血液核酸检测试剂UltrioPlus与Ultrio检测结果分析及血液检测模式的探讨

目的分析TIGRIS血液筛查系统采用新旧两代试剂及新一代试剂不同检测模式核酸单反应性变化情况,为进一步提高核酸检测质量提供参考。方法回顾分析2011—2016年血液标本采用Ultrio或UltrioPlus核酸检测(NAT)试剂与酶免疫法(EIA)试剂平行血液检测(NAT/EIA平行检测模式),以及血液标本先采用EIA试剂检测,后采用UltrioPlus NAT试剂检测EIA合格标本(先EIA后NAT检测模式),2种模式的核酸联检单反应性率和鉴别反应性率。结果 2011—2015年,采用NAT/EIA平行检测模式,Ultrio试剂检测血液标本1 412 432例,核酸联检单反应性率、核酸鉴别反应性率和HBV DNA检出率分别为:0.23%、29.20%和0.07%,各年份核酸联检单反应性率、核酸鉴别反应性率差异分别为P0.05(χ2=9.80)和P0.05(χ2=3.91);Ultrio试剂检测1 465 864例血液标本,核酸联检单反应性率和核酸鉴别反应性率分别为0.22%和29.21%,UltrioPlus试剂检测261 238例血液标本,核酸联检单阳性率和鉴别阳性率分别为0.33%、39.12%,两指标与Ultrio试剂比较,差异有统计学意义(χ2=92.58,P0.01;χ2=31.07,P0.01);2016年2—3月,采用NAT/EIA平行检测模式,UltrioPlus试剂检测血液标本51 686例,核酸联检单反应性率、核酸鉴别反应性率和HBV DNA检出率分别为:0.57%、22.90%和0.13%;2016年4—12月,采用先EIA后NAT检测模式,UltrioPlus核酸试剂检测血液标本208 962例,核酸联检单反应性率、鉴别反应性率和HBV DNA检出率分别为:0.27%、47.73%和0.13%,2种血液检测模式的核酸联检单反应性率和鉴别反应性率比较,差异有统计学意义(χ2=117.90,P0.01;χ2=50.15,P0.01),HBV DNA检出率相同(0.13%)。结论新一代核酸试剂UltrioPlus相比Ultiro有更高的检测灵敏度和特异性,采用先EIA后NAT检测模式较EIA/NAT平行检测模式能有效减低实验室污染,减少血液核酸检测假阳性的发生。     

核酸漏检的HIV献血者跨区域献血1例

目的探讨1例跨区域献血的HIV确证阳性献血者核酸检测漏检原因、病毒学特征及其对血液安全的影响,以期提高国内从业者对这种特殊献血者的认识。方法对1例HIV核酸无反应性、HIV抗原/抗体反应性献血者本次献血和既往异地献血血液检测和HIV确证情况进行调查。同时,采用目前主流的进口血筛核酸检测系统对其血浆标本进行多次核酸检测。此外,对其HIV病毒载量进行检测和统计学推测。结果该献血者既往异地献血检测结果HIV抗原/抗体双试剂反应性,核酸未实施检测,HIV WB抗体确证试验为阳性;本次献血检测HIV抗原/抗体双试剂反应性,核酸检测无反应性,HIV WB抗体确证试验为阳性。4种不同血筛核酸检测系统重复检测反应性率为0(0/20)~20.8%(5/24)。HIV核酸定量检测为反应性,但由于低于定量检测下限(33 IU/mL)而不能得出准确结果。统计推算出的HIV病毒载量为2.8 IU/mL。结论 HIV确证阳性献血者存在核酸漏检的情况,病毒载量极低是其主要漏检原因。HIV确证阳性献血者异地重复献血时不能被信息系统及时屏蔽,严重威胁着血液安全。     

乙肝病毒全长基因组真核表达载体构建

目的构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体。方法PCR一步法扩增乙肝病毒全长基因组;乙肝病毒基因组和真核表达载体pcDNA3.1( )经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,连接并转化大肠杆菌DH5α。结果PCR、酶切和测序表明乙肝病毒全长基因组成功插入真核表达载体pcDNA3.1( )。结论成功构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体。     

血液核酸筛查系统结果无效类型及原因分析

目的 通过分析血液核酸检测结果无效的原因，探讨降低检测无效的对策。方法 统计2019～2021年本实验室Cobas s201血液核酸筛查的检测数量及无效结果的批次、测试数量，分析无效结果的类型和原因。结果 2019～2021年本实验室Cobas s201核酸检测系统共检测5 420批次和127 950测试量，批次无效率和测试无效率分别为1.83%和1.97%。结果无效可分为操作不当、标本质量问题、质控无效、设备故障和其它5种类型，其中质控无效和设备故障导致的结果无效比例最高，分别占全部测试无效的44.51%和39.96%。质控无效主要与标本交叉污染和质控品混匀不充分有关，设备故障多发生于核酸提取仪的机械臂抓手和扩增仪的TC模块。结论 实验室应对结果无效进行质量监测，采取针对性改进措施，特别应减少质控无效和仪器故障导致的结果无效。