过表达OGCP对鱼藤酮和突变型Parkin致HEK293细胞毒性的保护作用

目的 研究а-酮戊二酸载体蛋白(2-oxoglutarate carrier protein,OGCP)和Parkin对HEK293细胞功能的影响.方法 采用流式细胞术检测经鱼藤酮、OGCP和/或Parkin处理的HEK293细胞细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内活性氧水平.结果 ①野生型Parkin和OGCP能够提高经鱼藤酮诱导的HEK293细胞的线粒体膜电位,降低细胞内活性氧和细胞凋亡率,而突变型Parkin(R42P和T240R)则降低HEK293细胞尤其是经鱼藤酮诱导的HEK293细胞的线粒体膜电位,增加细胞内活性氧,促进细胞凋亡;②此外,还发现OGCP可以抑制由于Parkin突变(R42P和T240R)导致的线粒体膜电位降低和活性氧增加,减少Parkin突变(R42P和T240R)导致的细胞凋亡.结论 ①Parkin蛋白和OGCP可能与维持线粒体正常功能相关;②过表达突变型Parkin(R42P和T240R)蛋白可能抑制线粒体功能,促进细胞凋亡;③过表达OGCP可能对鱼藤酮和突变型Parkin蛋白细胞毒性有一定的保护作用.     

Fisher综合征5例临床分析

Fisher综合征是急性Guillain-Barre综合征(GBS)的一种特殊或变异型,临床较少见,现将临床所见的5例分析如下. 1临床资料 男3例,女2例,年龄25～74岁,平均年龄45.2岁;诱因:上呼吸道感染4例,不明原因1例;首发症状:复视2例,四肢麻木乏力3例;眼肌麻痹5例,其中1例有部分眼内肌麻痹,眼外肌全麻痹4例,部分麻痹1例,核间性眼肌麻痹1例;其他颅神经损害:双侧周围性面瘫1例,舌咽、迷走神经麻痹2例,正常2例;四肢肌力:正常2例,肌力Ⅳ～Ⅴ级3例;肢体感觉:正常3例,四肢末端手套、袜套样痛触觉减退2例;共济失调5例,表现为步态不稳,肌张力降低等;腱反射消失4例,减弱1例.     

Hallervorden—Spatz病的临床和MRI特点（附2例分析）

目的: 探讨苍白球、黑质、红核色素变性的临床和MRI特点.材料和方法: 回顾性分析2例苍白球、黑质、红核色素变性的临床和MRI表现.结果: 主要临床特点: 少年期起病,病情缓慢进展,主要表现为锥体外系症状,均有言语障碍,其中1例有精神障碍、视神经萎缩、步态姿势异常和双侧巴宾斯基征( ); T2 WI均表现为苍白球、黑质等部位对称性低信号,其中1例为"虎眼征".结论: 根据临床和MRI特点可以准确诊断HSD.     

泛素蛋白水解酶体通路与神经系统变性疾病

神经系统变性疾病的一个共同特征就是细胞内与细胞外突变或损害的蛋白异常聚集 ,导致选择性神经元变性与丢失。泛素蛋白水解酶体通路 (UPP)通过泛素依赖的蛋白质水解 ,在处理受损害的和有毒性的蛋白质方面发挥着重要的作用。目前 ,在很多神经系统变性疾病中发现UPP通路受到抑制。     

RNA干扰技术阻断α-synuclein基因过表达诱导的α-synuclein蛋白病理性积聚的研究

目的 构建并筛选针对帕金森病致病基因α-synuclein特异、高效的RNA干扰载体,观察应用RNA干扰技术阻断α-synuclein过表达导致α-synuclein蛋白病理性积聚的作用.方法 采用携带H1启动子的PBSHH1质粒,设计并构建针对α-synuclein基因4个可有效表达发夹状RNA的特异性α-synuclein基因干扰载体pSYNi-1、pSYNi-2、pSYNi-3、pSYNi-4,通过限制性内切酶酶切、DNA测序证实后,转染HEK293细胞,应用Western印迹、逆转录-PER观察干扰载体的有效性,筛选特异、高效的RNA干扰载体.采用脂质2000将筛选的最佳α-synuelein-pBSHH1 RNA 干扰载体及野生型α-synuclein-pEGFP真核细胞表达载体共转染HEK293细胞,并设立对照组,48h后采用Axiovert200型倒置荧光显微镜、荧光免疫细胞化学观察其在细胞内的表达,HE染色观察细胞质内嗜酸性小体的形成.结果 Western印迹、逆转录-PER结果显示,pSYNi-1载体具有高效的RNA干扰抑制作用,效率达69.6%;将α-synuclein-pBSHH1 RNA干扰载体pSYNi-1及野生型α-synuclein-pEGFP真核细胞表达载体转染HEK293细胞,48h后荧光显微镜下观察细胞在波长488 nm蓝色激发光下发出明亮的绿色荧光,其中对照组某些细胞质内出现绿色荧光物质积聚,而转染pSYNi-1干扰组细胞质内绿色荧光物质分布均匀;免疫荧光细胞化学检测结果显示,转染48h后对照组可见α-synuclein免疫阳性产物在胞浆内聚集,转入RNA干扰载体psYNi-1后胞浆内α-synuclein免疫阳性产物分布均匀;HE结果显示,转染48h后,对照组某些细胞质内出现圆形的嗜酸性小体(类Lewy小体)形成;转入RNA干扰载体pSYNi-1后胞浆内未见类Lewy小体形成.结论 RNA干扰技术通过抑制α-synuclein基因的表达,成功阻断了野生型α-synuclein过表达所诱导的α-synuelein蛋白病理性积聚,为最终应用RNA干扰技术临床治疗帕金森病提供了某些依据.     

多巴反应性肌张力障碍GCH1基因突变分析

目的探讨多巴反应性肌张力障碍（dopa responsive dystonia,DRD）三磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ基因（guanosinetriphosphate cyclohydrolaseⅠ,GCH1）的突变。方法应用聚合酶链反应、DNA直接测序和限制性内切酶酶切技术对6例散发DRD患者进行GCH1基因的突变分析,对100名健康对照者进行GCH1基因的PCR和限制性内切酶酶切分析。结果1例患者检测出GCH1基因一个新的点突变151（G→A）,为起始密码子突变,导致所编码的起始氨基酸由蛋氨酸变为异亮氨酸（M1I）而不能起始翻译。100名健康对照者等位基因无此突变。结论发现了GCH1基因一个新的杂合型点突变151（G→A）,我国散发DRD患者中存在GCH1基因突变。     

中国汉族帕金森病人群 SLC18A2 基因 P387L 突变的遗传学分析

目的：SLC18A2基因的P387L突变在中国汉族散发性帕金森病人群的关联研究。方法：在931例汉族人群 中(包括455例散发性帕金森病患者和476例正常对照者)应用飞行时间质谱分析(matrix-assisted laser desorption/ionization- time-of-fl ight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术测定P387L基因型,并应用Sanger测序的方法对结果进一步验证。 同时采用病例-对照研究,探索该突变与散发性帕金森病的关联。结果：在本组931个研究个体中均未发现该突变位 点。结论：该突变位点在中国汉族人群中很罕见,可能并非中国汉族散发性帕金森病人群的致病突变位点,该突变 位点与帕金森病之间的关联尚需扩大样本及在其他种族人群中进行验证。     

良性家族性婴儿惊厥一家系的临床及基因定位初步研究

良性家族性婴儿惊厥（BFIC）是一种呈常染色体显性遗传的特发性癫痫综合征。我们发现一个伴发作性运动障碍和再发癫痫的中国人BFIC家系，采用连锁分析方法对该家系的致病基因进行了排除定位研究。