牛磺酸对谷氨酸诱导大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制

目的:视网膜谷氨酸兴奋毒性可引起视网膜内层神经元尤其是视网膜神经节细胞的凋亡,牛磺酸作为神经保护剂,本研究观察其是否可以减少削弱大鼠视网膜神经节细胞兴奋毒性损伤,减少视网膜神经节细胞凋亡.方法:实验于2003-03/09在第三军医大学营养与食品卫生学教研室完成.通过玻璃体注射谷氨酸建立大鼠视网膜谷氨酸兴奋毒性损伤模型,实验分为正常对照组、玻璃体注射磷酸盐缓冲液对照组,牛磺酸干预高、低剂量组及MK-801干预阳性对照组.牛磺酸干预采用腹腔注射,其高、低剂量分别为25 mg/kg体质量及5 mg/kg体质量.通过Thy-1免疫组化、原位缺口末端标记法观察谷氨酸兴奋毒性及牛磺酸干预对大鼠视网膜神经节细胞的Thy-1蛋白表达及细胞凋亡的影响.结果:玻璃体注射谷氨酸使视网膜Thy-1免疫反应下降、内核层及神经节细胞层出现大量凋亡细胞.谷氨酸组平均每张视网膜切片节细胞层有(200&;#177;12)个原位缺口末端标记阳性细胞,牛磺酸干预使视网膜Thy-1免疫反应增强、节细胞层凋亡细胞数显著下降[高、低剂量组分别为(68&;#177;6)个及(163&;#177;10)个],以高剂量牛磺酸的效果显著.结论:一定剂量的牛磺酸在体内可有效抑制谷氨酸兴奋毒性引起的大鼠视网膜神经节细胞损伤及凋亡.     

活性维生素D_3协同他莫西芬对裸鼠乳腺癌细胞移植瘤的抑制效应

目的:探讨活性维生素D3联合他莫西芬对转染pVDRE-Tk-ERα质粒的MDA-MB-231乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的协同抑制效应及其相应机制。方法:将重组pVDRE-Tk-ERα真核表达质粒转染到ER阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞内并将处于对数生长期的MDA-MB-231VDRE-ERα细胞皮下注射到Balb/c裸鼠体内,4w后,分别用0.5μg/kg的活性维生素D3和50mg/kg的他莫西芬单独及联合处理裸鼠移植瘤模型20d,测量各组裸鼠移植瘤的体积大小。利用HE染色观察移植瘤的组织结构,用免疫组化法检测移植瘤细胞Ki-67蛋白的表达变化以检测移植瘤细胞的增殖活性变化。结果:活性维生素D3和他莫西芬联合作用组较对照和单独作用组能够显著减小裸鼠移植瘤的体积并有效改变其组织病理结构,二者联合运用还能在体内显著抑制乳腺癌细胞的增殖活性。结论:活性维生素D3在体内可通过VDRE-Tk启动子诱导ERα的表达从而有效恢复雌激素阴性乳腺癌细胞对他莫西芬的敏感性。     

视黄酸对CDK2组成性表达HL—60细胞增殖的影响

目的探讨细胞周期素依赖性激酶2(CDK     

营养干预对大鼠视网膜Fos蛋白和羧基肽酶E表达的影响

目的 :　探讨牛磺酸和多种微量营养素能否通过调节光照和暗适应条件下 Fos和羧基肽酶 E( CPE)蛋白表达 ,进而影响视功能尤其是暗适应功能。方法 :　 Wistar大鼠随机分为三组 ,即对照组 (正常饲料组 ) ,实验 1组 ( 5倍需要量组 )和实验 2组 ( 1 0倍需要量组 ) ,喂养 4w后 ,每组动物再随机分为光照组和暗适应组 (平均照度为 3.0 3lx) ,以正常饲料喂养 72 h,大鼠活杀取样做免疫组织化学染色。结果 :　光照和暗适应条件下 CPE和 Fos蛋白在视网膜各层次细胞中均有广泛分布 ,且光照和暗适应条件下两者表达无明显差异 ,其中 Fos蛋白主要集中分布于内核层、内网状层和节细胞层 ,大鼠补充一定剂量牛磺酸和微量营养素后 ,可使光照时外网状层、内核层和节细胞层 c- fos基因表达增强 ,而对光照时 c- fos基因表达无明显影响。结论 :　牛磺酸和多种微量营养素干预可使光照或暗适应条件下 CPE和 Fos蛋白表达和分布发生明显变化 ,尤其是暗适应条件下 c- fos基因表达的变化可能对视杆通路视觉信号传递产生重要的调节作用。     

染料木黄酮影响MDA-MB-453细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的:探讨染料木黄酮(genistein,GEN)影响紫杉醇(paclitaxel,PTX)体外化疗HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453敏感性的作用机制。方法:GEN和PTX单独或联合处理MDA-MB–453细胞,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学法检测HER2/neu蛋白、Westernblot检测Akt、p-Akt、CyclinB1、CDK1蛋白表达的变化。结果:GEN和PTX单独作用时MDA-MB-453细胞分别阻滞于G1/S期和G2/M期,HER2/neu、总Akt和CDK1蛋白水平均没有明显变化,但GEN可显著降低p-Akt和CyclinB1蛋白水平,而PTX则明显增加CyclinB1蛋白水平,二者联合处理时GEN拮抗PTX增加CyclinB1蛋白水平和诱导G2/M期阻滞的作用。结论:GEN拮抗PTX增加cyclin B1蛋白水平和G2/M期阻滞的作用,可能是其降低PTX体外化疗MDA-MB-453细胞敏感性的机制之一。     

HOXB1基因转染对HL—60细胞视黄酸代谢和α—干扰素表达 …

目的　探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL 6 0细胞视黄酸代谢和α 干扰素表达的影响。方法　采用脂质体介导的质粒转染、RT PCR及高效液相色谱 (HPLC)分析等方法进行分析检测。结果　2 .5× 10 -7mol/L全反式视黄酸 (ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL 6 0细胞的增殖 ,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL 6 0细胞的增殖抑制作用 ;HPLC分析显示 ,转染细胞ATRA的代谢减慢 ;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL 6 0细胞IFNα表达 ,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL 6 0细胞IFNα基因表达。结论　HOXB1转染使HL 6 0细胞ATRA代谢受抑 ,ATRA增殖抑制作用减弱 ,外源性IFNα能上调HL 6 0细胞IFNα表达     

视黄酸对小鼠骨髓干/祖细胞向粒系分化作用的研究

用全反式视黄酸（ＡＴＲＡ） 和视黄醇（ｒｅｔｉｎｏｌ） 给小鼠灌胃给药后,观察小鼠骨髓细胞的增殖分化状况以及对干／ 祖细胞向粒系分化的影响。结果显示：与正常对照组比较,ＡＴＲＡ 或ｒｅｔｉｎｏｌ 均可刺激骨髓细胞增殖（ｐ ＜ ０ ．０５） ,并诱导干／ 祖细胞向粒系分化和粒系的终末分化;ＡＴＲＡ 作用优于ｒｅｔｉｎｏｌ,且呈时间剂量依赖性增加反应关系（ｐ ＜ ０ ．０５） 。提示正常机体摄入视黄醇类化合物后可诱导骨髓／ 祖干细胞向粒系分化     

视黄酸依赖Fas/RARα融合基因诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨视黄酸协同融合基因Fas/RARα诱导MCF-7细胞凋亡效应及其分子机制.方法以流式细胞仪、DNA梯形带检测MCF-7细胞凋亡效应,经RT-PCR和蛋白免疫印迹等方法观测视黄酸处理后caspase-8、bcl-2及bax基因表达变化.结果一定剂量视黄酸可诱导转染Fas/RARα融合基因的MCF-7细胞凋亡,caspase-8和bax基因表达上调,而bcl-2基因表达下降.结论视黄酸及其依赖的融合基因表达可联合诱导MCF-7细胞凋亡,caspases和bcl-2家族成员表达变化可能是其作用的主要分子机制.     

视黄酸对CDK2组成性表达HL—60细胞增殖的影响

探讨细胞周期素依赖性激酶在视黄酸对急性早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和分化调控过程中的作用。方法应用真核细胞基因转染技术将外源ＣＤＫ２基因转入人ＨＬ－６０早幼粒细胞白血病细胞中,进而以视黄酸处理１－４ｄ。结论ＣＤＫ２在视黄酸诱导的增殖抑制和分化过程中起重要作用,由于ＣＤＫ２的组成性超过表达,导致视黄酸对ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用下降。     

ω-3多不饱和脂肪酸抑制人前列腺癌细胞黏附和侵袭的体外实验研究

目的 观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid, ω-3 PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对高转移性人前列腺癌细胞PC-3体外黏附和侵袭能力的影响,并探讨其相关分子机制. 方法 MTT法观察EPA和DHA对PC-3细胞增殖的影响;以体外黏附和侵袭实验观察EPA和DHA对肿瘤细胞黏附和侵袭能力的影响;RT-PCR法观察EPA和DHA对与细胞骨架相关的RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42基因mRNA表达的影响.结果 EPA及DHA均能抑制PC-3细胞的增殖,并呈剂量效应关系;PC-3细胞以60 μmol/L EPA和DHA分别处理后,体外黏附和侵袭能力均降低,在matrigel基质胶上黏附30、60、90 min和120 min的黏附率均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),侵袭18 h后的抑制率分别为(35.65±7.76)%和(41.32±5.86)%(P＜0.01),RhoA、Rac2和Cdc42基因mRNA表达均不同程度下降.结论 ω-3 PUFA可能通过下调Rho GTP酶mRNA的表达,抑制PC-3细胞体外黏附和侵袭能力.