吉西他滨对CD34+CD38-髓系白血病干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 目的：探讨与阿糖胞苷(Ara-C)结构相似的新型脱氧胞苷相似物和核苷还原酶抑制剂--吉西他滨(gemeitabine,GEM)对CD34+CD38-KG1a髓系白血病干细胞(LSCs)增殖抑制和诱导凋亡的影响。方法：流式细胞术检测急性髓系白血病KG1a细胞表面CD34和CD38的表达; 24 h和持续用药软琼脂克隆形成实验观察不同浓度GEM对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同浓度GEM对KG1a细胞周期的影响,Annexin V/PI双染法检测不同浓度GEM对KG1a细胞凋亡的影响。结果：急性髓系白血病KG1a细胞中CD34+ CD38-占(98.02±0.72)%。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L的GEM分别作用KG1a细胞24 h、48 h和72 h后, 0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞高于盐水对照组 (P<0.05),而0.05 mg/L 和0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,软琼脂培养第14 d和21d后, 0.1 mg/L和0.5 mg/L组形成的克隆数,低于盐水对照组 (P<0.05), 0.05 mg/L GEM组14 d、21 d的克隆数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L GEM和Ara-C持续作用组,软琼脂培养14 d和21d均未见集落生长,与对照组相比差异显著(P<0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞后其凋亡率与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05）,而0.5 mg/L GEM作用24 h后KG1a细胞凋亡率显著高于盐水对照组（P<0.05）。结论：GEM能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和克隆形成,并将CD34+CD38-KG1a细胞阻滞在G0/G1期和诱导其凋亡。     

Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨

目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.     

供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体对造血干细胞移植预后的影响

目的 观察供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（aKIR）对受者造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 1996年至2001年共行亲缘性人类白细胞抗原（HLA）全相合骨髓移植59例，以序列特异性引物多聚酶链反应法（SSP-PCR）检测供者aKIR的表型。分析供者表达aKIR对受者移植后病毒、细菌和真菌感染及出血、复发、存活情况的影响。结果 供者表达aKIR与受者移植后出血、病毒及细菌感染发生的概率无明显相关性；当供者表达KIR3DS1表型时，发生真菌感染概率增高（X^4．804，P=0．028）。供者表达aKIR对受者HSCT后存活率和白血病复发率均无明显影响。结论 亲缘性HLA全相合HSCT中，供者表达aKIR并不能改善受者的移植效果。     

γ射线照射预防供者淋巴细胞输注相关移植物抗宿主病的实验研究

作者通过观察６０Ｃｏγ射线照射对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖活性的影响,借助于动物模型证实了γ射线照射对供者淋巴细胞输注（ＤＬＩ）相关ＧＶＨＤ的预防作用,试图探索γ射线照射能够最大程度地去除Ｔ细胞增殖活性,避免移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）发生而不损害ＤＬＩ抗白血病作用的适宜剂量和方法。材料和方法：（１）动物：近交系Ｂａｌｂ／Ｃ（Ｈ２ｄ）,８～９周龄及出生４８～７２小时的６１５Ｈ２Ｋ／Ｂａｌｂ／ＣＨ－２ｄＦ１小鼠。（２）ＧＶＨＤ动物模型：参照孟玉茹等（中华血液学杂志,１９９３,１４：５６４）方法,稍作改…     

过继性生物-化疗对难治性恶性黑色素瘤的治疗

组成肿瘤包块细胞的异质性(不同代龄、不同分化程度、不同周期，甚至两种类型)，构成了对同一种治疗的不同敏感性和低抗性，决定了对恶性肿瘤应采用多种方法综合治疗和有计划治疗的策略。     

基于HPLC指纹图谱和多成分定量的玄参质量评价研究

目的 建立玄参Scrophularia ningpoensis的HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法。方法 采用HPLC法建立浙江、湖北、四川、安徽等9个省份116批玄参指纹图谱,进行相似度评价,结合聚类分析（hierarchical cluster analysis,HCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）对玄参进行化学模式识别分析。同时对8个活性成分（桃叶珊瑚苷、哈巴苷、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸、类叶升麻苷、安格洛苷C、哈巴俄苷）进行含量测定,分析其与生境因子的相关性。结果 建立了116批玄参的指纹图谱,相似度为0.746～0.997,共标定34个共有峰。聚类分析将116批玄参分为4类,OPLS-DA分析能有效地将3个传统道地产区玄参与非道地产区玄参进行区分（Q2>0.5）。不同产地玄参中化学成分含量存在差异,与海拔、经纬度存在相关性。结论 建立的玄参HPLC指纹图谱及多成分含量分析方法稳定、可靠,结合化学识别模式可为玄参药材的产地判别及质量评价提供参考...     

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。     

热化疗对K562细胞体外增敏作用的实验研究

目的观察热疗联合阿霉素对人慢性白血病细胞株K562细胞内的药物浓度变化及凋亡的影响。方法MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40、41、42℃,体外作用于K562细胞。作用前及作用48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及细胞内药物浓度的变化。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果作用48h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度。热化疗组对K562细胞有明显的抑制作用(P<0.01),随着温度的增高而增强;热化疗组细胞内的药物浓度明显增加(P<0.01)。结论热疗联合阿霉素能增加K562细胞内的药物浓度,提高肿瘤细胞的凋亡率。     

以SEAM预处理方案行自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤

背景:造血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤前,预处理方案对移植效果至关重要.目前经典BEAM方案中的药物卡莫司汀在国内不易购得,且该方案毒副作用较大,复发率较高.目的:以司莫司汀取代卡莫司汀组成SEAM预处理方案,观察自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤的效果.设计、时间及地点:病例分析,于2003-06/2006-02和解放军成都军区昆明总医院血液科进行.对象:选取同期收治的15例Ⅲ～Ⅳ期非何杰金淋巴瘤患者,男13例,女2例,平均年龄43.8岁,均经过2～8个疗程的制化疗,CR1 4例,CR2 1例,部分缓解10例;病理证实T细胞淋巴痛3例,弥漫大B细胞淋巴瘤12例;移植前复查肝肾功能及肺功能均正常.组成SEAM预处理方案的4种药物:司莫司汀(Semustine)为浙江瑞新公司产品,批号20071 125;足叶乙甙(Etopside)为江苏恒瑞公司产品,批号07101231:阿糖胞苷(Ara-C)为浙江海正公司产品,批号080103A;马法兰(Mephalan)为葛兰素史克产品,批号7001.方法:皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子动员后12 d采集患者外周血干细胞,与羟乙基淀粉、人血白蛋白及二甲基亚砜配成冻存液移植备用.动员后1个月行自体外周血干细胞移植,移植前患者行SEAM预处理方案:移植前8 d门服司莫司汀320 mg/m2.移植前7 d-移植前4 d,静滴足叶乙甙200 mg/m3,1次/d;静滴阿糖胞苷200 mg/m2,1次/12 h.移植前3 d～移植前2 d,静滴马法兰70 mg/m2,1次/d.移植当天将预先冻存的自体外周血干细胞水浴解冻,经锁骨下静脉插管快速回输给患者,一般输注细胞量为(3.0～5.0)×108/kg.主要观察指标:①预处理的毒副作用.②移植后造血功能恢复.③疾病转归. 结果:SEAM颅处理过程中15例患者均出现不同程度消化道反应,1例出现心动过速,3例出现肝功能损害.所有患者在自体外周血干细胞移植后造血功能均快速重建.中件粒细胞计数≥0.5×109L-1的中位时间为11 d,血小板计数≥20×109 L-1的中位时间为13 d.中位随访时间39个月,13例患者无病存活,2例分别于移植后4,13个月死于疾病复发.结论:非何杰金淋巴瘤患者对SEAM预处理方案耐受性好,该方案毒副作用轻微,造血重建恢复较快,目前随访治疗效果较好.     

异基因供者淋巴细胞输注抗白血病作用研究进展

供者淋巴细胞输注 (DL I)目前已成为骨髓移植后复发患者的重要治疗手段 ,DL I在受者体内所介导的这种抗白血病作用 ,与输入的异基因免疫活性细胞诱导的过继性免疫反应有关 ,现就这一领域的研究加以综述。1　供者淋巴细胞输注 (DL I)的临床意义自 Kolb[1 ] 1990年报告首例异基因骨髓移植 (allo- BMT)后复发慢性髓性白血病 (CML )患者 ,采用供者白细胞输注诱导再次细胞学完全缓解后 ,人们对 DL I介导的过继性免疫反应产生了极大兴趣。临床单独应用供者淋巴细胞输注诱导抗白血病作用 ,或同时结合干扰素治疗细胞遗传学甚至血液学复发的C…