小儿恶性实体肿瘤治疗进展

恶性肿瘤是严重威胁人民生命健康的常见病,我国每年新增恶性肿瘤患者约160万.随着我国经济发展和健康水平提高,传染病疾病、感染性疾病得到有效控制,在我国经济发达地区及大城市,恶性肿瘤已成为儿童疾病死亡首位原因.根据上海1990年统计资料,小儿恶性肿瘤发病率为98.8/100万人口,同期北美和欧州小儿恶性肿瘤发病率分别为122/100万人口及120/100万人口.儿童恶性肿瘤中白血病发病率最高约占总数32%,小儿恶性实体瘤以颅内肿瘤、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、肝母细胞瘤等较为常见.早期诊断、早期治疗、综合治疗是儿童肿瘤诊治的基本原则.综合治疗包括：手术治疗、化疗、放疗、免疫治疗、造血干细胞移植及基因治疗等.     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

儿童实体瘤mdrl的进一步研究

多药耐药 (ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)是指肿瘤对多种结构不同的化疗药物有交叉耐药现象 ,是化疗失败的主要原因 ,多由ｍｄｒ1基因产物Ｐ糖蛋白(Ｐ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｐ ｇｐ)介导。本实验对10 6例各类儿童实体瘤ｍｄｒ1基因产物表达进行研究 ,进一步阐明ｍｄｒ1基因表达情况 ,为临床术前术后化疗提供依据。资料与方法一、临床资料标本取自重庆医科大学儿童医院1992～ 1997年未经化疗存档小儿肿瘤石蜡标本共 10 6例 ,其中包括肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、卵黄囊瘤、胶质瘤等。年龄由 3个月～ 12岁…     

超声微泡造影剂促腺病毒转染mdr1基因的体外实验

目的 研究体外超声微泡造影剂促腺病毒转染mdr1基因的效率.方法 扩增表达mdr1基因的重组腺病毒Ad5-mdr1并与微泡造影剂混合;密度梯度离心法分选兔骨髓单个核细胞,与腺病毒微泡造影剂混合,经超声辐照后常规培养;荧光显微镜下观察细胞内荧光强度表达;RT-PCR法检测骨髓单个核细胞基因组中外源性mdr1基因的表达;免疫组织化学法检测转染细胞中mdr1基因的表达产物.结果 ①转染后b(腺病毒转染组)、c(腺病毒转染+超声辐照组)、d(腺病毒微泡造影剂转染组)及e(腺病毒微泡造影剂转染+超声辐照组)组细胞内均有绿色荧光显示,a(常规培养组)组细胞内未见绿色荧光,e组细胞内荧光强度明显高于各对照组;②RT-PCR法显示,除a组外其余4组在157bp处分别观察到特异性mdr1电泳条带,证实外源性mdr1基因通过腺病毒作为载体整合到细胞基因组中;③免疫组织化学法检测e组细胞P-gp表达阳性率(24%)显著高于a、b、c、d(阳性率分别为0.5%、8.5%、10%、11.5%)各组(P<0.05).结论 体外实验证实,超声微泡造影剂能促进以腺病毒为载体的mdr1基因转染和表达.     

血管瘤发病机制研究

血管瘤是婴幼儿时期最常见的肿瘤，绝大多数为良性，由于所观察的人群及年龄阶段不同，其发生率报道差异较大，有1％～12％，女性发病率高于男性。其发病部位最多见于皮肤和皮下组织，尤其是头颈部皮肤。其次，颅内、肝脏及深部肌肉、骨骼亦可受累，而膀胱和小肠等内脏器官则较少见。据传统形态学分类，血管瘤可分为：毛细血管瘤、海绵状血管瘤、     

腺病毒介导多药耐药基因1保护骨髓的体外实验研究

目的构建表达多药耐药基因1（MDR1）的重组腺病毒载体，体外实验研究MDR1基因对骨髓的保护作用。方法用基因工程技术将MDR1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上，利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组，然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293细胞，并在其中包装、扩增、收获病毒。进一步采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定，利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因，对病毒滴度进行检测。将收集的重组腺病毒Ad5-MDR1感染小鼠单个核细胞，通过荧光显微镜、免疫组化及流式细胞仪对感染效率及保护作用进行检测，并用Westernblot法检测P-gp的表达。结果酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功，病毒滴度达8．3×10^11pfu／ml。对小鼠单个核细胞的感染效率可达10％～15％，转染小鼠单个核细胞48h后，有P-gp蛋白的明显表达。结论成功构建了表达MDR1的重组腺病毒载体，证实MDR转染对骨髓具有保护作用。     

聚焦超声治疗儿童血管病变动物模型的实验研究

目的探讨聚焦超声治疗儿童血管病变动物模型的能效关系及安全性和有效性。方法使用CZP型超声治疗仪样机，选择合适探头焦距，调节功率和时间，对海南灰公鸡鸡冠进行扫描式辐照后，肉眼观察鸡冠及2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色实验、光镜和电镜下观察和超声多普勒检查鸡冠血管层改变。结果①海南灰公鸡鸡冠和儿童血管病变组织结构相似；②2.6w200S和3．6w120s两种剂量辐照鸡冠，作用表皮下血管层的有效率均为100％，表皮不可逆性损伤发生率分别为0、37．5％；③治疗前后两组海南灰公鸡的采食量、水消耗、体重及肛温均无明显改变（P〉0．05）。结论聚焦超声治疗血管病变动物模型的研究显示其可能成为治疗儿童皮肤皮下血管病变的安全有效的新方法之一。     

儿科医院举行论文报告会

我校儿科系小儿外科教研室于1989年1月6日至7日在儿科医院举行第三届(1988)论文报告会。校、系领导,兄弟科室代表及兄弟院校来宾共三十余人到会指导并进行学术交流。     

外源性人多药耐药基因转染对兔骨髓单个核细胞生物学行为的影响

目的:观察外源性人多药耐药基因(human multidrug resistance gene 1, hMDR1)对新西兰兔骨髓单个核细胞(mononuclear cells, MNCs)生物学行为的影响.方法:用携带目的基因hMDR1和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)报告基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-hMDR1-GFP)转染原代培养的MNCs以获取hMDR1基因修饰的MNCs (MNCs-rAd-hMDR1-GFP),荧光显微镜和FCM法检测转染效率;MTT法绘制MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞生长曲线;FCM检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞周期及细胞凋亡情况;RT-PCR及Western印迹法从基因和蛋白水平检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞内hMDR1的表达;柔红霉素(daunorubicin, DNR)泵出实验检测导入hMDR1基因的外排泵生理功能.结果:感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100时,rAd-hMDR1-GFP对MNCs的转染效率为30%～35%,且不影响MNCs增殖生长;FCM结果提示,rAd-hMDR1-GFP对MNCs细胞周期及凋亡无影响(P＞0.05);rAd-hMDR1-GFP转染72 h后hMDR1转录水平和P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)表达水平均明显升高(P＜0.01),且外源性hMDR1能发挥外排泵功能(P＜0.01).结论:rAd-hMDR1-GFP能将外源性hMDR1基因高效导入兔骨髓MNCs并稳定功能性表达,不影响MNCs细胞周期、细胞凋亡及细胞增殖生长等生物学特性,为进一步研究hMDR1基因的骨髓保护作用提供实验依据.