超抗原SEB或SEC对T细胞分泌IL-2和杀伤 HcaF 细胞的影响

目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)在体外刺激T细胞分泌IL-2和杀伤肿瘤细胞的作用。方法不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用流式细胞术检测T细胞受刺激后不同时间分泌IL-2的水平,用MTT法检测活化的T细胞及其上清对肝细胞癌HcaF细胞的杀伤效应。结果SEB或SEC能刺激T细胞大量分泌IL-2,刺激剂量以100μg/L时活化T细胞的能力最强,最佳刺激时间为3～4d。SEB或SEC活化的T细胞对肝细胞癌HcaF细胞具有很强的杀伤效应,两者对T细胞分泌IL-2和杀伤HcaF细胞的作用无明显差异。结论SEB或SEC具有很强的刺激T细胞分泌和增强T细胞杀伤肿瘤细胞的能力,为其应用于肿瘤免疫治疗奠定了一定基础。     

ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。     

三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制。方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~ -1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响。结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强。结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc;tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性。     

MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。     

葡萄球菌A蛋白体内治疗方式对疗效的影响

本文以肉瘤S~(180)、艾氏腹水癌为模型,研究了SPA、SAC和SAW体内注射的治疗方式对疗效的影响。结果表明,纯品SPA对腹水型肿瘤无效,菌体SAC和SAW则效果显著,三者的治疗途径与肿瘤生长部位接近或相同时效果较好,SAC的治疗剂量与疗效有关。     

树突状细胞与肿瘤免疫

机体的免疫首先是由抗原提呈细胞(antigen presenting cells, APC)捕获抗原,经其加工、处理后将抗原信息传递给T、B淋巴细胞,并通过APC膜表面所表达的共刺激分子向T、B淋巴细胞提供第二信号进而诱发特异性免疫应答.APC是机体免疫反应的首要环节,能否进行有效的抗原呈递直接关系到免疫激活或免疫耐受的诱导.     

可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3 细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.     

细胞外信号调节激酶1/2的阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,以流式细胞术分析PD98059对淋巴细胞增殖的影响;利用碘化丙锭(PI)染色分析PD98059对细胞周期的影响。结果CFDA-SE染色分析显示,当浓度为5、10、20、30、40μmol/L时,PD98059对ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖关系(r=0.985,P<0.01)。选择最佳浓度30μmol/L的PD98059,观察其对不同时间淋巴细胞增殖的影响,结果发现,随着时间的延长,PD98059对淋巴细胞增殖的抑制作用明显降低(P<0.01),但抑制率随时间的延长而明显升高。细胞周期分析进一步表明,PD98059可阻止ConA刺激的淋巴细胞进入S期和G2/M期,而亚二倍体峰变化并不明显。PD98059对PDB Ion刺激的淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA的作用更明显。结论PD98059对小鼠淋巴细胞的增殖有明显地抑制作用,并可阻止其进入S期和G2/M期,提示ERK1/2信号通路的活化在淋巴细胞增殖中起重要作用。     

含CpG基序的寡核苷酸对树突状细胞的作用及其机制

树突状细胞(dendriticcells,DC)是目前所知功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresentingcells,APC),其最大特点在于能激活初始型T细胞(naiveTcell),是机体免疫应答的始动者,在免疫应答中起着重要的作用。DC的成熟、活化是其发挥免疫作用的先决条件,因而成为研究的焦点。目前已发现刺激DC成熟的多种因素,包括肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、CD40-CD40L、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和含有非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(cytosinephosphate-guanosine,CpG)基序的寡核苷酸(CpGmotif-containingoligodeoxynucle …     

Jagged-1对淋巴细胞生成细胞因子的影响

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞产生细胞因子的影响。方法:不同时间和不同浓度Jagged-1/Fc处理小鼠淋巴细胞,ELISA检测其培养上清中细胞因子的水平,并用Westernblot分析相关蛋白NICD和Del-tex的表达。结果:低浓度Jagged-1/Fc对淋巴细胞生成IL-17无明显影响,但高浓度Jagged-1/Fc(500μg/L)组IL-17的表达量是对照组的64.75倍,并且随着时间的增加而减少;IFN-γ随着Jagged-1/Fc浓度的增加而减少。Westernblot分析显示Jagged-1/Fc处理组的NICD和Deltex的表达明显高于对照组和Anti-Jagged-1组。结论:高浓度Jagged-1/Fc能够诱导淋巴细胞表达IL-17,可能在指导初始T细胞向Th17细胞偏离中发挥作用。