分离培养方法及冻存技术对犬骨髓间充质干细胞生长和增殖的影响

背景：骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏。 目的：建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法。 设计、时间及地点：对照观察细胞学实验，于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成。 材料：健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取。 方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养。将第2代骨髓间充质干细胞与12.5% DMSO混匀置于冻存管中，采用慢冻快融法进行冻存和复苏：将冻存管置于-4 ℃冰箱2 h,然后移入-30 ℃冰箱2 h，再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80 ℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80 ℃冰箱保存。复苏时将冻存管从液氮或- 80 ℃冰箱中取出,立即置37 ℃ 水浴并轻轻摇动, 1~2 min内迅速解冻。 主要观察指标：复苏前后细胞成生长活性及形态变化。 结果：分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强，传代细胞贴壁较快。经过液氮长期冻存后, 将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛。 结论：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞，应用慢冻快融技术进行冻存和复苏，较好的保持了冻存细胞的活力和功能。     

液氮冷冻法诱导犬股骨头缺血性坏死模型MRI影像与病理观察

目的：从MRI影像和病理表现2个方面研究液氮冷冻法诱导的犬股骨头缺血性坏死模型。方法：选取12只健康成年雄性Beagle犬,通过手术暴露其右侧股骨头后用一铁制漏斗套于股骨头,将100～150 mL液态氮倒入漏斗内,并维持冷冻3 min,用37℃温盐水将股骨头复温。左侧股骨作为对照。造模后即开始观察实验犬的一般情况,造模后1个月随机选取6只Beagle犬进行双侧股骨头MRI扫描及病理学检测,造模后2个月对剩余6只Beagle犬进行双侧股骨头MRI扫描和组织病理学检测。结果：①MRI扫描。造模后1个月可见实验侧股骨头内于T1W上出现均质低信号,T2W信号升高,STIR信号升高更为明显,呈散在、点状分布于股骨头内;关节腔内可见少量关节积液;股骨头形态规则,边缘光滑,大小与对侧正常的股骨头一致。造模后2个月实验侧股骨头内于T1W上呈低信号,T2W上呈略高信号,STIR上呈略高信号;关节腔内积液;股骨头边缘不规则,变扁,变小;股骨头碎裂。②组织病理学观察。造模后1个月实验侧骨膜不完整,软骨部分脱落,软骨层变薄,软骨细胞排列紊乱;骨小梁稀疏变细,结构紊乱,有碎片出现,骨细胞陷窝空疏,骨细胞核固缩,部分血管栓塞;骨髓腔内造血组织明显减少,细胞数目及网状结构较正常稀疏,可见到大量脂肪细胞、多形核细胞、炎性细胞浸润,脂肪细胞体积增大,有的融合成泡状。造模后2个月实验侧关节面破坏严重,组织结构紊乱、破碎,关节软骨表层脱落、碎裂,软骨细胞排列紊乱,切线层变薄,同源软骨细胞数减少,软骨下潮线区变薄,钙化带与软骨下骨小梁不连续,呈＂倒钟乳＂状,软骨内可见到破骨细胞性骨吸收,形成髓腔。软骨下血管内可见血栓形成。骨基质中有大量的空骨陷窝,仅见少量骨细胞散在,细胞核固缩偏移。骨小梁稀疏、变细、不完整,出现微骨折,或骨小梁碎裂、紊乱,部分溶解呈片状。破骨细胞散在其间,骨髓组织坏死明显,有纤维组织增生修复,脂肪细胞肥大,也可见到其坏死、崩解后留下的空腔。骨髓内见出血区,造血细胞减少,大量脂肪细胞聚集,部分融合成大泡。结论：液氮冷冻法诱导的犬股骨头缺血性坏死模型符合股骨头坏死病变的一般规律,具有良好的重复性,是股骨头缺血性坏死的理想模型。     

改良Kocher-Langenbeck入路切开复位内固定治疗髋臼骨折效果分析

目的探讨改良Kocher-Langenbeck (K-L)入路切开复位内固定治疗髋臼骨折的效果。方法采用回顾性分析方法,选择2012年5月至2017年5月本院收治的髋臼骨折患者63例,根据手术入路不同分为观察组33例和对照组30例,观察组采取改良K-L入路切开复位内固定,对照组采取传统K-L入路切开复位内固定,比较两组患者术中出血量、手术时间、患髋功能和术后并发症情况。结果观察组术中出血量、手术时间明显低于对照组(P0.05);观察组患髋功能优良率明显高于对照组(P0.05);术后1年,对照组出现髋关节重度关节炎、股骨头缺血性坏死共4例,均再次行全髋关节置换术治疗,观察组术后出现坐骨神经损伤2例,但均于12周内自行恢复。结论改良K-L入路治疗髋臼骨折可明显改善患者髋功能,具有创伤小、术中出血量少的优点,可作为治疗髋臼骨折的首选方法。