红鲫Soxl和Soxllb基因保守区的克隆与表达分析

目的进一步理解鱼类Sox基因的进化和表达方式。方法采用兼并引物PCR，从红鲫基因组DNA中克隆、测序和分析Sox基因。采用RT—PCR，研究Sox基因在红鲫13种不同组织中的表达。结果克隆和测序了红鲫Soxl-1、Soxl-2、Soxl-3、Soxllbl-1、Soxllbl-2和Soxllb2基因的HMG盒区序列。Soxl-1、Soxl-2和Soxl-3编码相同的氨基酸，在肝、脾、肾、心脏和脑组织中均有不同程度表达，在脑组织中检测到大量的转录物。Soxllbl-1和Soxllbl-2编码相同的氨基酸，系统发生树显示，红鲫Soxllbl和Soxllb2基因与斑马鱼Soxllb基因聚在-起，而远离斑马鱼Soxlla基因。在下丘脑和小脑中检测到Soxllbl-1和Soxllbl-2基因转录物，而没有检测到Soxllb2基因转录物。结论Soxl和Soxllb基因在进化过程中发生了复制。Soxl基因可能在神经系统中起着重要的作用。Soxllbl-1、Soxllbl-2和Soxllb2有相似而不同的表达方式。     

基于多元智能理论的《细胞工程》实验评价研究

在分析多元智能理论基本观点的基础上,结合《细胞工程》实验教学实践,从评价方法以及评价体系等方面对多元智能理论进行了介绍,指出该理论有助于培养学生的综合分析能力。     

Daxx在介导ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡中的作用

目的 初步探讨Daxx在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡中的作用.方法 通过MTT比色法检测ox-LDL对小鼠源性巨噬细胞(RAW264.7)细胞生长的影响:用AO/EB染色、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究ox-LDL诱导的细胞凋亡.eal time PCR检测细胞内Daxx mRNA的表达情况.结果 ox-LDL能抑制RAW264.7细胞的生长,抑制作用呈剂量-效应关系;50 mg/L ox-LDL处理RAW 264.7细胞48 h后,AO/EB染色细胞呈凋亡特征性改变,并且DNA断裂片段分析显示电泳图出现梯形条带;流式细胞检测显示相同时间不同浓度ox-LDL(0、12.5、25、50、75 mg/L)处理RAW264.7细胞48 h和相同浓度不同时间(50 mg/L,48、72 h)处理细胞,细胞凋亡率逐渐升高;Real time PCR结果表明不同时间和不同浓度的ox-LDL处理RAW264.7细胞后,Daxx mRNA表达水平呈时间和浓度依赖性增加,其中50 mg/L ox-LDL处理细胞48 h组Daxx mRNA表达最高.结论 ox-LDL有诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡的作用,其机制可能与Daxx表达增高从而启动细胞凋亡有关.     

全氟辛烷磺酰基化合物致人肝L-02细胞的凋亡作用

目的 研究全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)致人肝L-02细胞的凋亡作用及凋亡相关基因bax、bcl-2、caspase-9和caspase-3 mRNA表达的变化. 方法 当L-02细胞处于对数生长期时,分别加入不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)的PFOS处理24、48和72 h,MTT试验检测细胞的生存率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测bax、bcl-2、caspase-9和caspase-3 mRNA的水平. 结果 PFOS能抑制L-02细胞的增长,诱导细胞凋亡,并伴随bax、caspase-9和caspase-3 mRNA水平的升高和bcl-2 mRNA水平的下降.当400 μmol/L PFOS处理L-02细胞48 h,bcl-2、bax、caspase-9和caspase-3分别是对照组的0.25、3.90、3.53和2.91倍,细胞凋亡率由对照组2.7%上升至24.3%. 结论 PFOS能抑制L-02细胞的生长,诱导细胞凋亡,其分子机制可能是上调bax、caspase-9、caspase-3基因和下调bcl-2基因的表达.     

鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0018融合蛋白原核表达载体的构建、表达及其在Hela细胞中的定位

目的构建鹦鹉热嗜衣原体（Cps）CPSIT_0018原核表达载体,表达并纯化该融合蛋白,观察其在感染的Hela细胞中的定位。方法采用PCR技术从Cps 6BC基因组中扩增CPSIT_0018基因,并构建pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,然后转化到宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导His-CPSIT_0018融合蛋白表达,进一步用该融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接免疫荧光法分析His-CPSIT_0018蛋白在Hela细胞中的分布特征。结果成功构建了pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;在Cps感染的Hela细胞中CPSIT_0018的分布与主要外膜蛋白MOMP相似,而与包涵体膜蛋白IncA的分布模式不同。结论成功克隆表达了His-CPSIT_0018,该蛋白定位在Cps包涵体内。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ae—DEVD—CHO预处理组，进行体外细胞培养，采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法，进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究，检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNALadder检测。结果DADS诱导前后，HL-60细胞形态学发生明显改变，DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长，在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化，且与剂量和作用时间呈依赖关系，Caspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡，其过程与Caspase-3活化相关。     

红鲫Sox1和Sox11b基因保守区的克隆与表达分析

目的 进一步理解鱼类Sox基因的进化和表达方式.方法 采用兼并引物PCR,从红鲫基因组DNA中克隆、测序和分析Sox基因.采用RT-PCR,研究Sox基因在红鲫13种不同组织中的表达.结果 克隆和测序了红鲫Sox1-1、Sox1-2、Sox1-3、Sox11b1-1、Sox11b1-2和Sox11b2基因的HMG盒区序列.Sox1-1、Sox1-2和Sox1-3编码相同的氨基酸,在肝、脾、肾、心脏和脑组织中均有不同程度表达, 在脑组织中检测到大量的转录物.Sox11b1-1和Sox11b1-2编码相同的氨基酸,系统发生树显示,红鲫Sox11b1和Sox11b2基因与斑马鱼Sox11b基因聚在一起,而远离斑马鱼Sox11a基因.在下丘脑和小脑中检测到Sox11b1-1和Sox11b1-2基因转录物,而没有检测到Sox11b2基因转录物.结论 Sox1和Sox11b基因在进化过程中发生了复制.Sox1基因可能在神经系统中起着重要的作用.Sox11b1-1、Sox11b1-2和Sox11b2有相似而不同的表达方式.     

牛初乳通过调节肠道菌群对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用

为探讨牛初乳(BC)对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用,采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建肠炎模型,监测小鼠体重、肠炎评分;应用HE染色、组织病理学评分观察牛初乳对小鼠肠炎影响;实时荧光定量PCR(QPCR)监测肠道菌群中常见微生物的含量。结果显示DSS组小鼠体重降低,肠炎评分升高,结肠组织炎性损伤明显,肠道内大肠杆菌含量增加,双歧杆菌、乳酸杆菌含量减少;与DSS组比较,BC+DSS组小鼠体重上升(P＜0.01),肠炎评分降低(P＜0.01),结肠组织炎性损伤显著缓解,三种微生物含量均恢复到正常对照组水平。这表明牛初乳可通过调节肠道菌群改善小鼠溃疡性结肠炎。     

氯化三丁基锡致巨噬细胞凋亡作用

目的 探讨氯化三丁基锡(tributyltin chloride,TBTCl)致巨噬细胞株RAW264.7细胞的凋亡作用。方法 当RAW264.7细胞处于代数生长期时,分别加入不同浓度(0.0,0.025,0.05,0.10,0.20,0.40mg/L)的TBTCl处理48h,分别用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,观察TBTCl对RAW264.7细胞增殖影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪检测TBTCl对RAW264.7细胞的凋亡率。结果 TBTCl能抑制RAW264.7细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC₅₀)=0.179mg/L;TBTCl也能诱导细胞的凋亡,当TBTC1达到0.40mg/L时,细胞凋亡率达到19.5%。结论 TBTC1可诱导细胞凋亡。     

铅的体外胚胎毒性

目的探讨铅在胚胎发育中的毒性及对胚胎组织GSH和MDA含量的影响.方法采用全胚胎培养技术,将孕8.5天的昆明种小鼠脱臼处死,分离胚胎,置不同浓度铅 (0, 30, 60, 90 mg/L)的大鼠即刻离心血清(immediately centrifugal serum, ICS)中旋转培养48 h,观察铅对体外培养小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响.应用分光光度法测量胚胎组织谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量.结果铅在30 mg/L能抑制胚胎生长发育和形态分化,诱发卵黄囊生长和血管分化不良以及神经管不闭合,胚胎发育异常率增高;60和90 mg/L除具有上述特点外,还可见后脑水肿.各染毒组胚胎组织GSH含量均低于对照组(P＜0.05),MDA含量高于对照组(P＜0.05).结论体外实验条件下,铅对小鼠胚胎具有胚胎毒性和致畸性.