p27^kipl高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭转移的影响

目的探讨外源性人p27kip1的高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人p27kip1基因的腺病毒(Ad-p27kip1)体外转染人前列腺癌PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测目的基因不同水平的表达,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测PC-3转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化.以Ad-X-gal病毒作为对照.结果 RT-PCR、Western印迹法检测转染Ad-p27kip1后PC-3细胞的p27kip1-mRNA(320bp)、p27蛋白(27×103)表达阳性,转染后对PC-3细胞的生长有抑制作用,出现明显的G0-G1期阻滞,早期细胞凋亡率有所增加,与对照组比较差异有显著性,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制.结论重组腺病毒介导的人p27kip1基因在体外对前列腺癌细胞系PC-3的细胞增殖和侵袭力有明显抑制作用,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具.     

重肾双输尿管并发上位肾积水3例误诊分析

目的：分析重肾双输尿管并发上位肾积水误诊原因，探讨临床不典型囊肿、肾上腺囊肿的诊断方法。方法：回顾性分析３例重肾双输尿管并发上位肾积水误诊的临床资料。结果：左侧２例、右侧１例。均行手术治疗，术中发现为重肾双输尿管上位肾积水，解除梗阴因素并行整形，术后半年随访，无复发。结论：诊断肾囊肿、肾上腺囊肿时应考虑本病并进行相应检查；对于肾囊肿、肾上腺囊肿穿刺注射无水乙醇应慎重。     

前列腺干细胞抗原在前列腺组织的表达及意义

目的演探讨前列腺干细胞抗原(prostatestemcellantigen,PSCA)在前列腺组织中的表达及其意义。眼方法演应用核酸分子原位杂交穴ISH雪技术,对PSCAmRNA在26例前列腺癌、20例良性前列腺增生(BPH)和9例正常前列腺(NP)标本中的表达水平进行检测及定位。眼结果演PSCAmRNA在NP、BPH及前列腺癌组织表达阳性率分别为66.7%、70.0%及84.6%,强阳性率分别为0、10.0%及57.7%。NP与BPH组织表达水平无显著差异(P>0.05),其表达定位于前列腺上皮的基底细胞层;PSCAmRNA在前列腺癌组织主要表达于癌细胞,细胞间质和肌肉组织均无表达。前列腺癌与NP、BPH组织表达水平均有显著差异(P<0.01)。PSCAmRNA表达水平与前列腺癌临床分期、病理分级均无相关性(P>0.05)。眼结论演PSCA高表达是前列腺癌的共同特征;PSCA在前列腺癌早期诊断与免疫靶向治疗方面有良好的开发应用前景。     

人前列腺干细胞抗原的克隆及表达

目的 克隆人前列腺干细胞抗原(PSCA)编码基因,并在大肠杆菌中表达PSCA蛋白。方法 从培养的人前列腺癌细胞株中提取总RNA,反转录成cDNA,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增PSCA编码基因,克隆至pMD181-T载体,经DNA测序证实后亚克隆至谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-5X-1,重组质粒转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达PSCA/GST融合蛋白。结果 从培养的人前列腺癌细胞株中扩增出编码PSCA的cDNA(241 bp),序列测定证实与 Genebank上登录的序列一致;成功构建了GST融合表达载体 pGEX-5X-1/PSCA;表达了PSCA/GST融合蛋白(34.5×10~3)。结论 成功克隆了人PSCA基因,构建了GST融合表达载体并表达了 PSCA/GST蛋白。     

巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA（PSM－mRNA)并探讨其临床意义。方法：取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例（15例良性前列腺增生患者，15例健康青年男性）周围静脉血各10ml，用巢式RT－PCR检测PSM－mRNA，并培养LNCaP细胞进行阳性对照。结果：共有24例前列腺癌血标本检测出PSM－mRNA(60.0%)，前列腺增生及健康对照组中无1例阳性，19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2%)，未发现远处转移的21例中8例阳性（38．1％）。在10ml正常血液中加入10个LNCaP细胞，可检出PSM－mRNA。结论：PSM－mRNA可作为前列腺癌的辅助诊断指标，PSM－mRNA的检出率与前列腺癌分期（ABCD）、转移与否、血清PSA水平有相关性。     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具     

前列腺癌组织中前列腺干细胞抗原的表达及其意义

目的 :探讨前列腺癌 (PCa)组织中前列腺干细胞抗原 (prostatestemcellantigen ,PSCA)的表达及其意义。方法 :应用核酸分子原位杂交 (ISH)技术 ,对 2 6例PCa和 9例正常前列腺 (NP)组织中PSCAmRNA进行检测和定位。结果 :PSCAmRNA在PCa组织表达阳性率为 84 .6 % ,其中强阳性率为 5 7.7% ;NP组织阳性率为6 6 .7% (均为弱阳性 )。PCa与NP组织表达水平差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。PSCAmRNA在PCa组织主要表达于癌细胞 ,细胞间质和肌肉组织均无表达 ;NP组织表达则定位于前列腺上皮的基底细胞层。PSCAmR NA表达水平与PCa临床分期、病理分级均无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :PSCA在探索PCa起源、PCa免疫靶向治疗方面有重要意义     

人p27kip1可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达

目的:体外构建人p27kip1可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响.方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kip1 cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kip1基因腺病毒(Ad-p27kip1),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western 杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化.Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照.结果:构建的Ad-p27kip1病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western 杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用.结论:体外连接法成功地构建携带人p27kip1基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用.     

APC基因启动子区甲基化及环境因素与前列腺癌的关系

目的 探讨腺瘤样结肠息肉易感基因(APC)启动子区CpG甲基化及环境危险因素及相互作用与中国人群中前列腺癌(PCa)发病之间的关系.方法 应用亚硫酸盐修饰后测序法检测60例PCa及40例良性前列腺增生(BPH)组织中APC基因启动子区CpG甲基化情况.分析APC基因甲基化及环境危险因素与PCa患病之间的关系.结果 APC基因在PCa和BPH组织中CG位点甲基化率分别为48.84％和1.19％;基因甲基化率与前列腺特异性抗原(PSA)、Gleason评分、病理分期和PCa危险分期之间关系密切;饮茶者患PCa的危险性是不饮茶者的0.29倍.结论 APC基因启动子区甲基化与PCa发生及发展有关;其甲基化率的变化与PCa的危险分期关系密切.检测前列腺组织中相关基因甲基化状态,有望成为诊断早期PCa的一种方法.     

RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞失巢凋亡的影响

目的： 观察RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞株BIU-87增殖和失巢凋亡的影响。方法： 构建针对MTA1基因的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）,应用MTA1 siRNA转染处理人膀胱癌细胞株BIU-87后,分别采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白的表达,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测BIU-87细胞失巢凋亡。结果： 与对照组比较,MTA1 siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性（P<0.01）。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关（P<0.01）。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导BIU-87细胞失巢凋亡,且与浓度相关（P<0.01）。结论： MTA1 siRNA可抑制膀胱癌细胞株BIU-87增殖,诱导失巢凋亡可能是其机制之一。