滞育对家蝇幼虫蛋白质和核酸的影响

目的观察家蝇3龄幼虫滞育前后血淋巴中蛋白质及组织匀浆脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇3龄幼虫滞育,经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳观察非滞育组及各滞育组血淋巴蛋白组分变化;紫外分光光度计测定非滞育组及各滞育组RNA和DNA含量。结果（1）滞育组和非滞育组家蝇幼虫蛋白条带数目无变化,只是滞育20d组的蛋白含量明显高于非滞育组,其中以85kd处最明显,光密度值为203475．69。（2）各滞育组DNA均比非滞育组明显降低;滞育10d组、15d组RNA明显降低,滞育20d组则明显升高;RNMDNA在滞育10d组、15d组明显降低分别为0．598、0．546μg／mg,滞育20d组则明显升高为1．337μg/mg。结论滞育家蝇幼虫体内可能无滞育关联蛋白（DAP）的存在,RNA／DNA比值的降低和升高可作为家蝇幼虫滞育开始及滞育结束的信号。     

结膜吸吮线虫MIF蛋白原核表达及生物学效应鉴定

目的 克隆、表达结膜吸吮线虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF),纯化重组Tcp-MIF蛋白,并验证其生物学效应。方法 将筛选的MIF基因片段构建到pET-SUMO原核表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3);异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl thiogalactoside, IPTG)诱导表达;利用HisLink亲和层析柱进行蛋白纯化及质谱鉴定;将纯化的Tcp-MIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞,运用CCK8、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、免疫印迹法(Western blotting, WB)检测MIF蛋白生物学效应。结果 成功构建pET-SUMO-MIF重组原核表达质粒,Tcp-MIF重组蛋白主要以可溶形式表达,相对分子质量约为26.80 KD。纯化Tcp-MIF蛋白能够促进THP-1巨噬细胞的增殖,减少促炎因子(TNF-α),增加抑炎因子(IL-10)的产生;可通过与THP-1巨噬细胞表面TLR4受体结合,激活NF-κB通路。结...     

蝇蛆营养成分及其在养殖中的应用进展

蝇蛆含有大量维生素、氨基酸、微量元素等营养成分，并可以分泌抗菌活性物质等，且其具有来源广泛、饲养周期短、抗病力强、繁殖力强、饲养成本低等特点，其优势逐渐在各个领域崭露头角，并取得了较好的效果。本文就其营养成分以及在养殖中的应用研究进行综述。     

家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用

目的研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用。方法在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态。对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基。结果JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高,G0/G1期下降。对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用。     

脂多糖诱导家蝇胚胎细胞抗菌肽的初步研究

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导家蝇胚胎细胞产生抗菌肽的抗菌活性。方法LPS诱导家蝇胚胎细胞系(MDEC-07114),收集诱导后4、8、12、16、20、24h上清液,三氯醋酸提取抗菌肽,抑菌圈法测定抗菌活性。结果LPS作用处于对数生长的家蝇胚胎细胞后,细胞形态、增殖无明显变化;诱导后8h家蝇胚胎细胞开始产生抗菌肽,16h达高峰,诱导后24h仍有抗菌活性。结论LPS可诱导家蝇胚胎细胞系MDEC-07114产生具抗菌活性的抗菌肽。     

旋毛虫感染小鼠血清IL-12水平的动态观察

给昆明小鼠口饲含150±5条旋毛虫幼虫的骨骼肌，同时设正常对照组。分别于感染后的7、21 、35 和49 d 眼眶静脉取血，分离血清，用双抗夹心ELISA检测血清中白细胞介素12（IL-12）的含量。感染后7 、21 和35 d小鼠血清IL-12水平与正常对照组比较明显降低（P<0.01），感染49 d血清中的IL?鄄12接近正常对照组（P>0.05）。说明小鼠感染旋毛虫后，早、中期血清IL-12水平降低，晚期则接近正常。     

猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗的构建及鉴定

目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18。电穿孔法将该质粒导入Bb,构建猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果全基因合成789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段。从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切得到4 944bp的pGEX-1λT载体片段和789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,与预期结果相符;以该重组质粒为模板进行PCR扩增得到789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,经测序基因片段为789bp,与预期大小相符。结论成功构建了猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础。     

不同饲养条件对家蝇幼虫生长发育的影响

目的用不同饲养条件饲养家蝇幼虫,研究人工饲养家蝇幼虫的方法。方法观察不同幼虫饲养密度、含不同浓度的奶粉和白砂糖的饲料及不同光周期对家蝇幼虫生长发育的影响。结果每50g麦麸饲养300条幼虫为宜,不能超过500条;每50g麦麸饲料中加入2g奶粉和1g白砂糖有利于家蝇幼虫的生长发育;每日光照8h以上各组的幼虫生长发育无差别,而每日光照4h组及无光照组幼虫发育受抑制。结论家蝇幼虫饲养条件以每50g麦麸饲料中加入2g奶粉和1g白砂糖、饲养300条幼虫为宜,每日光照不少于8h。     

家蝇细胞培养方法的探讨

目的探讨家蝇细胞培养的方法。方法分别取家蝇初孵幼虫、无菌家蝇卵初孵幼虫以及家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,采用不同方法传代,观察细胞生长。结果取家蝇初孵幼虫进行培养,易出现霉菌污染,培养不能成功;用无菌的家蝇卵初孵幼虫进行培养,细胞生长较慢;用家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,细胞生长快。直接吹打法传代,细胞不能生长;机械刮取法细胞能生长,但细胞容易丢失;胰酶消化法传代,细胞能迅速生长。结论取家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,并用胰酶消化法传代是最佳的方法。     

家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性

目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.