多重PCR扩增HBVDNA，HCVRNA和HDVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ，ＨＣＶＲＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；丁型肝炎病毒中图号Ｑ５２３乙型肝炎病毒（ＮＢＶ）和丙型...     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因序列变异分析

为了研究西安地区丙型肝炎病毒基因组中Ｃ区基因的变异性,采用单链构象多态性（ｓｉｎｇｌｅ－ＳｔｒａｎｄＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＳＳＣＰ）分析方法,对３６份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清的ＰＣＲ产物进行分析,结果有３１份样品的ＳＳＣＰ图谱同,对其中二份样品进行测序,证明序是相同的;     

全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制

目的 研究一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂。方法 使用一个生物素标记的上游引物,对HBV DNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面,用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交,而后加底物显色,测定吸光度进行分级定量分析。结果 该定量方法可以检测10拷贝数的模板,而且对简单处理的标本适应性强;以分级定量的形式定量时,具有良好的重复性。结论 该试剂适用于仪器操作,可对临床血清中HBV DNA进行分级定量分析。     

DNA随机扩增多态性分析技术在枸杞道地药材鉴别中的应用

目的:对宁夏和内蒙两个地区的枸杞DNA进行分子标记分析,获得DNA指纹谱。方法:用随机扩增多态DNA(RNAD)标记方法对宁夏和内蒙不同来源地的枸杞进行遗传多样性分析。结果:用 RAPD标记方法可以从DNA分子水平看出宁夏枸杞与内蒙枸杞的差异,结论:本法可为枸杞道地品种鉴别提供依据。     

多重PCR扩增伤寒杆菌、痢疾杆菌和霍乱弧菌特异基因片段方法的建立

多重ＰＣＲ扩增伤寒杆菌、痢疾杆菌和霍乱弧菌特异基因片段方法的建立肖乐义，阎小君，侯瑜，张瑞骞，苏成芝，郭晏海，李陕区，刘君，陈远鑫（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３河南省周口地区卫生防疫站）关键词聚合酶链反应；伤寒沙门氏菌；痢疾志贺氏菌；霍...     

巢式竞争DNA模板的制备方法

0　引言　我们建立了巢式竞争 PCR定量方法进行血清HBV DNA定量扩增 [1 ] .在该实验中我们采用了简便的长引物引导扩增方法制备了特殊的巢式竞争 DNA模板 .1　材料和方法1. 1　材料　我们对 HBV DNA C区 186 5 - 2 45 8区段进行巢式扩增定量 ,而巢式扩增片段长度为 5 5 9bp.按文献 HBVDNA序列 [2 ] ,用 oligo引物设计软件和 www.ncbi.nlm.nih.gov DNA同源性数据库分析设计巢式引物 .两外侧引物分别为 :b1:(上游 186 5 - 1883) 5′caagcctccaagctgtgcc3′,b2 (下游2 45 8- 2 44 0 ) 5′atactaacattgagattcc 3′;两内侧引物分别为…     

输血不良反应的原因分析与护理

输血作为救治病人的一种重要方法，已被临床广泛应用。因此，输血不良反应理应得到医护人员高度重视。作为临床护理工作者，在执行输血医嘱时，除了要严格遵守护理常规，更要掌握输注不同血液制品发生的常见输血不良反应及应急护理措施。本文通过对某医院一年的输血反应病例进行了回顾性调查，对输血护理工作要点进行分析讨论。     

定量检测Hp cagA基因内参标模板的构建及测序

目的构建竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌(Hp)cagA基因的内参标模板并做序列测定.方法根据cagA基因及Lac Ⅰ蛋白的特异性结合部位的序列,设计二对PCR引物(cagAp1,cagAp2,cagAp3,cagAp4)其中cagAp1及cagAp3用于扩增cagA基因2593～2788位碱基间196 bp的片段,cagAp2及cagAp4用于扩增2789～2993位碱基之间204 bp的核酸片段;在cagAp1的5'-端引入了BamHⅠ的限制性酶切位点,在cagAp2的5'-端结合了Sal Ⅰ的限制性酶切点.在cagAp3的5'-端引入Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列(21bp),在cagAp4的5'-端结合了cagAp3之5'-端21个碱基的反义DNA序列利用重组PCR,将乳糖操纵子中Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列重组入cagA基因400bp的片段中,得到cagA基因片段的重组体(rfcagA).将重组rfcagA定向克隆入pUC19进行序列测定.结果用DNA序列分析仪双向测定rfcagA的序列,其含400bp的cagA片段及Lac Ⅰ蛋白特异性结合部位的序列(21 bp),一级结构完全正确.结论内参标模板rfcagA构建,对竞争性定量PCR检测HpcagA基因的方法的建立具有重要价值.     

一步短片段RT-PCR方法检测HCV RNA

目的：为了简化传统ＲＴ－ＰＣＲ操作步骤。方法：利用Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶具有一定的反转录酶活性的特点,对ＨＣＶ ＲＮＡ短序列进行反转当,并对合成的ｃＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增。结果：本法简化了传统ＲＴ－ＰＣＲ操作步骤,提高了结果的稳定性。结论：本法可用于ＨＣＶ ＲＮＡ以及其它ＲＮＡ的临床诊断。     

分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量