MHC Ⅰ类分子胞内组装、转运及其调控机制的研究进展

MHC Ⅰ类分子是启动机体免疫应答的重要分子。当细胞遭受病毒感染或本身发生癌变,MHCⅠ类分子能结合病毒或癌变细胞蛋白降解形成的多肽,向CD8+T细胞报告病毒或者肿瘤的存在,从而促使其对异常细胞的杀伤。在此过程中,MHCⅠ类分子的胞内转运途径精密调控着免疫应答的效率,但目前对MHCⅠ类分子在胞内转运途径的机制了解不多。本综述就MHCⅠ类分子在内质网的组装、外运以及内吞后降解或再循环过程中的主要机制做一阐述,并且介绍一些新发现的相关调控分子。     

mHCN4基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞重建起搏离子流通道

目的观察超极化激活的环核苷酸门控通道亚型4(mHCN4)外源基因对小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)的转染及其功能表达。方法2个月大昆明小鼠拉颈处死,无菌条件下分离股、胫骨,收集骨髓细胞种植于塑料培养瓶,24h后更换培养液,保留贴壁细胞,待细胞达90%融合时胰酶消化传代培养。收集第3代贴壁细胞,用免疫磁珠法分选CD11b-细胞继续扩增培养。以pUC18、pcDNA3-mHCN4、pIRES2-EGFP、pMSCV-puro等质粒载体为架构,用不同酶类将目的片段连接构建pMSCV-mHCN4-EGFP及pMSCV-EGFP逆转录病毒载体。载体转染PT67包装细胞,收集逆转录病毒上清转染第3代扩增的mMSCs细胞,观察mMSCs的转染效果及阳性转染细胞的mHCN4通道动力学特性。结果mMSCs的转染效率约10%～20%。mHCN4基因转染组可记录到明显的时间依赖性的超极化激活内向电流(If),If的半数最大激活电压为-99.0±5.8mV,在-140mV电压时的激活时间常数为451±61ms。该电流对CsCl高度敏感;对照组细胞在超激化状态下无明显的电流出现。结论mHCN4外源基因可在mMSCs中成功表达起搏离子流通道,基因修饰后的mMSCs有可能成为一种有效的生物起搏种子细胞。     

浅谈儿童缺铁性贫血与感染性疾病的相关性与防治办法

儿童缺铁性贫血是全球性高发的营养缺乏病,是发展中国家的主要卫生问题之一。铁缺乏症(iron deficiency,ID)是最常见的营养素缺乏症和全球性健康问题,据估计世界1/3人口缺铁。本文探讨缺铁性贫血与感染性疾病发生的相关性。     

分子伴侣性自噬参与LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成

目的探讨分子伴侣性自噬在LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网(NETs)形成的作用及机制。方法采用PolymorphprepTM方法分离健康志愿者和抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)患者外周静脉血中的中性粒细胞,直接离体或LAMP-2抗体刺激健康人外周血中性粒细胞,通过自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和放线菌酮(CHX)进行干预,免疫荧光观测NETs的形成,免疫荧光法和免疫印迹法检测分子伴侣自噬相关蛋白LAMP-2A、Hsc70的表达。结果与正常中性粒细胞组相比,AAV患者中性粒细胞LAMP-2A表达增加(P=0.002 3);LAMP-2抗体可诱导中性粒细胞LAMP-2A、Hsc70蛋白表达明显上调(P<0.01),CHX能明显降低LAMP-2抗体引起的LAMP-2A、Hsc70蛋白表达(P<0.000 1);与3-MA组相比,CHX组能明显减少LAMP-2抗体诱导的NETs形成(P<0.000 1)。结论 LAMP-2抗体可诱导人中性粒细胞分子伴侣性自噬增强及NETs形成,放线菌酮可抑制此过程,提示分子伴侣性自噬可能参与了NETs的形成。     

新型肽-DNA复合颗粒性疫苗的制备方法

目的 研究、优化新型颗粒性肽-DNA复合疫苗的制备方法。方法以DNA沉淀试验、DNA阻滞试验、DNase Ⅰ保护试验和电镜分析对该疫苗颗粒的制备参数进行优化。结果在NaCl浓度为87．5mmol／L，电荷比为2的制备条件下，该疫苗形成直径为20nm的均一颗粒，并可有效介导DNA疫苗所携带基因的表达。结论该研究为颗粒性肽-DNA复合疫苗获得良好的免疫学效应奠定了基础。     

噬菌体颗粒抗原与MHC-Ⅱ类分子的交叉递呈位于内质网囊泡

目的研究噬菌体呈现颗粒交叉递呈过程中,MHCⅠ抗原肽复合物在细胞内的形成部位,及其与MHCⅡ类分子阳性区域和内质网标志物阳性区域的关系。方法构建呈现OVA257264表位的噬菌体颗粒,大量制备此重组噬菌体颗粒。巨噬细胞与重组噬菌体颗粒共孵育后,使用抗MHCⅠ抗原肽复合物特异性单克隆抗体,观察巨噬细胞中MHCⅠ抗原肽复合物形成的部位。使用抗MHCⅡ类分子、内吞相关区域标志蛋白的单克隆抗体以及能显示内质网的特异性荧光染料,观察巨噬细胞内MHCⅠ抗原肽复合物和内吞相关区域及内质网的关系。结果成功构建了呈现OVA257264表位的噬菌体颗粒,纯化并鉴定了此噬菌体颗粒表达OVA257264表位的情况。共聚焦显微镜观察到MHCⅠ抗原肽复合物和MHCⅡ类分子阳性区域共聚,进一步染色发现此复合物位于转铁蛋白受体和LAMP1(晚期内体/溶酶体的表面标志物)阳性区域中,同时此区域呈现内质网标志蛋白阳性。结论重组噬菌体颗粒能在MHCⅡ类分子阳性、内体内质网标志物阳性的区域内完成交叉递呈。     

穿膜序列对MHC-Ⅰ类限制性CTL表位呈递影响的研究

目的:从时间依赖性抗原呈递动力学的角度研究穿膜序列(CPP)对MHC-Ⅰ类限制性CTL表位呈递的影响.方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含CPP与H-2Kb限制性CTL表位OVA257-264的融合多肽,同时合成该表位N、C端自然延伸的抗原肽和无关对照肽.采用流式细胞仪(FACS)分析技术,检测抗原呈递细胞(APC)在不同时相点对上述各抗原肽进行MHC-Ⅰ类呈递的情况.结果:与不含CPP的抗原肽相比,含CPP的抗原肽中的CTL表位更易进入APC内MHC-Ⅰ类呈递途径,表现为呈递所需时间明显缩短(P<0.05),且同一时相点的呈递强度显著增加(P<0.05).结论:在外源性抗原肽中引入穿膜序列可明显促进其MHC-Ⅰ类限制性CTL表位的呈递效率,从而有效增强外源性抗原肽的免疫原性.     

中西医结合治疗小儿脑瘫42例

我院开展脑瘫治疗6 a,中西医结合治疗脑瘫3a.现将中西医结合治疗42例脑瘫病人与纯西医治疗23例做对比情况报道如下.     

喘息表现为主诉的胃食管反流17例临床分析

目的探讨喘息与婴幼儿胃食管反流症状相关性。方法从我院儿科1998年1月～2006年10月在门诊及住院明确诊断的胃食管反流病108例中筛选以喘息为主诉就诊的胃食管反流病17例进行临床分析。结果17例以喘息表现为主诉的胃食管反流在常规抗感染、平喘等治疗无效后采取调整体位、饮食,抗反流等治疗,喘息症状缓解,哮鸣音消失。结论胃食管反流可作为一个独立病因引起喘息。     

Th9细胞在慢性乙型肝炎病毒感染不同阶段中的作用

目的观察不同阶段的慢性乙型肝炎病毒感染者外周血Th9细胞频数及其功能分子IL-9的表达,并探讨其免疫学意义。方法选取处于免疫耐受期的无症状性HBV携带者(AsC)8例、处于免疫清除期的慢性乙型肝炎患者(CHB)28例、处于低(非)复制期的非活动性HBsAg携带者(IHC)16例以及健康人12例,分别作为AsC组、CHB组、IHC组和HC组。用流式细胞仪检测各组外周血Th9细胞,酶联免疫吸附试验检测血清IL-9水平,分析Th9细胞频数与临床指标如ALT、AST、TBil、DBil以及HBV DNA的相关性。结果 AsC组和CHB组外周血Th9细胞频数、IL-9水平较健康对照组明显升高(P0.05);IHC组和健康对照组之间外周血Th9细胞频数、IL-9水平差异无统计学意义(P0.05);AsC组和CHB组之间Th9细胞频数、IL-9水平差异无统计学意义(P0.05)。AsC组和CHB组Th9细胞频数与HBV DNA水平呈正相关(r=0.435,P=0.008);CHB组Th9细胞频数与ALT、AST、TBil、DBil水平无相关性。结论在慢性HBV感染的免疫耐受期和免疫清除期Th9细胞与HBV持续性感染及高复制状态有关,与免疫清除期内免疫介导的肝组织病理损伤无明确相关性。