义(P＞0.05);基因修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0.188±0.018和0.167±0.017(P＜0.01),分泌TPO能力分别为(7.46±0.59)ng/ml和(5.58±0.37)ng/ml(P＜0.01),细胞分泌TPO的能力不受培养时间的影响,但受细胞生长状态影响;2×104脐血CD34+造血干/祖细胞经基因修饰后骨髓MSC联合必要细胞因子体外扩增7 d,有核细胞数、CD34+细胞比例、BFU-E、CFU-GM及CFU-GEMM分别为(29.9±2.7)×104、(33.3±2.8)%、109.3±4.1/1×104CD34+细胞、163.7±7.1/1×104CD34+细胞、13.3±1.5/1×104CD34+细胞,较对照组明显增加(P＜0.01).结论 Fn-TPO基因修饰能够增强骨髓MSC黏附造血细胞、分泌TPO及支持脐血CD34+细胞扩增的能力.     

原发性肝痛破裂伴失血性休克1例

患儿：男，７．５岁。因跑步跌倒后出现腹痛、心悸及面色苍白２小时入院。体检：意识清楚，表情淡漠，四肢冰凉，挠动脉搏动细弱１２２次／分，血压６／４ｋｐａ（５０／３０ｍｍＨｇ）。腹饱满，全腹压痛，腹腔穿刺抽出不凝固血性液体。Ｂ超：腹腔大量积液，脾门至脾尖区回声不均，肝包膜完整，示外伤性脾破裂。急行剖腹探查手术。开腹未见气体溢出，吸尽腹腔内积皿７００ｍｌ。探查脾、双肾及腹膜后无出血灶ｉ肝包膜完整，见肝右叶近肝门处有一５ｃｍ×４ｃｍ×３ｃｍ肿块，质硬，菜花样，基底部４ｃｍ与肝脏相连。肿瘤表面有１１条２ｃｍ…     

诱导血红素加氧酶-1高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响

目的为了明确血红素加氧酶-1的高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响,进而探索出一条有效地防止小体积移植肝缺血再灌注损伤的方法。方法利用分子生物学方法构建携带有HO-1基因的重组腺病毒Ad5-HO-1,对供体进行预处理,并观察Ad5-HO-1对大鼠小体积移植肝缺血再灌注损伤的保护作用。结果Ad5-HO-1组与对照组相比较ALT水平有显著降低(P＜0．05)；术后2 h内门静脉血流流量有明显增加(P＜0．05)；HO-1酶活性测定显示Ad5-HO-1组酶活性为(5．34±0．41)×10~(-3)mmol·mg~(-1)·mm~(-1),较对照组明显为高(P＜0．05)；RT-PCR和免疫组化检测HO-1、TNF-α、Bcl-2、Bax表达,证实Ad5-HO-1组中HO-1、Bcl-2的表达是增高的,而Bax、TNF-α表达是降低的(P＜0．05)；Ad5-HO-1组在1、7、21d的生存率分别为100%、85．7%、71．4%,而对照生理盐水组在1、7、21 d的生存率分别为66．7%、16．7%、16．7%(P＜0．05)。结论Ad5-HO-1的应用能够显著地增加术后2 h内门静脉血流,有利于受体术后肝功能的恢复,从而改善大鼠移植术后的生存结果。实验结果提示HO-1的高表达在防止和减轻小肝移植物缺血再灌注损伤的过程中扮演着重要的角色,进而为临床上防止小肝移植物缺血再灌注损伤提供了一条新的思路和方法。     

儿童自发性胆道穿孔的诊治

目的:探讨儿童自发性胆道穿孔的病因、临床特点、诊断及治疗.方法:回顾分析我院1998～2006年收治的8例儿童自发性胆道穿孔病例资料.结果:8例病例中5例术前得以确诊,手术方式采用T管引流及腹腔引流,效果满意.3例合并有胆总管囊肿的患儿行二期根治术后治愈.结论:儿童自发性胆道穿孔病因尚不明确,胰胆管合流异常可能是主要原因,腹腔穿刺对本病的诊断有重要价值,手术方式采用T管引流及腹腔引流,合并有胰胆管合流异常的患儿需行二期根治术,未发现胰胆管合流异常的穿孔病例应该长期随访.     

骨髓间充质干细胞移植治疗巨结肠的实验研究

目的在体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）的神经细胞分化基础上，探讨移植治疗实验性巨结肠的可能性。方法8～9周龄SD大鼠用1％苯扎氯铵（BAC）制作巨结肠模型。贴壁筛选法进行MSCs原代培养、扩增后用碱性全反式视黄酸（ATRA）和碱性成纤维生长因子（FGF2）诱导法收获Nestin、NF表达阳性的MSCs细胞，显微注射法将来源于雄性大鼠，Nestin、NF阳性表达的MSCs植入雌性实验性巨结肠模型鼠病变肠段。实验分对照组（PBS组）及实验组（MSCs组），分别于术后1、2、4周进行大体观察，钡灌肠X线检查，病理学检查、平滑肌收缩功能以及采用短路电流技术检测上皮离子转运的变化。结果BAC处理后1周，实验组大鼠出现腹胀，BAC处理段出现狭窄。MSCs被纯化并被诱导为神经细胞。MSCs组免疫组化结果显示移植后1、2、4周Nestin及NF呈阳性表达，但在PBS组未观察到阳性表达。MSCs组腹胀较轻，梗阻近端少量大便，MSCs移植组大鼠结肠上皮第一周跨膜电压升高，但第四周其基础电流下降，钠离子吸收减少；MSCs移植后第一、四周Forskolin所引起的氯离子分泌电流均较PBS组高。结论MSCs可在实验性巨结肠模型鼠结肠壁内分化为神经细胞，部分恢复结肠神经调节作用。     

结缔组织生长因子的克隆及其重组腺病毒的构建

目的:克隆结缔组织生长因子(CTGF)及制备表达CTGF基因的重组腺病毒.方法:体外克隆出CTGF并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,进一步采用同源重组方法将该质粒和腺病毒质粒Adeasy-1连接,然后用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中产生表达目的基因的重组腺病毒,收集病毒液感染HCT116 wt骨软骨肉瘤细胞,通过荧光显微镜观察GFP和Western Blot检测CTGF蛋白的表达.结果:经限制性内切酶检测和GFP表达证实成功地构建了携带该基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,重组腺病毒转染后可使HCT116 wt细胞CT-GF蛋白表达明显增加.结论:成功构建了携带CTGF基因的重组腺病毒载体Ad5-CTGF,为探讨CTGF的作用机制、功能及与相关疾病的发生、发展上的进一步研究打下基础.     

直肠肛门反射及其意义

直肠肛门反射包括直肠肛门兴奋反射(rectal anal excitory reflex, RAER)和直肠肛门抑制反射(rectal anal inhibitory reflex, RAIR),分别是由于扩张直肠后引起肛门外括约肌(external anal sphincter, EAS)收缩和内括约肌(internal anal sphincter IAS)松弛所产生的.1877年Grower发现扩张动物直肠后可反射性地引起其肛管松弛,这一现象在人的身上同样存在,被称为直肠肛门抑制反射.     

肾母细胞瘤术前化疗疗效与耐药性

目的：探讨肾母细胞瘤术前化疗疗效规律及耐药性的生物学特性,确认其术前化疗的合适疗程。方法：选择15例按L化疗方案接受术前化疗5周以上,资料记录完整的患儿作为术前化疗疗效研究对象,测量术前化疗不同疗程肿瘤大小;对18例未术前化疗和经不同疗程术前化疗病理档案,采用JSD－单克隆抗体对肾母细胞瘤组织多药耐药蛋白（P-glycoprotein,P-gp)进行免疫组织化学检测,了解P－gp在术前化疗不同疗程的 表达特点。结果：术前化疗2周后,肿瘤体积缩小值最明显,术前化疗4周后,其体积缩小值减缓,部分病例有逐渐增大趋势;而术前化疗疗程越长,肿瘤细胞P－gp表达越强。结论：L术前化疗方案对肾母细胞瘤的疗效肯定,疗程以2－3周后最显著。其疗效降低可能与术前化疗后瘤组织对化疗药物耐药性明显增强有关。合适疗程为3－4周。