加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的研究

目的 探讨加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验在碳青霉烯酶类药物敏感性降低的细菌中检测碳青霉烯酶的临床应用价值.方法 收集2009年～2010年南京军区总医院对碳青霉烯酶类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培南或厄他培南的MIC≥2 μg/ml)的肠杆菌科细菌65株;采用琼脂倍比稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验和加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;采用PCR检测多种β-内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 65株临床分离菌中,53株菌对亚胺培南不敏感(MIC＞4 μg/ml),51株菌对美罗培南不敏感(MIC＞4 μg/ml),58株菌对厄他培南不敏感(MIC＞2 μg/ml).65株菌中38株改良Hodge试验阳性,包括7株弱阳性和31强阳性;33株加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性,包括改良Hodge试验弱阳性2株和强阳性31株.经过对菌株进行β-内酰胺酶基因PCR和测序,发现加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性菌株均携带blaKPC-2;32株阴性菌株均未携带碳青霉烯酶酶基因,但其中5株改良Hodge试验弱阳性菌株携带blampC/blaESBL.结论 加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验可快速、有效地区分改良Hodge试验的真、假阳性,是检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的简便可靠方法,适用于临床微生物实验室.     

汶川地震伤员伤口感染细菌的耐药性分析

摘要：目的：分析汶川大地震伤员伤口感染细菌的耐药情况。 方法：收集2008年5月~7月地震伤患者送检伤口标本中分离的非重复病原菌共34株。所有菌株以Vitek-32全自动微生物分析仪鉴定到种,嗜麦芽窄食单胞菌药敏试验采用K-B法,其他细菌药敏试验采用Vitek-32配套药敏卡（GP119.GN48）,按2008年CLSI规定进行结果分析。 结果：80.0%葡萄球菌对苯唑西林耐药,对氨基糖苷类、大环内酯类及氟喹诺酮类的耐药率高达70%以上,但未检测到万古霉素和利奈唑胺耐药的革兰阳性菌;肠杆菌科细菌对β-内酰胺酶抑制剂类抗生素及碳青酶烯类药物都敏感,而非发酵菌耐药程度严重,除了对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为16.7%,其他均在30%以上,而且4株为多耐药菌（其中2株为泛耐药菌）。 结论：地震伤员伤口感染病原菌耐药较严重,应根据药敏试验结果合理使用抗生素,同时做好消毒隔离工作。     

黏质沙雷菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制研究

黏质沙雷菌是引起肠道外感染的重要病原菌,与许多院内感染的暴发流行有关,可引起肺炎、败血症和术后感染等[1].碳青霉烯类药物对产ESBL和AmpC酶革兰阴性杆菌尤其是肠杆菌科细菌具有良好的抗菌活性,随着碳青霉烯类抗菌药物的大量使用甚至过度治疗,临床耐药菌株也已出现且检出率逐年提高,给临床治疗和控制院内感染带来新的挑战.产碳青霉烯酶是引起临床肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要原因.本研究对从我院ICU收集的3株碳青霉烯类抗菌药物耐药的黏质沙雷菌耐药机制进行分析研究.     

4种氟喹诺酮类药物对耐甲氧西林葡萄球菌的敏感性分析

为了比较临床常用氟喹诺酮类药物的敏感性,本文选择共116株耐苯唑西林葡萄球菌（MRS）,进行加替沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星4种药物的最小抑菌浓度（MIC）检测,结果如下。     

增加头孢吡肟、头孢吡肟-克拉维酸的双纸片试验在肠杆菌科细菌中检测ESBLs的探讨

目的探讨在产AmpC酶细菌中检测ESBLs的方法。方法临床分离对头孢西丁和第三代头孢菌素耐药和（或）中介的111株细菌用于本研究，包括47株阴沟肠杆菌、24株肺炎克雷伯菌和40株大肠埃希菌。结合三维酶抑制试验，ESBLs基因和质粒型ampC基因PCR扩增试验结果对改进法，包括CLSI推荐的ESBLs确认法中的2对纸片（推荐法）和头孢吡肟、头孢吡肟克拉维酸纸片法进行评估。结果47株阴沟肠杆菌中，推荐法22株ESBLs阳性，改进法32株阳性。24株肺炎克雷伯菌中，推荐法18株ESBLs阳性或可疑阳性，改进法21株阳性。40株大肠埃希菌中，推荐法26株ESBLs阳性，改进法34株阳性。三维酶抑制试验、ESBL和ampC基因的扩增试验结果证实AmpC酶的存在干扰了推荐法ESBLs的检出率。结论在NCCLS推荐的确认试验中增加头孢吡肟、头孢吡肟一克拉维酸纸片不仅可以提高ESBLs阳性检出率，而且是一种简易有效的方法，可以在临床微生物实验室的常规敏感试验中同时检测肠杆菌科细菌的ESBLs，也可在一定程度上推测AmpC酶的存在。     

大肠埃希菌中AmpC酶和质粒介导的ampC基因的发生和检测

目的从临床分离的大肠埃希菌(E.coli)中检测AmpC酶及质粒介导的ampC基因。方法选择从临床分离的可疑产ESBLs和AmpC 2种酶的40株大肠埃希菌,用NCCLS推荐的微量肉汤稀释法检测耐药表型,三维酶试验检测AmpC酶和ES-BLs,PCR扩增质粒型ampC基因和ESBLs基因,肉汤交配法检测质粒型ampC基因的接合传递性。结果在三维试验中,40株菌中有39株产β-内酰胺酶,其中21株产ESBLs和AmpC 2种酶,15株单产ESBLs,3株单产AmpC酶。在PCR扩增试验中,8株扩增出质粒介导的ampC基因,7株为C IT型,1株为DHA型;34株扩增出b laTEM、b laCTX-M、b laOXA 3型ESBLs基因中的至少1个型,未扩增出b laSHV。8株携带质粒型ampC基因的菌株,共筛选出9株接合子。结论AmpC酶已在我院的大肠埃希菌中出现,由质粒编码的AmpC酶可在细菌间传递。     

大肠埃希菌质粒型碳青霉烯酶KPC-2检测和分析

目的 研究普外科病区出现的4株碳青霉烯类药物耐药大肠埃希菌的分子流行病学特征及耐药机制.方法 用K-B纸片法和琼脂稀释法进行药物敏感试验,三维酶抑制试验和EDTA-Na2协同试验分析酶的性质,通过脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)分析耐药株的分子流行病学特征,特异性PCR及序列分析、接合试验、碱裂解法提取质粒和质粒转化试验研究碳青霉烯耐药的分子机制.结果 4株大肠埃希菌对包括碳青霉烯在内的多种抗菌药物广泛耐药,PFGE显示4株分离株属于不同的克隆型,对碳青霉烯类药物的耐药主要由相对分子质量约56 000的质粒携带的KPC-2基因介导,转化试验显示对氨基糖苷类和喹诺酮类药物的耐药性并未携带在同一质粒上.结论 我院出现碳青霉烯耐药的大肠埃希菌,对碳青霉烯类药物的耐药主要由质粒介导的KPC-2基因引起.     

酵母菌培养鉴定方法的比较

为了综合判定酵母菌培养鉴定方法的优劣，我们采用常规鉴定法、生物梅里埃Ｖｉｔｅｋ３２－ＹＢＣ鉴定卡和法国ＣＨＲＯＭａｇｅｒ念珠菌显色培养基培养鉴定法等三种方法对３２１株致病性酵母菌进行鉴定比较。１　材料与方法１１　培养基　沙保弱培养基（沙保基）和手工鉴定培养基按常规自配，ＣＨＲＯＭａｇｅｒ念珠菌显色培养基（显色基）购自博赛公司，ＹＢＣ鉴定卡为生物梅里埃公司产品。１２　标本　３２１株致病性酵母菌从７４８份痰、中段尿、粪、宫颈分泌物、血等临床标本中分离。１３　方法　每份标本同时划线接种沙保基和显…     

一株同时携带质粒介导KPC-2、DHA-1基因对碳青霉烯类药物耐药的产气肠杆菌

目的研究一株临床分离的碳青霉烯类药物耐药产气肠杆菌的耐药机制和耐药基因传播机制。方法采用琼脂稀释法检测菌株对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),采用质粒接合试验、质粒提取、DNA分子杂交、等电聚焦电泳(IEF)、聚合酶链反应(PCR)、DNA测序和外膜蛋白分析研究菌株的耐药基因及其传递机制。结果 IEF显示临床分离的产气肠杆菌株含有3条β-内酰胺酶条带,等电点(pI)分别为5.4、6.7和7.8。PCR扩增及测序结果表明它们分别为TEM-1(pI 5.4)、KPC-2(pI 6.7)、DHA-1(pI 7.8)β-内酰胺酶。接合菌含有2条β-内酰胺酶条带,pI为6.7和7.8。接合试验、质粒提取和分子杂交试验结果显示KPC-2和DHA-1基因定位于同一个约56 kb大小的质粒上。与临床野生产气肠杆菌株相比,外膜蛋白电泳分析显示耐药分离株缺失41 000外膜蛋白。结论产气肠杆菌分离株对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能由A类2f组KPC-2酶介导,DHA-1酶合并外膜蛋白缺失也可能与碳青霉烯类药物耐药机制形成有关。     

结核性拇指骨髓炎合并恶臭假单胞菌感染一例

200 3年4月,我院从1例拇指骨髓炎患者的脓液和组织标本中分别分离出恶臭假单胞菌和人型结核分枝杆菌,报告如下。患者,男性,6 7岁,2 0 0 2年无明显外伤下出现左拇指近节疼痛,活动受限,给予中药外敷等对症治疗,效果不明显。后因左拇指肿痛渐重,在外院行切开引流并抗炎治疗,但1个月后伤口仍不愈合。2 0 0 3年4月2 2日来我院就诊。查体:左拇指畸形、明显肿胀,其根部内侧有一创口,流脓、压痛不明显,余肢体关节无红肿、畸形及功能障碍,无发热。X线片示,左拇指近节指骨骨髓炎伴病理性骨折。实验室检查:血常规:Hb 132g/L ,RBC 4 86×10 12 /L ,…