腺病毒介导的EGFP基因在大鼠骨髓间质干细胞中的高效表达

目的:研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法: 在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞(rMSC), 用细菌同源重组法构建巨细胞病毒(CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因腺病毒载体(pAd-EGFP), 用293包装细胞制备腺病毒, 用EGFP重组腺病毒感染rMSC, 观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况, 用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率。用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导Ad-EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化。结果:Ad-EGFP可高效感染rMSC, 感染率为(36±2)%, 而脂质体法转染质粒pTrack-GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功;Ad-EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到β-巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式。免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶(NSE), 表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能。结论:腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率, 腺病毒载体介导的EGFP基因能够示踪rMSC分化为神经样细胞的过程。     

红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动

目的 通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法.方法 原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析.结果 一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加.结论 红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点.     

SPA体内注射治疗肿瘤的研究进展

葡萄球菌 A蛋白(Staphylococcalprotein A,SPA)是某些金黄色葡萄球菌的胞壁蛋白。十年来,依据SPA能结合人和多种哺乳动物血清IgGFc段的免疫学特性,把它作为免疫吸附剂在体外血浆灌流吸附封闭因子治疗肿瘤已取得一定疗效。近年来发现经体外免疫吸附的血浆能滤取到SPA,促进了人们将SPA直接体内注射治疗肿瘤的研究。本文就 SPA体内注射的代射、毒性作     

SPA,SAC和SAW对小鼠白血病L615和L759的疗效研究

本文以小鼠可移植性Ｔ淋巴细胞白血病Ｌ６１５和淋巴肉瘤白血病Ｌ７５９为模型，对ＳＰＡ、ＳＡＣ和ＳＡＷ三种生物制剂直接体内注射的免疫疗效作了研究。结果表明，ＳＰＡ和ＳＡＣ对Ｌ６１５小鼠无免疫保护作用，但能明显抑制Ｌ７５９细胞的增殖；ＳＡＷ则对Ｌ６１５和Ｌ７５９细胞的生长均无抑制作用。     

金黄色葡萄球菌对S180小鼠腹腔巨噬细胞超微结构的影响

作者以肉瘤Ｓ１８０小鼠为模型，经皮下注射金黄色葡萄球菌ＣｏｗａｎＩ（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓａｕｒｅｕｓＣｏｗａｎＩ，ＳＡＣ），在扫描电镜和透射电镜下，观察了ＳＡＣ体内治疗对带瘤小鼠腹腔巨噬细胞超微结构的影响。结果显示，与对照组相比，ＳＡＣ治疗后巨噬细胞体积明显增大，表面皱褶增多，有许多粗大的伪足，胞质丰富，胞质内充满大小不一的噬体，肥大细胞增多。结果提示，ＳＡＣ能使带瘤小鼠腹腔巨噬细胞明显活化，吞噬功能加强，这与其抗肿瘤机制可能有关，肥大细胞增多与其过敏反应可能有关。     

氯化钴对人eNOS基因启动子SP3替换改构体转录活性的影响

目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性变化。方法:含SP1替换SP3突变序列的引物通过PCR构建突变启动子pGL2-eNOS-repSP3载体,将已经构建好的pGL2-eNOS-repSP3载体和pGL2-eNOS分别转染HUVEC-12细胞,并以之前构建的SP1插入eNOS启动子改构体pGL2-eNOS-insSP1为阳性对照,通过双荧光素酶报告基因技术检测并比较不同浓度氯化钴刺激下eNOS启动子转录活性的变化。结果:成功构建了含SP1替换SP3突变序列的eNOS启动子改构体。氯化钴刺激后转染细胞,改构体eNOS启动子活性在一定范围内呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势;SP1替换SP3的eNOS启动子转录活性与SP1插入的eNOS启动子之间无显著差异。结论:pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS-insSP1两种改造方法在转录活性上没有显著差别。