γ干扰素增强CTL对宫颈癌细胞杀伤作用及其机制研究

目的研究γ干扰素能否增强宫颈癌细胞对特异性效应细胞杀伤作用的敏感性，并对其作用机制进行探讨。方法采用细胞毒性试验观察不同剂量γ干扰素增强宫颈癌细胞对特异性效应细胞杀伤作用敏感性的影响，采用流式细胞术检测宫颈癌细胞HLA-A2分子和CD54的表达。结果γ干扰素可剂量依赖性地增强宫颈癌细胞对特异性效应细胞杀伤作用敏感性，并能增加宫颈癌细胞HLA-A2分子和CD54的表达。结论γ干扰素可增强宫颈癌细胞对特异性效应细胞杀伤作用的敏感性，其作用机制与其上调宫颈癌细胞表面HLA-A2分子和CD54分子表达有关。     

MART-1特异性治疗性多肽诱导CD8+ T细胞应答的研究

目的探讨基于黑色素瘤特异性抗原MART-127-35表位的治疗性多肽抗原组分、结构,及诱导抗原特异性CD8+ T细胞应答的关系.方法用蛋白质分子设计技术,设计基于黑色素瘤特异性抗原MART-127-35表位、HIV Tat49-57CCP序列及破伤风类毒素通用Th表位的治疗性多肽候选分子,经Merrifield固相多肽合成技术合成,HPLC纯化、鉴定.以黑色素瘤病人PBMC为实验对象,对其诱导T细胞增殖、Th1极化、抗原特异性CD8+ CTL效应进行研究.结果所设计治疗性多肽分子可在体外诱导Th1极化和抗原特异性CD8+T细胞应答,含Th、CTL表位的双表位肽抗原略优于单纯CTL表位肽,含Th、CTL表位和HIV Tat49-57CCP序列的肽抗原效应显著优于前二者(P<0.05).结论提示基于黑色素瘤特异性抗原优势CTL表位、HIV Tat49-57CCP序列及破伤风类毒素通用Th表位的治疗性多肽设计可显著提高肿瘤治疗性小分子肽的免疫原性.     

临床医学专业医学免疫学多媒体教学体会

医学免疫学是一门与多学科广泛交叉、内容抽象、理论体系极为复杂的医学基础学科。结合多年的教学经验,就如何充分利用多媒体教学手段的优势激发临床医学专业学生的学习兴趣、提高学生综合素质与教学质量谈几点体会。     

婴儿高压氧治疗中应该注意的几个问题

由于压力的机械效应及高气压环境对人体各系统的生理功能有一定的影响，因此，高压氧治疗的医疗护理工作与在常压下有所区别，尤其是应用高压氧治疗新生儿、婴儿适应证患者时，因为不能用语言互相交流沟通，医务人员就难以了解治疗中患儿的主诉，对治疗中出现的一些问题主要依靠氧舱从业人员的细心去获得，如果处理不当，将直接影响高压氧治疗的顺利实施、安全和效果。     

应用Profinity eXact标签在真核表达系统中纯化EGFP蛋白

目的研究Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中的纯化效果。方法通过PCR扩增Profinity eXact标签,构建中间载体pUC18ETagEGFP,构建Profinity eXact标签绿色荧光蛋白真核表达载体FUETagEGFP,采用DNA-磷酸钙方法转染293FT细胞,收集过量表达Profinity eXact标签绿色荧光蛋白的细胞,随后提取蛋白进行纯化,采用荧光检测EGFP蛋白结合、纯化效率,最后利用SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果经PCR扩增、酶切和测序,Profinity eXact标签、中间载体pUC18ETagEGFP、Profinity eXact标签真核表达载体构建正确,经荧光显微镜镜下观察Profinity eXact标签真核表达载体转染293FT细胞效果良好,经荧光检测确定EGFP蛋白结合、纯化效率,经SDS-PAGE发现Profinity eXact标签在真核蛋白系统中纯化效果良好。结论 Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中能正常工作,并有较好的纯化效果。     

小鼠肥大细胞瘤P815模型的建立与初步应用

目的 建立小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５种植瘤模型，并对其体内诱发特异性ＣＴＬ应答机理进行初步的研究。方法 经有限稀释法筛选Ｐ８１５单克隆瘤系，用ＲＴ－ＰＣＲ及产物ＤＮＡ测序鉴定肿瘤抗原Ｐ１Ａ基因的表达；在此基础上，用活瘤苗免疫同系小鼠，经标准＾５１Ｃｒ释放试验检测在体特异性ＣＴＬ的活性。结果 筛选出了一个Ｐ８１５单克隆成瘤系Ｐ８１－Ｆ３，并鉴定该瘤存在Ｐ１Ａ基因的表达，用活瘤疫苗免疫６只步鼠，在３只体内     

肿瘤抗原MAGE-2多抗原肽疫苗的设计合成及免疫原性研究

目的采用多抗原肽(multiple antigen peptide,MAP)设计方案,提高线性短肽的免疫原性.方法对肿瘤抗原MAGE-2220-228细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位进行分子修饰,设计、合成四分支多抗原肽(MAP4).标准Fmoc合成方案进行合成,液相色谱/质谱联用(LC/MS)进行目的肽鉴定.以体外刺激人外周血单核细胞(PBMC)诱导CTL效应及IFN-γ分泌,标准51Cr释放实验与Elispot实验进行免疫原性的研究.结果标经准51Cr释放实验验证,低浓度的MAP4可以诱导出有效的CTL效应,Elispot实验显示MAP4能够有效诱导的IFN-γ分泌.结论 MAP的构建能够增强CTL效应和IFN-γ的分泌,是一种有效刺激CTL应答的多肽疫苗形式.     

HBV新型免疫原的设计、合成及免疫原性研究

目的 探讨如何将表位构建成有效免疫原。方法 以Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白两优势性Ｂ细胞表位和ＨＢ－ｃＡｇ两Ｔｈ细胞表位为基础,设计、合成了２种ＭＡＰ多肽,以此两ＭＡＰ肽为免疫原免疫兔和小鼠,观察体液免疫反应。结果 此两种ＭＡＰ多态均比Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白诱发更高抗体滴度;Ｔｈ细胞表位引入可显著增强反应强度。结论 增加肽抗原结构复杂性可提高其免疫原性,其表位排列以Ｂ细胞表位在赖氨酸核心外侧为佳,ＭＡＰ是一     

宫颈癌治疗性多肽疫苗的分子设计及免疫学功能研究

目的：探讨基于人乳头瘤病毒抗原优势表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法：以芴甲氧羰基固相法合成多肽，用高效液相色谱分析多肽的纯度，对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定，用标准^51Cr释放试验检测特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结果：合成的多肽经纯化后纯度都达到80％以上，经质谱分析，各肽的分子量测定值与理论值相符，所设计的治疗性多肽在体内外均诱导出较强的表位特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结论：在治疗性表位多肽设计中，将辅助性T细胞表位及脂类分子构建于分子内部可提高细胞毒性T淋巴细胞表位肽的免疫原性。     

肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位的发现与鉴定

目的:鉴定肿瘤抗原MAGE－A3新的HLA-A2限制性CTL表位。方法:采用CTL表位预测的基序法与二级锚点相结合预测 MAGE-A3的 HLA-A2限制性CTL表位;用计算机分子模拟进行表位的初步筛选;以标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果:在所筛选的4个候选CTL表位中,MAGE-A3201-209可在体外有效诱导特异性CTLs的产生,杀伤靶细胞。结论:MAGE-A3201-209为肿瘤抗原MAGE-A3的新的HLA-A2限制性CTL表位。为基于MAGE-A3的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计、研究奠定了基础。