MDR1基因转染小鼠骨髓干细胞在化疗中骨髓保护作用的研究

多药耐药基因 (ＭＤＲ1 )属于人类正常防御性基因 ,其编码产物Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)在部分肿瘤细胞的高表达是肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药的主要原因。实验应用本课题组所构建的含有人全序列ＭＤＲ1ｃＤＮＡ逆转录病毒载体ＰＨａＭＤＲ1 /Ａ1的产病毒包装细胞ＰＡ3 1 7 ＨａＭＤＲ1 /Ａ1 ,其产生病毒颗粒的滴度约为 3 3 1× 1 0 5 ＣＦＵ/ｍｌ,上清液感染法将ＭＤＲ1基因转染Ｂａｌｂ/ｃ小鼠骨髓干细胞 ,转染率达 40 %左右 ,经ＰＣＲ、免疫组化、流式细胞术检测 ,在基因、蛋白质及细胞水平证实ＭＤＲ1基因已经转入小鼠骨髓细胞并具有药…     

电阻抗成像技术和水通道蛋白4在3岁以下主动脉缩窄手术患儿脑水肿监测中的应用

目的：比较3岁以下主动脉缩窄手术行顺行性脑灌注（antegrade cerebral perfusion,ACP）时在不同温度下患儿脑水肿情况,评估电阻抗成像技术是否可以评估患儿脑水肿情况。方法：回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院胸心外科2012年1月至2017年1月收治的60例3岁以下行主动脉缩窄合并心内畸形的手术患儿基本资料（如性别、年龄和体质量）,根据停循环时的鼻咽温度分为深低温组（17.0 ℃～20.0 ℃）、中低温组（20.1 ℃～25.0 ℃）和浅低温组（25.1 ℃～30.0 ℃）。检测麻醉诱导后、ACP前、ACP结束时、体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）结束时、术后3 h、术后12 h和术后24 h ７个时间点血清水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达和脑电阻抗系数。收集同期20例在我院行干下型室间隔缺损修补术的患儿为对照组。结果：采用重复测量方差分析,不同组间同时间点采用简单效应分析的Sidak检验,顺行性脑灌注下深低温组患儿血清AQP4水平在ACP结束、CPB结束、术后3 h、术后12 h、术后24 h相对于中低温组、浅低温组、对照组均明显升高（F组别=160.755,P组别=0.000;F时间=283.208,P时间=0.000,F交互=19.859,P交互=0.000）;深低温组患儿脑电阻抗系数在CPB结束、术后3 h、术后12 h、术后24 h相对于中低温组、浅低温组和对照组均明显升高（F组别=55.243,P组别=0.000;F时间=90.805,P时间=0.000,F交互=10.743,P交互=0.000）。结论：3岁以下主动脉缩窄ACP时深低温组脑损伤可能高于中低温组、浅低温组和对照组,基于电阻抗成像技术的脑水肿监测仪可以判断患儿脑水肿情况。     

基因修饰BMSCs抑制增生性瘢痕的实验研究

目的 通过将转染TGF-β3c2s2基因的兔BMSCs移植于兔耳瘢痕模型,观察转基因BMSCs对创面愈合后增生性瘢痕形成的影响. 方法 成年健康日本大耳白兔20只,体重1.7～2.5 kg,雌雄不拘.取第3代兔BMSCs,经Ad-TGF-β3c2s2在感染复数150下转染,培养孵育24 h后,调整细胞浓度为1×105/mL备用.将纯化、浓缩的Ad-TGF-β3c2s2颗粒,DMEM/F12(不含FBS)稀释为1×108pfu/mL备用.于20只日本大耳白兔双侧兔耳分别制备两个2 cm×2 cm大小的腹侧全层皮肤、软骨缺损创面.将每只兔的4个创面随机分为空白对照组(A组)、Ad-TGF-β3c2s2组(B组)、BMSCs组(C组)和BMSCs/Ad-TGF-β3c2s2组(D组),并以自身正常皮肤作为正常对照(E组).将备好的细胞及病毒液分别按创面分组进行局部移植.于术后21、45、90 d行大体观察、瘢痕硬度和厚度测定、HE染色和免疫组织化学检测. 结果 大体观察A、B、C组上皮化后创面均逐渐形成不同程度的瘢痕,伤后45 d瘢痕增生程度达高峰,明显高出皮肤表面,持续至90 d,D组在观察期内均无明显高出周围皮肤的瘢痕形成.术后45 d和90 d,A、B、C组瘢痕厚度和硬度明显高于D组,且差异均有统计学意义(P＜0.01),而B组低于A、C组,差异有统计学意义(P＜0.01);D组愈合后创面厚度和硬度与正常皮肤接近.HE染色观察A、C组伤后45 d可见浅层组织结构排列紊乱,胶原纤维粗大,呈交错网织状排列;B组和D组结构与正常皮肤接近,但较E组胶原排列致密,表皮较A、C组薄;90 d各组结构与45 d相似.BrdU免疫组织化学观察,伤后21、45 d,C、D组均能见到散在分布、胞核染色阳性的棕色细胞,A、B、E组均为阴性. 结论 创面局部移植人TGF-β3c2s2基因修饰的BMSCs,具有抑制创面愈合后增生性瘢痕的作用.     

258例儿童先天性十二指肠梗阻诊治的回顾性分析

目的：收集258例先天性十二指肠梗阻的病例资料,分析并总结该病在儿童不同年龄段的临床特点和诊治要点。方法：收集我院2003年至2012年间收治的258例先天性十二指肠梗阻病例,对临床病例资料进行分组回顾性分析,总结临床特点及诊治要点。结果：（1）先天性十二指肠梗阻多在新生儿期发病（ ?字2=10.658 3,P=0.005）;（2）胆汁性呕吐（76.36%）是本病最突出的临床症状（?字2=37.482 1,P=0.000）;（3）腹部平片、腹部超声多普勒及上消化道造影对本组病例的阳性发现率分别为78.57%、73.71%和100%,有显著性差异（P=0.000）;（4）先天性肠旋转不良、十二指肠闭锁或狭窄、环状胰腺是先天性十二指肠梗阻最常见的病因;先天性十二指肠梗阻一经确诊,应尽早手术,预后好（本组治愈率96.88%）。结论：先天性十二指肠梗阻诊断成立应尽早手术,预后多较好。     

新耐药基因HA117在神经母细胞瘤中的表达及临床意义1

【】 目的：研究新耐药基因HA117蛋白在神经母细胞瘤中的表达位置和分布情况及临床意义;方法：应用S-P免疫组化法,检测30例神经母细胞瘤和24例瘤旁组织中HA117蛋白的表达情况,分析其与神经母细胞瘤临床病理特征的关系,比较与经典耐药基因MDR1两者的表达情况,初步探讨其耐药机制。 结果：HA117在神经母细胞瘤中的表达阳性率为70%,在瘤旁组织中的表达阳性率为21%,其结果有显著性统计学意义(p <0.05)。不同病理分期中表达无明显差异(p>0.05)。MDR1耐药蛋白在神经母细胞瘤中的表达率为60%,其结果与HA117蛋白有显著差异性(p <0.05)。结论：HA117蛋白在神经母细胞瘤中有着广泛的分布,提示神经母细胞瘤具有多药耐药现象,其耐药机制有别与传统的MDR1外排泵机制。     

3月龄以上儿童先天性巨结肠81例诊治分析

目的探讨钙视网膜蛋白(Calretinin,CR)在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)诊断中的意义及经肛门直肠切除斜行吻合术治疗儿童HD的方法与疗效。方法收集2011年1月至2013年12月我们收治的81例采用经肛门直肠结肠切除斜型吻合术治疗的3月龄以上HD患儿临床资料。统计术前、术后行CR检查及病理学检查病例。对术后1~3年的81例患儿进行门诊及电话随访了解术后并发症情况,评估中远期手术疗效。结果 CR免疫组化染色与病理检查诊断HD符合率100%。81例患儿平均手术时间70.4 min,术中出血量平均为16.2 mL,术中未输血,平均住院时间7.1d。48例获随访,随访率59.3%,随访时间1~3年,无长期便秘及大小便失禁发生,污粪发生率8.3%,大便次数增多发生率12.5%,小肠结肠炎发生率4.2%。结论 CR免疫组化染色与病理检查诊断HD符合率100%,故CR可广泛应用于术前诊断及术后确诊。经肛门直肠结肠切除斜形吻合术有微创、不分离黏膜、出血少、手术时间短的优点,且完整切除全层病变的直肠与结肠,消除直肠肌鞘,术后并发症明显减少,中远期疗效满意,适于婴幼儿先天性巨结肠的治疗。     

P糖蛋白／Caveolin-1在血脑屏障定位及表达特点

目的：研究P糖蛋白在血脑屏障的确切细胞定位,并在形态学上验证P糖蛋白与Caveolin-1的表达部位是否存在相关性.方法：建立脑胶质瘤动物模型,获得标本50%用40g/L多聚甲醛固定后,通过HE染色以及免疫组化的方法证明其生物学特性;另50%制作冰冻切片,分别用FITC（绿色荧光）和TRITC（红色荧光）对Caveolin-1和P糖蛋白进行荧光标记,激光共聚焦显微镜下观察两种蛋白在血脑屏障上的定位及表达特点.结果：①脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面有强的绿色荧光信号表达,而且星型胶质细胞的足突也有一定的绿色荧光信号表达;②Caveolin-1在血管内皮细胞的腔膜面以及基底面均有很强的红色荧光信号表达;③合并图像后发现在内皮细胞的腔膜面及部分腔膜面与基底面的交界处存在两种荧光信号共表达的区域.结论：P-gp除主要表达于脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面外,也部分表达于胶质细胞的足突,共同发挥药物外排功能.从形态学上证实P-gp与Caveolin-1在细胞膜上存在共表达现象,有助于进一步从生化水平上深入研究此两种蛋白在血脑屏障内皮细胞的表达特点及作用机制.     

移植物体重比对左外叶小儿活体肝移植术后短期肝功能的影响

目的 探讨移植物体重比(Graft recipient body weight ratio,GRBW)对小儿活体左外叶肝移植术后短期肝功能恢复的影响.方法 2006年6月至2009年3月共施行活体肝移植25例,其中17例左外叶活体肝移植患儿作为研究对象.分别于术后1～7 d测量患儿肝脏功能,采用SPSS15.0统计软件分析了解GRBW与术后短期肝功能恢复的相关性.结果 ①肝移植术后肝功能恢复良好(P<0.000 1);②GRBW与术后谷丙转氨酶(ALT)变化呈正相关(P<0.05)、与AST变化呈负相关(P<0.05).结论 左外叶小儿活体肝移植GRBW对于术后肝功能恢复意义重大,移植术中应充分保证足够的GRBW比值.     

64排CT在左外叶小儿活体肝移植中移植肝体积测量中的应用

目的 探讨应用64排CT测量左外叶小儿活体肝移植供肝体积与手术中实际切除肝重量的相关性,建立回归方程,为术前估计肝切除重量提供依据.方法 对我院12例左外叶小儿活体肝移植供体肝脏64排CT肝薄层扫描肝静脉期图像进行重建,相应软件计算肝脏体积,换算供肝重量,并与手术中实际切除肝脏重量对比,采用SPSS 15.0进行直线回归分析,并建立回归方程.结果 64排CT肝体积测量值(281.99±52.10)ml与术中切除肝组织重量(248.70±49.46)g存在差异(P<0.05)并显著相关(R=0.905,P<0.001);建立回归方程W术中(g)=0.860×V术前(ml)+6.368.结论 64排CT可用于左外叶小儿活体肝移植术前供肝体积测量,应用回归方程,可较准确地预测术中移植物重量,可为术前确定肝切除范围提供重要参考.