急性髓细胞性白血病微分化型的临床研究

目的探讨急性髓细胞性白血病微分化型的诊断和治疗。方法骨髓涂片作细胞化学分析。抗凝骨髓液用流式细胞单克隆抗体直接免疫标记技术检测白血病细胞表面相关抗原分化群 ,咐醇酯诱导分化试验 ,短期培养法直接法G显带分析白血病细胞染色体组型。用TA/HA/IdaA等方案化疗 ,达完全缓解 (CR)后作异基因外周血干细胞移植。结果骨髓增生极度活跃 2例 ,明显活跃 1例 ,活跃 1例 ,均未见Auer小体及嗜天青颗粒。早期微分化细胞NEC均 >90 % ,过氧化酶染色均阴性 ,糖元染色 2例弱阳性 ,2例阴性 ,非特异性酯酶染色 2例阳性 ,氟化钠不抑制。 1例咐醇酯诱导分化试验强阳性。免疫表型 3例CD+ 1 3,1例CD+ 1 5,1例CD+ 38,1例CD+ 1 1b,4例MPO弱阳性 ,CD1 9、CD2 均阴性 ,2例CD+ 7,白血病细胞染色体组型未见异常。 2例化疗达完全缓解 ,其中 1例现已存活 2 8月余 ;1例存活 1 9月 ,因合并肥厚心肌病放弃治疗 ,复发死亡。另 2例化疗无缓解 ,死亡 1例 ,自动出院 1例。结论细胞化学、细胞免疫表型是诊断急性髓细胞性白血病微分化型的重要依据 ,用AML方案治疗ANLL M0 有效。     

急性髓系白血病M2误诊为M3b 1例

1病例报告女,15岁。因头晕、乏力3个月于2005-10住某医院,血W BC42.6×109/L,RBC 1.55×1012/L,Hb 58 g/L,PLT 29×109/L。骨髓增生Ⅲ级,原始+早幼粒细胞78.5%,POX(++),诊断急性髓系白血病M 3b(APL),予维甲酸治疗。2005-11-22转北京大学人民医院,会诊发病时骨髓:骨髓增生Ⅲ级,原粒35%,早幼粒21%,可见A uer小体,诊断急性髓系白血病M 2,2005-11-22骨髓:骨髓增生Ⅴ级,原粒2%,早幼粒1%,免疫分型CD 34、HLA-DR、CD 38、CD 56阳性,CD 117、CD 33、CD 13阴性。染色体:46xx[5]/46xx t(8;21)[12]/46xx t(8;21)11q-[3]。PM L-RAR a…     

阶梯降温冷冻保存的自体外周血造血干细胞移植的临床研究

目的:观察低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存的自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的效果,并分析造血干细胞移植后患者生存情况。方法:使用3%羟乙基淀粉、4%白蛋白和5%二甲亚砜(DMSO)组成的冷冻保护剂保护自体造血干细胞,后置于-80℃低温冰箱,再置-196℃液氮罐长期储存,然后用于自体移植。2002年1月至2016年12月98例恶性血液病患者,其中包括急性淋巴细胞白血病10例,非急性髓系白血病24例,多发性骨髓瘤11例,恶性淋巴瘤53例的自体移植。对患者造血恢复时间、总生存率(overall survival,OS)、无进展生存率(progression-free survival,PFS)进行了统计分析。结果:除1例因颅内出血死亡未成功植入外,余97例患者均获得造血重建。中性粒细胞计数≥0.5×10~9/L所需时间平均为9.24±1.89 d,连续3 d不输血小板且血小板≥20×10~9/L所需时间平均为11.04±1.84 d。中位生存时间为47.6 (1-80)个月。1、3和5年总生存率分别为(97.2±1.9)%、(84.2±4.6)%和(77.8±5.6)%。3和5年PFS分别为(74.4±5.1)%和(61.2±6.2)%。结论:通过低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞自体移植,可以达到和传统的程序降温冷冻保存法一样的临床移植效果,且移植后并发症发生率无增多。     

MN基因定型在恶性血液病异基因造血干细胞移植植活证据检测中的临床研究

目的探讨MN基因型定型在恶性血液病异基因造血干细胞移植植活证据检测中简单可行的方法。回顾性分析了10例患者恶性血液病异基因造血干细胞移植的临床资料。方法分别采取受者和供者移植前及移植后14天及365天的血液标本,根据已知基因序列设计合成引物,采取PCR-SSP的方法检测方法的检测受者和供者移植后的基因型和基因亚型。结果 10例患者MN为5例,MM为3例、NN为2例或MGMG2例,MTMT1例,MGMT6例,MTN1例。与血清学结果完全吻合。显示两组样本的表型与基因型吻合很好,资料的说明性较好（P〉0.05）。结论血型基因检测的证据表明在同种异体造血干细胞移植中血型基因型可以作为早期监测的指标、标本用量少、科学敏感性强。     

As_2O_3为基础的联合方案治疗非霍奇金淋巴瘤

目的：评价三氧化二砷（As2O3）为基础的联合方案治疗非霍奇金淋巴瘤（NHL）的应用价值并探讨其作用机制，探索新疗法。方法：5例NHL患者应用亚砷酸注射液联合地塞米松、维生素C治疗，治疗过程中观察疗效及不良反应并动态监测血清VEGF、MMP-9含量变化。结果：5例患者中4例有效。所有患者均出现肝功能损伤，部分出现消化道症状、轻度血细胞下降、口周麻木等不良反应。3例B细胞型患者的VEGF值下降而2例富于T细胞的B细胞型患者上升，4例治疗有效患者MMP-9值下降而1例PD患者上升。结论：As2O3为基础的联合方案对NHL有一定治疗效果，通过下调VEGF、MMP9从而抑制血管新生可能是其作用机制之一。As2O3对VEGF水平的效应在不同细胞型NHL中可能不同而对MMP-9水平的效应与疗效相关。     

外周血干细胞移植治疗心梗后心功能不全的临床研究

目的探讨外周血干细胞冠脉内移植治疗心梗后合并心功能不全病例疗效、安全性及对左室功能的影响．方法选择2005年6月至2007年3月心梗后合并心功能不全冠心病53例，均行PCI治疗，根据是否行干细胞移植治疗分为干细胞移植组23例及对照组30例，干细胞移植组在常规冠心病治疗（药物与介入治疗）的基础上应用粒细胞集落刺激因子皮下注射动员自身骨髓干细胞，连用5d，第6天分离外周血干细胞悬液，将采集后的干细胞悬液经over the wire球囊导管注入梗死相关动脉（IRA），进行外周血干细胞移植，对照组经冠心病常规方法（药物与介入）治疗．在外周血干细胞动员、采集及经冠脉回输过程中，观察其安全性及不良反应．两组在移植前及移植后6个月内运用超声心动图评价左室形态及心功能指标、室壁节段运动指数，比较两组生存率及心脏事件发生率．结果6个月时干细胞移植组冠脉内移植术前、术后比较心脏收缩末容积（ESV）明显减小，舒张末容积（EDV）明显减小，左室射血分数显著增高，左室壁节段运动指数明显减低，比较均有统计学差异，对照组上述指标PCI术前、术后比较均有改善，但无统计学差异，干细胞移植组与对照组术后上述指标比较有统计学差异，两组术后6月生存率及心脏事件发生率无统计学差异．不良反应：PBSC动员时出现乏力、恶心共2例次．结论经皮经腔冠状动脉内移植自身PBSC治疗心梗后合并心功能不全病例是安全的，可在近期有效减轻左室重构，改善心功能．     

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的探讨Woltmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用。方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径．AraC诱导细胞凋亡，药物作用214h后，细胞经DNA特异性荧光染色，用流式细胞仪(FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达。Multicyele Verson 4．00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变，实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组，凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期。作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低，说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡。结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖。并可以通过抑制PBK通路使K562细胞阻滞于GI期。Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达，促进K562细胞的凋亡。Wortmannin属于细胞周期特异性药物。     

SCID小鼠腹腔内人B细胞非霍奇金淋巴瘤模型的建立

目的 为探讨人B细胞非霍奇金淋巴瘤诊治策略提供动物模型.方法 采用4-5周龄的SCID小鼠,经腹腔接种7.5×106 个Namalwa细胞.观察小鼠的发病情况及生存时间.取瘤组织进行HE及免疫组化染色检测CD20,CD79a,Ki-67和CD3抗原的表达.结果 Namalwa细胞在SCID小鼠腹腔发病的主要表现是腹腔出现肿块,时间（18.67±1.94） d,伴竖毛、精神萎靡、行动迟缓,一般情况随时间的延长而不断恶化.荷瘤SCID小鼠中位存活时间（28.00±6.36） d.瘤细胞主要浸润肠壁、肠系膜,胃、胰、肝、脾、肾、肺的周缘、盆腔以及邻近肌组织和皮肤.CD20在瘤组织表达为散在阳性,CD79a和Ki-67为弥慢阳性,CD3为阴性.结论 成功建立SCID小鼠腹腔人Namalwa细胞株B细胞非霍奇金淋巴瘤模型,为探索淋巴瘤提供载体.     

异源骨髓间充质干细胞抑制树突状细胞活化杀伤细胞的增殖

目的 通过共培养异源的人骨髓间充质干细胞和树突状细胞活化的细胞因子激活的杀伤细胞(DC-CIK细胞),观察DC-CIK细胞的细胞周期,初步探讨骨髓间充质干细胞的免疫调节机制.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养健康骨髓间充质干细胞和外周血单个核细胞,用多种细胞因子诱导培养外周血单个核细胞中贴壁和悬浮细胞分别为树突状细胞和杀伤细胞.将骨髓间充质干细胞与DC-CIK细胞以1∶5,1∶10,1∶20共培养4 d,采用流式细胞术检测DC-CIK细胞的细胞周期.结果 骨髓间充质干细胞呈长梭形,表达CD+29CD+444双阳性的细胞为93.6%,实验选用第三代后的细胞.在培养第9天树突状细胞表达CD1α人类白细胞Ⅱ类抗原(HLA-DR+)]双阳性细胞数为98.5%.DC-CIK细胞表达CD+3CD+56的细胞数为(29.2±12.2)%.骨髓间充质干细胞使DC-CIK细胞滞留在G0/G1期,且与细胞比例呈正相关.以1∶5,1∶10,1∶20的比例共培养4 d的DC-CIK细胞的G0/G1期和S期分别为(91.0±3.3)%和(2.8±0.6)%,(88.7±3.0)%和(5.1±2.8)%,(83.7±1.7)%和(8.7±3.4)%.对照组(同步化DC-CIK细胞)为(73.4±1.0)%和(17.4±0.6)%.结论 骨髓间充质干细胞可通过抑制DC-CIK细胞的细胞周期而发挥免疫调节作用.     

半夏提取物调节Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达诱导白血病细胞凋亡

背景:温热中药半夏拥有可人工广泛种植、易提纯等优势,其提取物可抑制慢性髓系白血病、急性髓系白血病、急性T淋巴白血病细胞增殖,但是作用机制尚不明确。目的:探讨中药半夏提取物对3种白血病细胞凋亡的作用机制。方法:慢性髓系白血病细胞株(K562)、急性髓系白血病M3细胞株(HL-60)、急性T淋巴白血病细胞株(C8166)在半夏提取物5种浓度梯度中分别作用24,48,72 h,采用CCK-8法评估3种白血病细胞增殖情况并从中筛选出有明显抑制作用的中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度。然后进一步采用流式细胞术检测3种白血病细胞早期凋亡发生率,采用RT-PCR与Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与结论:①5种质量浓度的半夏提取物作用3种白血病细胞具有细胞增殖抑制作用,中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度半夏提取物增殖抑制率较高,与低质量浓度组(100 mg/L)、对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);②中、高质量浓度半夏提取物可诱导3种白血病细胞早期凋亡;③中、高质量浓度半夏提取物可以下调3种白血病细胞的Bcl-2 mRNA表达,上调Bax及Caspase-3 mRNA表达(P<0.05;P<0.01);④中、高质量浓度半夏提取物作用72 h后,K562、C8166细胞的Bcl-2蛋白条带明显减弱,而HL-60细胞无减弱变化;Bax及Caspase-3蛋白条带明显增强;⑤结果表明,半夏提取物能有效抑制髓系白血病、T淋巴细胞白血病细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与其调节Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。