苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

谷氨酸兴奋毒性及牛磺酸干预对大鼠视网膜GFAP表达的影响

目的探讨谷氨酸兴奋毒性对大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein, GFAP)的影响及牛磺酸干预对此的作用.方法于大鼠玻璃体内单眼一次注射40 nmol谷氨酸制备视网膜谷氨酸兴奋毒性模型,60只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组,溶剂(玻璃体内注射PBS)对照组,谷氨酸组,牛磺酸干预高、低剂量组(分别于腹腔注射25 mg/kg及5 mg/kg牛磺酸),阳性对照组(腹腔注射0.5 mg/kg MK-801-NMDA受体特异拮抗剂).通过免疫组化、免疫印迹、RT-PCR检测玻璃体注射后24 h、3、7 d的大鼠视网膜谷氨酸、GFAP的蛋白及mRNA表达.结果玻璃体注射谷氨酸使视网膜内谷氨酸、GFAP的蛋白及mRNA表达量于注射后24 h迅速升高,注射后3、7 d逐渐下降.25 mg/kg牛磺酸可有效拮抗24 h时的视网膜谷氨酸、GFAP蛋白及mRNA升高,并使GFAP的蛋白及mRNA水平于注射后24 h、3、7 d逐渐上升.低剂量牛磺酸作用不明显.结论视网膜谷氨酸兴奋毒性使胶质细胞反应性一过性增强.一定剂量牛磺酸可降低视网膜谷氨酸含量,并使胶质细胞反应性逐渐上调,可能有助于削弱谷氨酸兴奋毒性.     

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对HL-60细胞caspase-3基因表达的影响

目的　观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞caspase 3基因表达的影响 ,进一步探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制。方法　 4、8、16μmol/LLOV处理HL 60细胞 1～ 4d后 ,MTT比色法及生长曲线测定检测细胞增殖效应 ,流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率 ,DNA梯形带检测观察细胞的凋亡效应 ,RT PCR及Westernblot方法分别分析LOV对HL 60细胞caspase 3mRNA、caspase 3蛋白表达的影响。结果　LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,细胞凋亡率增加 ,有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;LOV能上调HL 60细胞cas pase 3蛋白表达 ,但对caspase 3mRNA表达无明显影响 ,该作用呈剂量 效应和时间依赖关系。结论　LOV对HL 60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用 ,LOV能上调HL 60细胞caspase 3蛋白表达 ,推测这可能是LOV抑制HL 60细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。     

PI3K/Akt与染料木黄酮增敏阿霉素体外化疗人乳腺癌 MDA-MB-453 细胞的关系研究

目的 观察染料木黄酮(GEN)对HER2/neu高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞PI3K/Akt信号途径的抑制作用,探讨其在GEN增敏阿霉素(DOX)体外化疗乳腺癌MDA-MB-453细胞中的作用.方法 GEN、PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素(WT)和DOX单独或联合处理体外培养的MDA-MB-453细胞,免疫细胞化学法检测HER-2/neu蛋白表达,免疫印迹法检测总Akt和磷酸化Akt蛋白(p-Akt)表达.结果 GEN对MDA-MB-453细胞HER2/neu和总Akt蛋白没有明显影响,但可明显降低p-Akt蛋白水平;同时WT也能明显降低p-Akt蛋白,并显著增强DOX抑制MDA-MB-453细胞生长的作用.结论 GEN增敏DOX体外化疗乳腺癌MDA-MB-453细胞株可能与其抑制PI3K/Akt信号途径有关.     

HOXB1基因转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响

目的探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响.方法采用脂质体介导的质粒转染、RT-PCR及高效液相色谱(HPLC)分析等方法进行分析检测.结果 2.5×10-7 mol/L全反式视黄酸(ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL-60细胞的增殖,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL-60细胞的增殖抑制作用;HPLC分析显示,转染细胞ATRA的代谢减慢;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL-60细胞IFNα表达,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL-60细胞IFNα基因表达.结论 HOXB1转染使HL-60细胞ATRA代谢受抑,ATRA增殖抑制作用减弱,外源性IFNα能上调HL-60细胞IFNα表达.     

赫赛汀和9-顺式视黄酸联合用药对HER2阳性荷瘤鼠乳腺癌细胞的抑制效应

目的 探讨赫赛汀和9-顺式视黄酸单独和联合用药对HER2阳性乳腺癌细胞周期进程的体内协同抑制效应及其分子机制.方法 将处于对数生长期的MCF-7HER2细胞皮下注射到BALB/c裸鼠体内,用赫赛汀和9-顺式视黄酸分别单独和联合处理裸鼠移植瘤模型20d,测量各组裸鼠移植瘤的体积大小.利用免疫印记法检测移植瘤细胞HER2、P27、Cyclin E和CDK2蛋白的表达变化.结果 赫赛汀和9-顺式视黄酸联合作用组较对照和单独作用组能显著减小HER2阳性乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的体积,二者联合运用还能在体内显著改变荷瘤鼠癌细胞HER2、P27、Cyclin E和CDK2的表达.结论 联合应用赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体内通过对细胞周期相关蛋白的表达进行调控从而达到协同抑制HER2阳性乳腺癌细胞的作用.     

汶川大地震后理县食品安全保障的措施及经验

目的 确保理县居民和救灾人员地震灾害后的食品卫生安全.方法 调查、评估理县灾后的食品卫生状况,全面开展卫生监督、食品理化、微生物快速检验和食品卫生知识宣传教育,并针对存在食品安全隐患的重点单位、重点环节和重点食品加强监管.结果 理县在地震灾后未发生任何食品安全事件,当地居民的卫生观念和食品安全意识明显增强.结论 组织有力、重点突出、多方协作是灾后食品安全防疫工作的重要手段.     

Expression of cyclin-dependent kinases in HL-60 cells during differentiation induced by retinoic acid

DanticadvanceshavebeenmadeintheunderstandingofthemechanismregUlatingcellcycle.TheprogreSsionofcellcycleinmammaliancellsisdependentontheformation,activationandinactivationofthedtherentcyclin/cyclin-dependentkinasecomplexatappropriateti..[1'.AnumberofstUdiesdemonsrmtedthattheprogressionofcellcyclethroughG,-Stransitionwascontrolledbytheactivitiesofeec"and/""ofthecyclindependentkinase(CDK)fdrily.MoreoverP""andacornareundertheregUlationofcyclinEandcyclinDrespectively""3.Retinoicacid(RA)andoth…     

牛磺酸及复合微量营养素对大鼠视网膜iNOS mRNA的影响

目的 探讨牛磺酸及复合微量营养素对光照和暗适应条件下大鼠视网膜iNOSmRNA的影响。方法 在幼年大鼠的饲料配方中分别添加牛磺酸及VA、VB1、VB2、尼克酸,Zn、Se等复合微量营养素,营养干预4周后,采用原位分子杂交技术检测各组大鼠视网膜iNOSmRNA在光照和暗适应条件下的分布和表达。结果 光照时iNOSmRNA分布于内,外核层及节细胞层,而暗适应时分布于内,外网状层,牛磺酸组暗适应时亦分布于内,外核层及节细胞层,微量营养素组光照和暗适应时iNOSmRNA的分布分别与普通饲料组暗适应和光照时的分布一致。结论 iNSOmRNA的分布因光适应状态而异,上述复合微量营养素能影响光照和暗适应时iNOSmRNA的分布和表达,牛磺酸则主要影响其暗适应时的分布和表达。     

一种视黄酸可控的绿色荧光蛋白表达研究

目的 成功构建带有视黄酸反应元件(RARE)-TK启动子控制的增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因表达载体，并验证该载体转染HL60细胞后全反式视黄酸(ATRA)依赖的eGFP表达。方法 采用常规分子克隆方法构建真核表达载体pRARE—TK—eGFP，经脂质体转染肿瘤细胞；ATRA处理后检测细胞增殖功能变化和经荧光显微镜直接观测eGFP表达变化情况。结果 ATRA处理转染HL60细胞后，eGFP呈视黄酸(RA)时间剂量依赖性表达增高。结论 ATRA可通过RARE调控TK启动子下游的eGFP报告基因表达。