肝细胞癌变核转录因子-κB及肿瘤坏死因子-α动态表达与改变

目的:探讨了肝癌形成过程中核转录因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态表达及其改变机制。方法:雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲制备肝癌模型,经病理组织学(HE染色)分析肝细胞的形态学变化,在癌变不同时期定量观察核蛋白、NF-κB和TNF-α动态变化。并分析了人肝癌癌灶及癌旁组织中NF-κB和TNF-α的表达水平。结果:病理组织学检查发现大鼠在喂饲2-FAA后,正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性,中期阶段肝组织中出现不典型增生,后期可见大量癌巢结节,均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞中仅见较低水平的NF-κB和TNF-α表达。诱癌后,随着肝细胞组织形态的变化,肝组织中NF-κB和TNF-α表达依次增强,均显著高于正常肝组织(P<0.01),且两者的表达高度相关(r=0.81,P<0.01);人肝癌的癌灶组织中NF-κB的表达,也较癌旁组织明显增强(P<0.01)。结论:肝细胞癌变早期NF-κB信号转导途径激活和TNF-α呈过表达状态。     

肝癌及癌周组织核转录因子-kB表达的免疫组织化学分析

目的:研究核转录因子(NF)-κB在肝癌和癌周组织中的表达及其临床病理学关系。方法:以自身配对法分别收集经手术切除患者的肝癌及其癌周组织各35份,以免疫组化染色法检测肝癌及其癌周组织NF-κB表达、胞内分布,以及病理学特征。结果:NF-κB阳性表达物呈棕黄色颗粒状染色,癌组织中NF-κB点灶状表达,定位于胞浆和细胞核;而癌周组织NF-κB阳性表达主要定位于胞浆,未见细胞核阳性。定性观察肝癌组织中NF-κB表达强度明显高于癌周组织,癌组织NF-κB表达阳性率为100%,癌周组织为68.6%,二者比较差异有非常显著性(χ2=13.1,P<0.01)。肝癌组织中NF-κB的表达强度与分化程度、肿瘤数目、HBsAg和肿瘤直径无关。结论:肝癌组织中NF-κB过表达,与肝癌的发生、发展密切相关。     

肝癌发生、发展过程中血管生成素-2的动态表达与改变

目的:观察肝癌发生发展过程中血管生成素-2(Ang-2)的动态改变及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系。方法:以2-乙酰氨基芴诱发雄性SD大鼠肝细胞癌变,观察癌变过程中肝组织的病理学变化,以免疫组织化学法或酶联免疫吸附法(ELISA)观察Ang-2和VEGF动态表达及相互关系。结果:诱癌过程中鼠肝细胞出现颗粒样变性、不典型增生、癌前病变及肝癌形成的动态变化;血Ang-2水平,在正常对照组为105.23±19.23ng/L、肝细胞变性组为140.17±25.16ng/L、癌前病变组为203.75±23.83ng/L和癌变组为222.39±23.31ng/L,随着病理组织学的改变呈梯度增加,肝癌组明显高于对照组和变性组(P<0.001);癌变过程中Ang-2与VEGF的动态改变呈显著正相关(r=0.785,t=8.00,P=0.000)。结论:肝细胞癌变过程中Ang-2及VEGF呈过表达状态,肝癌的发生发展与新血管生成密切相关。     

慢性肝病患者转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α和基质金属蛋白酶-13表达与临床价值

目的：分析慢性肝病患者转化生长因子（TGF）-β1、肿瘤坏死因子（TNF）-α及基质金属蛋白酶（MMP）-13的表达水平及其相互关系。方法：采用双抗体“夹芯”酶联免疫吸附法。对慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者及正常对照血TGF—β1、TNF—α及MMP-13进行检测，并分析其表达特点与临床价值。结果：慢性肝病患者血TGF—β1、TNF—α及MMP-13表达水平均高于正常对照组；肝癌患者组血清TGF—β1和TNF—α表达水平均明显高于肝硬化组和慢性肝病组（P〈0．01）；肝硬化组与肝癌患者组血MMP-13水平显著高于慢性肝炎组（P〈0．01）；慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者的血清中TNF—α和TGF—β1表达水平呈显著相关性，但MMP-13水平与TNF—α、TGF-β1间无明显相关性。结论：TGF-β1、TNF—α和MMP-13在肝癌发展过程中过度表达，动态分析有助于肝癌的诊断和鉴别。     

鼠肝细胞癌变发生过程中热休克蛋白gp96及其基因的动态表达

目的:探讨肝细胞癌变过程中热休克蛋白(HSP)gp96及基因的动态表达与变化。方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌,观察肝病理组织学(HE染色)和总RNA的改变,以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段;以免疫组化分析肝细胞癌变过程中gp96的动态表达。结果:SD鼠在喂饲2-FAA后,在诱癌早期肝细胞发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节。癌变过程中肝组织gp96-mRNA表达明显增加,且显著高于对照组肝组织(P<0.01);正常肝gp96蛋白表达较少,肝细胞癌变过程中gp96表达呈显著的梯度增加。结论:gp96参与肝细胞的癌变过程,癌变初期的过度表达有助于肝癌的早期诊断。     

人外周血心肌肌钙蛋白Ⅰ基因表达水平与心肌损伤程度的关系

目的：分子生物技术的发展，使监测心肌微小损伤成为可能。探讨外周血心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ，cTnⅠ)-mRNA对心肌损伤诊断的临床价值。方法：以电镜观察心肌损伤时的超微结构改变；从心肌组织和外周血中制备总RNA，以随机引物和反转录酶合成cTn Ⅰ-cDNA，再以巢式PCR扩增和测序分析；将cTn Ⅰ-mRNA扩增法用于临床诊断，与心肌酶谱(CK，CK-MB，AST，LDH)及cTnⅠ定性比较，以探讨其临床价值。结果：心肌损伤组织超微结构表现为心肌线粒体肿胀、嵴断裂、严重空泡样变及细胞核异形变、染色质浓缩边聚。巢式PCR法扩增cTn Ⅰ-mRNA片段的灵敏度为2μg／L测序分析证实从心肌组织及外周血中扩增基因片段与原序列完全一致。对62例慢性心脏病患者外周血cTn Ⅰ-mRNA的扩增分析，其阳性率明显高于酶谱或cTnⅠ定性分析(P&;lt;0．05)。结论：心肌损伤时cTn Ⅰ-mRNA释放进入外周血，为心肌损伤诊断的敏感基因标志物。     

肝癌发生过程中核因子-κB和Bcl-2动态表达及意义

目的：探讨肝癌形成过程中核因子-κB（NF—KB）及Bcl-2的动态表达与临床意义。方法：以2乙酰氨基芴（2-FAA）喂雄性SD大鼠制备肝癌模型,病理分析肝细胞的形态学变化,在癌变不同时期,分别以免疫组织化学法观察NF-κB和Bcl-2变化,并定量观察核蛋白、NF—κB和Bcl-2动态表达。结果：病理检查示鼠在喂2-FAA后,正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性,中期肝组织出现不典型增生,后期有大量癌巢结节．均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞中仅见较低水平的NF-κB和Bcl-2表达。诱癌后．随着肝细胞形态的变化．肝组织中NFKB和Bcl-2表达依次增强,均显著高于正常肝组织（P〈0．01）,且两者的表达高度相关（r=0．73．P％0．01）。结论：癌变过程中NF—κB信号转导途径激活和Bcl-2呈过表达状态与肝癌的发生、发展密切相关。     

转化生长因子-β1及端粒酶对肝癌早期诊断价值的动态观察

目的 探讨肝癌形成过程中转化生长因子（TGF）-β1和端粒酶表达及其早期诊断价值。方法 雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲制备肝癌模型，在肝细胞癌变过程中，观察肝脏总RNA变化，以病理组织学分析肝细胞形态学变化，采用酶联免疫吸附法（ELISA）分析肝细胞TGF-β1，以聚合酶链反应-ELISA分析端粒酶的动态变化。结果病理学证实大鼠在喂饲2-FAA后，正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性，中期阶段肝组织中出现不典型增生，后期可见大量癌巢结节，均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞及血清中仅见较低水平的TGF-β1和端粒酶表达。诱癌后，随着肝细胞组织形态的变化，肝组织及血清中TGF-β1和端粒酶表达水平逐渐增强，癌变组和癌前病变组均显著高于正常对照组（P〈0．05），且肝组织中TGF-β1、端粒酶和肝脏总RNA的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论 TGF-β1和端粒酶呈过表达与肝细胞癌变发生发展密切相关，且两者均有助于肝癌的早期诊断。     

大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶的表达及动态改变

目的：探讨大鼠急性脊髓损伤后不同时段髓内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA动态表达。方法：36只SD大鼠抽签法随机分组，任选一组作为对照。采用Allen法制作急性脊髓损伤模型，在损伤后2，6，12，24，48h等时段，以反转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)分析：iNOS mRNA表达。在脊髓损伤后24h，用免疫组化方法分析iNOS在脊髓不同类型神经细胞中的表达与分布，并以比色法测定脊髓损伤后血清NOS及一氧化氮的含量。结果：脊髓损伤后，神经元、星形细胞和小胶质中均可见iNOS表达，以神经元表达为主。脊髓损伤后2h可见iNOS表达0．56&;#177;0．02，24h达高峰1．20&;#177;0．05，48h开始降低0．70&;#177;0．06。血清中NOS及一氧化氮的动态改变与损伤组织iNOS mRNA变化趋势相一致。结论：研究资料提示脊髓损伤后脊髓内iNOS表达增高，过量产生的一氧化氮加重了继发性脊髓损伤。     

miRNA干扰质粒的构建及其对肝癌HepG2细胞IGF-Ⅱ表达的抑制作用

目的:研究miRNA干扰质粒对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝细胞癌表达的抑制作用,探讨IGF-Ⅱ在肝细胞癌治疗中的价值.方法:以人IGF-Ⅱ基因序列设计并合成4条miRNA,将miRNAA插入质粒构建pcDNA<'TA>6.2-GW/EmGFP miR 1-4干扰载体;筛选、转染HepG2细胞,以荧光定量PCR分...