基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎大鼠的影响及作用机制

目的 探讨半夏泻心汤通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）-核因子E₂相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路防治慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法 取SD大鼠,除12只正常组大鼠外,其余大鼠联合造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎（CAG）模型,造模成功后随即分为模型组,维酶素组（VG,60 mg·kg^-1）及半夏泻心汤高、中、低剂量组（280,140,70 mg·kg^-1）,分别相当于半夏泻心汤生药量28,14,7 g·kg^-1。正常组及模型组大鼠给予等体积的蒸馏水,各治疗组给予相应容积的药物灌胃。治疗12周后采用苏木素-伊红（HE）染色法观察CAG大鼠胃黏膜病理变化情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测CAG大鼠胃黏膜中Nrf2,醌氧化还原酶-1（NQO1）,谷胱甘肽-S-转移酶（GST）蛋白及mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平升高（P<0.05）,胃黏膜萎缩,甚至肠化。与模型组比较,维酶素组及半夏泻心汤高、中剂量组Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05）,胃黏膜萎缩、肠化情况明显改善,且以高剂量组改善最为明显,但半夏泻心汤低剂量组作用不明显。结论 半夏泻心汤降低Nrf2的转录活性,关闭Nrf2信号通路,降低NQO1,GST的表达水平,实现正常的氧化-抗氧化平衡可能是其治疗CAG的作用机制之一。     

通腑泻热灌肠合剂对黏连性肠梗阻大鼠肠黏连及血清ET、IL-4、IL-10的影响

目的：观察通腑泻热灌肠合剂对大鼠肠黏连模型血清ET、IL-4、IL-10水平的影响,评估灌肠合剂治疗黏连性肠梗阻的作用及其对肠屏障的保护作用。方法：将SD大鼠随机分为中药灌肠高剂量组、中药灌肠低剂量组、生理盐水组、假手术组及正常组,术后14天分别测定各组大鼠血清ET、IL-4、IL-10含量并记录大鼠肠黏连级别,探讨其治疗、预防黏连性肠梗阻的作用机制。结果：生理盐水组所含ET水平明显高于其他各组,高剂量与低剂量灌肠组通过通腑泻热灌肠后,ET水平明显下降（P〈0．05）;而假手术组、正常组ET水平也低于生理盐水组（P〈0．05）。生理盐水组所含IL-4水平较低,而高剂量灌肠组所含IL-4水平明显高于生理盐水组（P〈0．01）;低剂量灌肠组所含IL-4水平高于生理盐水组（P〈0．05）;高剂量灌肠组所含IL-4水平明显高于假手术组（P〈0．01）;低剂量灌肠组所含IL-4水平高于假手术组（P〈0．05）;而生理盐水纽所舍IL-4水平低于假手术组（P〈0．05）。生理盐水组IL-10水平较低,而高剂量、低剂量灌肠组及假手术组、正常组所含IL-10水平均高于生理盐水组（P〈0．05）;与假手术组相比,高剂量、低剂量灌肠组所含IL-10水平稍高于假手术组（P〉0．05）,无统计学意义;而生理盐水组所含IL-10水平低于假手术组（P〈0．05）。结论：通腑泻热灌肠合剂能降低术后肠黏连级别,对预防及治疗黏连性肠梗阻具有较好的效果,能有效地保护肠屏障功能。     

补肾活血方对肾虚血瘀型子宫内膜增生症大鼠的作用及机制研究

目的 探讨补肾活血方（巴戟天、菟丝子、沙苑子、党参、茯苓等）对肾虚血瘀型子宫内膜增生症 （Endometrial hyperplasia,EH）大鼠的作用及机制。方法 将90 只SD 大鼠随机分为正常组、模型组、米非司 酮组（12 mg·kg-1）及补肾活血方低、中、高剂量组（1.2、2.4、4.8 g·kg-1）,每组15 只。采用灌胃羟基脲及戊酸 雌二醇,联合尾静脉注射高分子右旋糖苷法复制肾虚血瘀型EH 大鼠模型。造模成功后,各组按照设定剂量灌 胃给药,每日1 次,连续21 d。实验结束后,采用生化法检测各组大鼠血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷 （cGMP）、皮质醇（CORT）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、促甲状腺激 素（TSH）的水平以及全血黏度、血液流变学、凝血功能等指标;ELISA 法检测血清雌激素（E2）、卵泡雌激素 （FSH）、黄体生成素（LH）、一氧化氮（NO）、内皮素1（ET-1）的水平;HE 染色法观察子宫内膜组织病理形态变 化,并测量子宫内膜厚度;免疫组化法检测子宫内膜组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制 物1（TIMP-1）蛋白表达水平;Western Blot 法检测子宫内膜组织中MMP-9、TIMP-1、B 细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）、第10 号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因（PTEN）蛋白表达水平。结果 与 正常组比较,模型组大鼠血清CORT、ACTH、cAMP、T3、T4、TSH、ET-1 水平及ET-1/NO 比值均明显降低 （P＜0.05,P＜0.01）,cGMP、E2、FSH、LH、NO 水平均明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;血液流变学各项指标 及纤维蛋白原（FIB）含量均明显升高（P＜0.05）,凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时 间（APTT）均明显延长（P＜0.05）;子宫指数及子宫内膜厚度显著升高（P＜0.01）;子宫内膜组织MMP-9、Bcl-2 蛋白表达显著上调（P＜0.01）,TIMP-1、PTEN、Bax 蛋白表达显著下调（P＜0.01）。与模型组比较,补肾活血 方组大鼠血清CORT、ACTH、cAMP、T3、T4、TSH、ET-1 水平及ET-1/NO 比值均明显升高（P＜0.05,P＜ 0.01）;cGMP、E2、FSH、LH、NO 水平均明显降低（P＜0.05,P＜0.01）;血液流变学各项指标及FIB 含量均明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）,TT、PT、APTT 均明显缩短（P＜0.05）;子宫指数及子宫内膜厚度均明显降低（P＜ 0.05,P＜0.01）;子宫内膜组织MMP-9、Bcl-2 蛋白表达显著下调（P＜0.05,P＜0.01）,TIMP-1、PTEN、Bax 蛋白表达显著上调（P＜0.05,P＜0.01）。结论 补肾活血方能够改善肾虚血瘀型EH 大鼠的症状和体征,保护 子宫内膜血管内皮功能,以缓解子宫内膜增生,其作用机制与恢复MMP-9/TIMP-1 平衡,上调Bax、PTEN 表 达,抑制Bcl-2 表达有关。     

异种局部建立移植物抗宿主反应模型的实验研究

移植物抗宿主反应(GVHR)是同种异体骨髓移植的主要并发症,也是目前移植免疫研究的重要课题。为了研究GVHR的发生机制,首先要在动物体内模拟这种反应。曾经有人在豚鼠、鸡等动物体内建立同种局部GVHR。1973年Rees和Syms将人类淋巴细胞注入已抑制其免疫能力的小鼠皮内,产生结节区,此反应被认为是异种局部GVHR。其后,国内外学者多用大鼠作为受者,来研究人类淋巴细胞在GVHR中的作用。在利用这个模型研究GVHR中免疫活性细胞的动态变化时,我们发现,实验动物种属不同,对实验有显著影响,其中家兔有明显优于大鼠之处,现将方法介绍如下。材料与方法     

解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响

目的观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响。方法采用对乙酰氨基酚灌胃制作大鼠肝损伤模型。将实验大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组和解毒护肝方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药液灌胃,正常组和模型组给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测血清AST、ALT活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量;RT-PCR和Western blot分别检测肝组织JNK2基因和蛋白的表达;酶标仪检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化染色观察Toll样受体3(TLR3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST、DBIL、TNF-α水平显著升高(P0.01),JNK2 mRNA和p-JNK2、TLR3蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,解毒护肝方中、低剂量组大鼠AST、ALT活性显著降低(P0.05,P0.01),解毒护肝方低剂量组大鼠DBIL含量显著降低(P0.05),解毒护肝方高剂量组大鼠TNF-α含量显著降低(P0.01),解毒护肝方高、中剂量组大鼠JNK mRNA和TLR3蛋白表达均显著下调(P0.05,P0.01),p-JNK2蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠有明显的保护作用,以中、低剂量组效果最为明显,其机制可能与调控TLR3/TNF-α/JNK2信号通路有关。     

李春香教授运用逍遥散经验举隅

李春香教授从事中医临床工作30余年,积累了丰富而独到的治疗经验,善于运用中医经典名方治疗各种病症,疗效显著。现将老师运用逍遥散的经验介绍如下。1失眠案戴某,女,33岁,因失眠3年加重7天,于2003年11月10日就诊。患者3年前因工作原因渐出现夜寐不安,经常借助服用安定以改善症状,但近期用安定效果不佳而来就诊。现患者失眠多梦,心烦,时有胸闷,善太息,且常因情绪、劳累等因素致失眠加重,伴空腹时胃脘痛,烧心感。舌质暗淡,舌体胖大,苔白,脉弦细。辨证为肝郁脾虚,血不养心。给予逍遥散加减,处方如下:柴胡10g,白芍20g,当归12g,茯苓、炒白术、党…     

乳康平对大鼠乳腺增生及性激素的影响

目的探讨乳康平对大鼠乳腺增生及性激素的影响。方法50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、逍遥丸组和乳康平低、高剂量组。苯甲酸雌二醇配合黄体酮肌内注射法造模。造模成功后常规适应性饲养7d后,正常对照组和模型对照组灌服0.9%氯化钠注射液2mL/次;逍遥丸予逍遥丸药液按生药2.1g/kg灌服,2mL/次;乳康平低、高剂量组按生药5.85、23.4g/kg灌服,2mL/次。各组均每日灌服1次,连续30d。30d后处死,检测乳头直径,放射免疫法测定血清性激素雌二醇(E2)、孕酮(P)及催乳激素(PRL)水平。结果模型对照组E2、PRL高于正常对照组,P低于正常对照组(P0.01或P0.05);逍遥丸组和乳康平低、高剂量组E2、PRL低于模型对照组,P高于模型对照组(P0.01或P0.05);乳康平高、低剂量组间有一定量效趋势,乳康平高剂量组与逍遥丸组相比有明显改善(P0.01)。结论乳康平能抑制大鼠乳腺增生,其作用机制可能是通过调节大鼠的性激素水平来实现的。     

除湿止痒软膏治疗湿疹的临床疗效观察

目的观察除湿止痒软膏治疗皮炎湿疹的疗效。方法将100例患者随机分为两组各50例,治疗组给予除湿止痒软膏薄涂患部,对照组外用丁酸氢化可的松软膏,疗程2周。结果治疗组痊愈率为58%,总有效率78%;对照组痊愈率为36%,总有效率54%,两组有效率有显著差异性,结论除湿止痒软膏治疗湿疹皮炎,安全性好,是一种有效、安全、方便的皮肤病外用药。     

车前子对腹泻模型大鼠小肠组织中水通道蛋白的影响

目的观察车前子对腹泻模型大鼠小肠组织中水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白3(AQP3)的基因和蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法将60只SD雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组,模型组,阳性对照(氢氯噻嗪)组,车前子低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组于每日上午予番泻叶药液灌胃复制大鼠腹泻模型,空白组予等量蒸馏水灌胃;每日下午各药物组予相应药物灌胃,空白组和模型组予等量蒸馏水灌胃,连续灌胃14 d。给药期间观察各组大鼠的排便情况。灌胃结束后,在麻醉状态下剖取各组大鼠的小肠组织,采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测小肠组织中AQP1、AQP3的基因和蛋白表达水平。结果模型组大鼠全部排水样稀便;与空白组比较,模型组大鼠小肠组织中AQP1 mRNA、AQP3 mRNA和相应蛋白的表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P <0.01)。与模型组比较,车前子各剂量组大鼠粪便基本成形;小肠组织中AQP1 mRNA、AQP3 mRNA和相应蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论车前子可通过上调小肠组织中AQP1、AQP3的基因和...     

盐酸戊乙奎醚对粘连性肠梗阻大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的：探讨盐酸戊乙奎醚（ PHC）对粘连性肠梗阻（ AIO）大鼠肠黏膜屏障功能的影响及其作用机制。方法将60只SD大鼠分为正常组（ N组）、假手术组（ S组）、生理盐水组（ NS组）及PHC组（ P2、P4、P8组），建立粘连性肠梗阻模型，N组不予处理，NS组及S组均给予0.4 mL生理盐水，P2、P4、P8组按0.2、0.4、0.8 mg／kg PHC配成0.4 mL，于术后第7天开始连续肌肉注射7 d。取回肠、结肠组织标本行病理形态学观察，比色法测定肠组织一氧化氮合酶（NOS），放免法测定血清中内皮素（ET）含量。结果与NS组比较，P2、P4、P8组肠组织NOS与血清ET含量均明显降低，差异有统计学意义（ P＜0.01）；同时，P2、P4、P8组回肠、结肠病理形态学改变较S组、NS组减轻，P8组尤为明显。结论中、高剂量PHC对于AIO大鼠肠黏膜屏障功能具有一定的保护作用，且以高剂量更为显著。