牛皮癣并发骨髓重度受抑患者与急性再生障碍性贫血患者血液形态学的比较

1 资料与方法 1999-2002年本院血液内科收治的以全血细胞减少为主要症状的12例患者,其共同特点是均患有牛皮癣,而且此次住院前都有在个体诊所服中药史,诊断为药物所致造成的骨髓抑制,后经合理治疗痊愈,其中男7例,女5例.另外收集20例急性再障患者.分别在入院治疗2周左右时采集骨髓进行涂片、骨髓活检;末梢血采集进行常规涂片,瑞姬氏染色.选择取材、涂片、染色良好的骨髓片、血片,在1000×下进行血细胞分类计数;另外采末梢血进行血常规检测.     

治疗牛皮癣的药物致骨髓重度受抑与急性再生障碍性贫血的鉴别

目的：进一步探讨临床应用牛皮癣药物导致的骨髓重度受抑与急性再生障碍性贫血（以下简称急性再障）之间的实验室鉴别诊断的主要依据。方法：药物导致的骨髓重度受抑和急性再障患者行骨髓涂片、骨髓活检和末梢血涂片瑞姬氏染色后进行骨髓象和血象的检测；另外采静脉血应用血细胞自动化分析仪进行血常规检测。结果：治疗牛皮癣药物导致的骨髓重度受抑与急性再障患者外周血象极为相似，但骨髓重度受抑患者的骨髓涂片、活检不同于急性再障患者的显示，各系、各阶段有核细胞比例大致正常，巨核细胞、血小板数量虽少但还可见；此类药物导致的骨髓重度受抑患者骨髓涂片的骨髓小粒并不少，且虽有部分空虚，但其中网络的是三系造血细胞。结论：通过了解病史和使用牛皮癣药物的治疗史，骨髓象和血象的实验室分析，可以进一步找出此类药物导致的骨髓重度受抑与急性再障之间的实验室鉴别依据。     

硫唑嘌呤在胰腺癌动物模型制作中的应用

目的筛选建立胰腺癌动物模型最适合成瘤的硫唑嘌呤(AZA)浓度。方法将40只SD大鼠按照AZA浓度的不同分为5组:空白对照组(A组)、2.6mg/kg AZA组(B组)、2.2mg/kg AZA组(C组)、1.8mg/kg AZA组(D组)、1.4mg/kgAZA组(E组),每组8只。A组每天灌服2mL生理盐水,B、C、D、E组每天灌服相应浓度的AZA生理盐水液2mL。第30天后进行SD大鼠皮下移植Mia PACAⅡ胰腺癌细胞悬液,通过检测大鼠血浆CA24-2和制作胰腺组织病理切片的方法来判断其是否成瘤。结果接种胰腺癌细胞后的第15、20、25、30天,各造模组大鼠血中的CA24-2水平均有不同程度的升高,其中B组在移植后的第15、20、25、30天,体内CA24-2水平分别为(51.56±2.14)、(51.61±1.21)、(54.66±1.02)、(56.00±0.38)U/mL,与C、D、E组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且成瘤率最高,为83.3%。此外,胰腺病理切片镜下显示细胞核畸形、细胞大小不等,可见双核细胞及1～2个核仁,细胞核大且深染等病理特征,同时发现在移植部位的淋巴结和胰腺周围的淋巴结肿大。结论当AZA浓度为2.6mg/kg时,最有利于制作大鼠胰腺癌模型。     

优化急诊护理路径提高急性冠状动脉综合征患者的抢救效果

目的：探讨急性冠状动脉综合征诊治的有效临床护理路径方法与疗效。方法将2010年1月至2013年1月收治的急性冠状动脉综合征患者128例随机分作对照组（ n ＝64）与观察组（ n ＝64），对照组实施常规急诊护理路径，观察组实施优化急诊护理路径，对2组病患抢救的介入时间、发病到冠脉再灌的时间、再灌开始、住院的平均时长、抢救的成功几率，护理缺陷以及护理满意度进行对比分析。结果观察组抢救介入时间、开始冠脉再灌注治疗时间、住院时间等均少于对照组（ P ＜0抖．05），2组的护理流程缺陷与患者满意度差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论优化急诊护理路径在急性冠脉综合征患者救治中，可显著缩短抢救时间、改善护理缺陷、提高患者护理满意度，值得在临床上予以借鉴。     

辅助比例通气的研究进展

机械通气是纠正低氧血症和/或二氧化碳潴留的重要辅助手段,与传统通气模式相比,近年来提出的辅助比例通气(PAV)在改善肺通气的同时,可矫正患者呼吸努力与通气效果之间的生理变化关系,从而使通气质量得到改善和提高,可能具有良好的应用前景。     

急性肺损伤小鼠外周血树突状细胞数量及功能状态的变化

目的 探讨急性肺损伤(ALI)小鼠外周血树突状细胞(DC)数量及功能状态的变化.方法 雄性SPF级C57BL/6小鼠36只,6～8周龄,体重18～22 g,采用随机数字表法,将小鼠分为2组(n=18):对照组(C组)和ALI组.ALI组气管内注射脂多糖2 mg/kg,以制备ALI模型,C组注入等容量的PBS.于注入LPS或PBS后6、12和24 h(T1-T3)时随机取6只小鼠,麻醉后开胸取右心室血样,采用流式细胞仪检测外周血DC数量及DC表达CD80、MHCⅡ的水平;随后处死小鼠,取肺组织,计算湿重/体重(WW/BW)比,光镜下观察病理学结果,行肺损伤评分,采用ELISA法检测肺组织IL-6含量.结果ALI组可见肺泡间隔增宽、充血、出血及大量炎性细胞浸润等病理改变.与C组比较,ALI组各时点肺组织WW/BW比、IL-6含量、肺损伤评分升高,T1时外周血DC数量减少,T3时增多,T2、T3时DC表达MHCⅡ水平上调(P＜0.05).与T1时比较,ALI组T2时肺组织IL-6含量升高,T2、T3时外周血DC数量增多,DC表达MHCⅡ水平上调(P＜0.05);与T2时比较,ALI组T3时外周血DC数量增多(P＜0.05);2组各时点外周血DC表达CD80水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ALI小鼠外周血DC数量早期减少,随后逐渐增多,功能呈渐成熟状态.     

不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。     

冻存复苏条件对髓性白血病细胞株生物学特性的影响

目的:采用不同方法对白血病HL60细胞株进行冻存和复苏,观察生物学特性改变,筛选最佳冻存复苏方案。方法:实验于2006-04/06在吉林医药学院临床检验实验室(国家三级标准)进行。①HL60细胞株由中国科学院上海生物细胞研究所提供。将欲冷冻保存的HL60细胞调整到良好的生长状态(对数生长期),随机数字表法分成4组,离心收集后在含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养基中分别加入二甲基亚砜,使其终浓度依次为50,100,150,200g/L。冻存15d后,每组取1支冻存管复苏并接种于细胞培养板,培养12h后用锥虫蓝拒染法计算细胞复苏率。②选择冻存条件和冻存细胞密度相同的两支冻存管,按不同方法进行HL60细胞复苏。37℃水浴传统复苏法:立即将冻存管置于37℃水浴中,待融化后800r/min离心5min,吸去上清液,加入含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养基,混匀后接种于细胞培养板,1mL/孔,9孔/组,置于体积分数为0.05的CO2培养箱37℃继续培养。40℃溶解后再37℃恒温改良复苏法:将冻存细胞于40℃水浴中迅速溶解,转入37℃水浴箱,融化后离心、加培养基等操作同传统复苏法。复苏细胞培养12h后采用锥虫蓝染色计算细胞存活率。③用无血清RPMI-1640培养基制备HL60细胞悬液,按3×107L-1密度接种于细胞培养板中,1mL/孔,然后分别加入体积分数为0.05,0.1,0.12,0.15,0.2的灭活小牛血清,每种血清浓度设置8个试验孔,并分别于培养12,24,36,48,60,72,84,96h后计数每孔细胞数量,并绘制细胞生长曲线。结果:①不同浓度二甲基亚砜冻存后HL60细胞复苏率的比较:二甲基亚砜200g/L组的细胞复苏率明显低于二甲基亚砜50,100,150g/L组[(64.6±2.8)%,(87.0±1.4)%,(86.4±2.1)%,(85.7±2.8)%;t=25.44,P<0.01],二甲基亚砜50,100,150g/L组间差异无显著性意义(t=0.82～1.44,P>0.05)。②不同复苏方法HL60细胞存活率的比较:与37℃水浴传统复苏法比较,40℃溶解后再37℃恒温改良复苏法的细胞存活率显著升高[(69.5±1.5)%,(87.4±1.8)%,t=23.24,P<0.01]。③RPMI-1640培养基不同血清含量对HL60细胞生长情况的影响:在体积分数为0.05的血清含量培养基中,HL60细胞基本不生长,且有逐渐死亡的趋势;在体积分数为0.1的血清含量培养基中,HL60细胞生长趋势明显,但生长速度相对较慢;在体积分数为0.12,0.15,0.2的血清含量培养基中,HL60细胞生长迅速,3种血清浓度间细胞生长趋势无明显差异。结论:以50g/L二甲基亚砜作为HL60细胞冻存保护剂、联合40℃溶解后再37℃恒温改良复苏法可使细胞保持最佳生物学特性,体积分数为0.12的血清含量为HL60细胞常规培养的最适浓度。     

人羊水间充质干细胞分离培养方法的优化

背景：目前关于人羊水间充质干细胞的体外分离培养方法不一,获得较多数量的间充质干细胞仍有困难。目的：分离80份羊水标本,比较不同的体外培养方法,优化筛选到一种合适的培养纯化条件,为人羊水间充质干细胞的基础研究和临床广泛应用奠定基础。方法：无菌条件下采集足月分娩和终止妊娠引产的羊水,分离羊水细胞,比较孕期、不同培养基、接种密度、首次换液时间对人羊水间充质干细胞原代培养过程的影响,通过细胞化学染色方法检测细胞代谢情况,观察人羊水间充质干细胞的生物学特性。结果与结论：相同培养条件下,采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基,以5×104/cm2的密度接种,首次换液时间为6d时,人羊水间充质干细胞原代培养成功率较高。孕期为14～20周的人羊水间充质干细胞培养成功率高于晚期妊娠（21～36周）及足月分娩（37～42周）的羊水。人羊水间充质干细胞强表达过碘酸-雪夫、酸性磷酸酶、酸性α-醋酸萘酚酯酶染色,弱表达中性粒细胞碱性磷酸酶,不表达过氧化酶、苏丹黑染色。提示,优化筛选到一种合适的人羊水间充质干细胞培养纯化条件。     

十年循证和感染性休克治疗的进步

早期目标导向治疗 休克的本质是有效循环血量减少导致的组织缺氧,治疗的根本目标就在于改善组织缺氧,而前提则依赖于循环稳定.早期目标导向治疗(EGDF)的提出是近十多年来感染性休克治疗的重要进步.2001年Rivers等发表单中心随机对照研究表明,若能在严重感染发生6h内实现EGDF复苏目标,严重感染的28d病死率能从49.2％降低到33.3％,60d病死率将从56.9％降低到44.3％.