改良PCR-ELISA的建立及初步应用

目的　建立操作简单、灵敏、特异的PCR -ELISA。方法　采用短DNA片段扩增 ,其中上游引物 5′端标记有生物素 ,使PCR扩增产物的一条链上带有生物素 ,随着PCR反应的结束 ,PCR反应液中的地高辛标记的探针与PCR产物中的生物素标记的DNA链杂交 ,形成杂交产物 ,然后杂交产物通过生物素与微孔板上固定的链霉亲合素结合 ,被固定在微孔板上 ,最后用ELISA检测被固定的杂交产物。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,对 10 0例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBSAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清 10 0 %(30 /30 )检出HBVDNA ;HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 78 6 %(2 2 /2 8) ;HBsAg(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 6 6 7%(16 /2 4) ,其余为阴性。非乙型肝炎血清的结果均为阴性。结论　该PCR -ELISA操作简单 ,方法灵敏、特异。     

DNA随机扩增多态性分析技术在枸杞道地药材鉴别中的应用

目的:对宁夏和内蒙两个地区的枸杞DNA进行分子标记分析,获得DNA指纹谱。方法:用随机扩增多态DNA(RNAD)标记方法对宁夏和内蒙不同来源地的枸杞进行遗传多样性分析。结果:用 RAPD标记方法可以从DNA分子水平看出宁夏枸杞与内蒙枸杞的差异,结论:本法可为枸杞道地品种鉴别提供依据。     

巢式竞争DNA模板的制备方法

0　引言　我们建立了巢式竞争 PCR定量方法进行血清HBV DNA定量扩增 [1 ] .在该实验中我们采用了简便的长引物引导扩增方法制备了特殊的巢式竞争 DNA模板 .1　材料和方法1. 1　材料　我们对 HBV DNA C区 186 5 - 2 45 8区段进行巢式扩增定量 ,而巢式扩增片段长度为 5 5 9bp.按文献 HBVDNA序列 [2 ] ,用 oligo引物设计软件和 www.ncbi.nlm.nih.gov DNA同源性数据库分析设计巢式引物 .两外侧引物分别为 :b1:(上游 186 5 - 1883) 5′caagcctccaagctgtgcc3′,b2 (下游2 45 8- 2 44 0 ) 5′atactaacattgagattcc 3′;两内侧引物分别为…     

输血不良反应的原因分析与护理

输血作为救治病人的一种重要方法，已被临床广泛应用。因此，输血不良反应理应得到医护人员高度重视。作为临床护理工作者，在执行输血医嘱时，除了要严格遵守护理常规，更要掌握输注不同血液制品发生的常见输血不良反应及应急护理措施。本文通过对某医院一年的输血反应病例进行了回顾性调查，对输血护理工作要点进行分析讨论。     

非小细胞肺癌组织端粒酶的活性

1　材料和方法1.1　材料　组织标本由西安交通大学第二医院胸外科提供 .每例标本分两份 ,一份进行病理分析 ,一份液氮冷冻进行端粒酶检测 .非小细胞肺癌组织标本 47例 ,不典型增生组织 2 8例以及正常组织标本 2 0例 .并且对癌症患者随访 30 mo.1.2　方法 [1 ,2 ]　冻存组织用冰冻低温切片机将活检组织标本切成 15 μm厚的切片 ,将 10切片于冰裂解液中裂解 30 m in,于 4℃下 12 0 0 0× g离心 30 m in,提取上清液并测定其蛋白浓度 (标准浓度 1～ 5 0 g· L- 1 ) .取 2 μL 提取液与 PCR反应液中作用引物反应 30 m in后 ,进行 PCR扩增 ,扩…     

急性大出血患者输注冷沉淀的疗效观察及护理

目的：探讨IC U急性大出血患者输注冷沉淀的临床疗效及护理。方法回顾性调查本市某医院2013年ICU收治的急性大出血患者69例,观察冷沉淀输注前、后3 d内最近1次的凝血酶原时间（PT ）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（Fg）、抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）变化。结果与输注前相比,PT、TT明显缩短,Fg、ATⅢ含量增加,APTT无明显变化。输注前PT（18．63 ± 8．91）s、TT（24．2±10．08）s、Fg（1．57 ± 1．93） g／L、ATⅢ（53．84±26．72）％和输注后PT（15．03 ± 4．48）s、TT（20．31 ± 5．60）s、Fg（2．31 ± 1．34）g／L、ATⅢ（66．19±21．70）％（均为 P＜0．05）;输注前APTT（49．51±25．24）s和输注后APTT（44．93±19．63）s差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 ICU急性大出血患者抢救时经科学、合理、有效的输注冷沉淀,提供相应的护理,可改善患者的凝血功能,取得较好的止血效果,提高患者生存率。     

胃癌及癌前病变粘膜中呈高表达6个基因片段的筛选及其临床意义

目的　筛选数个在胃癌及癌前病变粘膜中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义．方法　以筛选出的ｇｃｙｓ１ 至ｇｃｙｓ１８ 的新基因片段作为研究对象,采用定量ＲＴＰＣＲ 技术检测４８ 例胃癌、１６ 例其他肿瘤及１１０ 例活检的胃粘膜标本．结果　①在４８ 例胃癌中,表达检出率高的６ 个片段依次为：ｇｃｙｓ１０ 为９０－５ ％ ,ｇｃｙｓ１ 为８０－９ ％ ,ｇｃｙｓ１８ 为６９－５ ％ ,ｇｃｙｓ１１为６１－９ ％ ,ｇｃｙｓ４ 为４２－８ ％ ,ｇｃｙｓ８ 为３５－７ ％ ,在癌旁组织中检出率＜ １０ ％ ;６ 个片段的检出率在胃癌及癌旁组织中存在显著性差异（ Ｐ ＜ ０－０１） ;②在１６ 例其他肿瘤中, 表达率依次为：ｇｃｙｓ１０ 为３７－５ ％ ,ｇｃｙｓ１ 为１４－３ ％ ,ｇｃｙｓ１８ 为２７－５ ％ ,ｇｃｙｓ１１为４３－７ ％ ,ｇｃｙｓ４ 为１４－３ ％ ,ｇｃｙｓ８ 为３１－３ ％ ;③３３ 例萎缩性胃炎中,表达率依次为：ｇｃｙｓ１０ 是４０－５ ％ ,ｇｃｙｓ１ 是１６－７ ％ ,ｇｃｙｓ１８ 为４４－５ ％ ,ｇｃｙｓ１１ 为４３－３ ％ ,ｇｃｙｓ４ 为３３－３ ％ ,ｇｃｙｓ８为４８－３ ％ ;２８ 例肠腺化生     

用分级定量RT-PCR测定中国人血清中HCV RNA

基因的定量分析对分子生物的研究有着重要的作用,而采用ＰＣＲ方法进行基因定量已成为一种有效的方式．并且,目前已有多种利用ＰＣＲ进行基因定量的方法,其中以竞争ＰＣＲ定量和ＰＥ公司既时定量ＰＣＲ方法测定结果较为准确,应用较多既时定量ＰＣＲ方法采用了特殊设计的荧光－淬灭探针和精密的既时荧光检测设备进行定量．该方法简化的操作,提高的测定的灵敏性和准确性,但其试剂和仪器的价值目前相当昂贵,一般实验室难于承担［１］．而竞争ＰＣＲ方法虽然操作比较麻烦,但也能进行较准确的定量,适合一般实验室使用,为了进一步简化竞…     

煮沸法抽提汉坦病毒RNA方法的建立及初步应用

肾综合征出血热(Haemorrhagic FeverWith Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的人类急性传染病,早期快速检测汉坦病毒(Hantavirus)是有效诊治的关键,在聚合酶反应(PCR)应用于出血热快诊中,抽提汉坦病毒RNA是十分关键的一步,传统抽提RNA是用异硫氰酸胍裂解法,需经过酚/氯仿抽提及酒精沉淀,操作流程繁琐。我们尝试用煮沸法抽提取汉坦病毒RNA,并对其临床应用进行了分析,现报告如下。