人类精液溶脲脲原体感染与生殖细胞凋亡的关系

目的:探讨人精液溶脲脲原体(ureaplasma urealyticum,Uu)感染与生殖细胞凋亡的关系.方法:采用PCR检测精液中Uu.用瑞-姬染色和末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡的生殖细胞.结果:Uu感染组凋亡的生殖细胞体积缩小、核固缩、染色质密度增加,聚集在核膜周边形成半月形,胞质有空泡.凋亡率为(14.5±4.6)%明显高于正常对照组(4.1±1.8)%(P＜0.01).结论:Uu感染能引起生殖细胞凋亡的增加.     

噬菌体抗体库筛选方法的研究进展

建立高效的筛选方法是噬菌体抗体库技术实际应用的主要瓶颈.人们对传统抗体库筛选方法(固相和液相淘筛法)所涉及的抗原表位构象及筛选通量问题做了相应改进,并针对一些天然抗原难以体外制备、或为降低筛选的非特异性、或为达到规模化筛选目的而发展了一些新型的筛选方法(细胞淘筛法、组织或体内淘筛法、选择感染法和自动化淘筛法),同时对影响筛选效率的主要条件参数(封闭与洗脱条件,筛选轮数与严紧度)进行了优化研究.这些研究必将加速抗体库技术快速规模化制备抗体的普及实现.     

肿瘤的酶-前药疗法

药物在肿瘤部位的低浓度及系统毒性仍是干扰肿瘤治疗的因素之一。酶-前药疗法将酶的高效性与前药的低毒性相结合，开辟了肿瘤治疗的新领域。现综述酶-前药疗法的分类、原理、应用现状及前景。     

免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型的建立及病理分析

目的:建立侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,探讨免 疫抑制宿主曲霉菌病致病机制.方法:以甲基强的松龙为免 疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行 计数.双侧鼻孔滴注烟曲霉菌孢子引起侵袭性肺烟曲霉菌病, 不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析.结果:糖皮 质激素注射后小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数 量明显减少[(6.33±1.76)×106vs(3.18±0.57)×106, P<0.01],脾细胞和外周血淋巴细胞数量下降(P<0.01);病 理切片可见免疫抑制小鼠感染烟曲霉菌后肺组织大量烟曲 霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿.结论:成功建立了免疫抑 制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主 易于感染烟曲霉菌的致病机制以及疾病的发生发展奠定基 础.     

胃癌患者手术前后血清CA724和CA50水平及临床意义

目的:研究血清糖链抗原(CA724)和糖链抗原(CA50)在胃癌患者手术前后的水平变化及临床意义。方法:胃癌患者33例,良性胃疾病患者31例,在33例胃癌患者中有6例复发转移,采用免疫放射分析法(IRMA)分别检测了空腹血清CA724和CA50水平。结果:胃癌组血清CA724和CA50水平分别为21.7±44.6U/ml,27.8±37.5U/ml,胃良性疾病组血清CA724和CA50水平分别为2.98±1.64U/ml,6.78±7.45U/ml,差异显著(P<0.01)。胃癌患者术前组血清CA724、CA50水平分别为21.7±44.6U/ml,27.8±37.5U/ml高于术后14.3±26.6U/ml,22.5±31.4U/ml,差异显著(P<0.01)和(P<0.05)。胃癌患者有淋巴结转移组血清CA724、CA50水平分别为27.3±64.5U/ml,30.6±48.8U/ml,高于无淋巴结转移组17.4±30.8U/ml,19.9±27.3U/ml,差异显著(P<0.01)。结论:手术切除肿瘤特别是行根治性切除术后,血清CA724水平显著降低。动态观察CA724、CA50水平及其变化,表明CA724、CA50水平与肿瘤的浸润及转移过程密切相关,胃癌患者手术前后的测定对有无复发转移是一项重要的判断指标。     

侵袭性曲霉病发病情况及诊治现状

侵袭性曲霉病是免疫抑制患者感染条件致病真菌引起的深部真菌感染。病情凶险，病死率很高。随着免疫抑制患者的增加，侵袭性曲霉病发病率也逐年增加，由于患者初期症状不明显，所以早期诊断比较困难，且现有的抗真菌药抗菌谱窄、毒性大，患者病死率居高不下，急需高效低毒的抗真菌药物来改善这一现状。     

藤黄微球菌Rpf结构域多肽诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的:研究藤黄微球菌Rpf结构域多肽的免疫学特性.方法:用原核表达的藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫哌BALB/c小鼠3次,每次间隔2周.用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度.分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增值指数.ELISA方法检测淋巴淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10和IL-12产生水平.另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后,计数脾脏细菌负荷数.结果:藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶128 000,淋巴细胞增殖指数为(2.10±0.12),明显高于生理盐水对照组(0.90±0.21).ELISA方法检测Rpf结构域多肽免疫组IFN-γ,IL-10和IL-12水平为(1 126±36) ng/L,(368±13)ng/L和(289±14)ng/L,明显高于生理盐水对照组(P<0.01).与生理盐水免疫组(细菌负荷6.64±0.13)相比较,Rpf结构域多肽免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有明显作用(细菌负荷为5.03±0.11,P<0.05).结论:藤黄微球菌Rpf结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分.     

A20在前列腺癌细胞中的表达

目的:探讨A20(肿瘤坏死因子可诱导的初级应答基因)在前列腺癌各细胞系中的表达及意义。方法:RT-PCR检测体外培养的前列腺癌细胞PC-3,PC-3M,Du145,LNcap和22RV1中A20 mRNA的表达,Western blot检测A20蛋白质(锌指蛋白A20)的表达。结果:RT-PCR和Western blot检测显示A20在前列腺癌5种细胞系中均表达,但表达水平有差别,在PC-3和PC-3M细胞中A20在mRNA和蛋白质表达水平均显著高于其余3种细胞系(P<0.01)。结论:A20在各前列腺癌细胞系中的表达不尽相同,对A20表达的研究对于下一步研究该基因在前列腺癌发生发展中的作用有重要意义。     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.