巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成

目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞6h、12h、24h、48h后,ELISA法测定细胞培养上清中TGF-β1蛋白含量;100μg/L的rMIF作用于MRC-5细胞48h,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白合成;100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞48h,刺激前0.5h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果:与对照组比较,100μg/L的rMIF对细胞培养上清TGF-β1蛋白含量无显著影响(P>0.05);100μg/L的rMIF可显著促进Ⅰ型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)合成。Y27632预刺激后,100μg/L的rMIF促进Ⅰ型胶原mRNA和蛋白合成能力显著减弱(P均<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。     

pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定

[摘要] 目的 构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株。方法 采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列, 将之与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平。结果 pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建。Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,具有统计学意义（P﹥0.01）。结论 成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础。     

老年脑出血昏迷患者继发MODS多因素分析

目的探讨老年脑出血昏迷患者继发多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的主要危险因素。方法临床纳入老年脑出血昏迷患者50例,根据入院后有无发生MODS分为MODS组与非MODS组。患者入院后24h内进行急性生理和慢性健康状况(APACHE-Ⅱ)评分以及格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分,同时检测患者血清白介素-1(IL-1)、IL-6、IL-10活性、空腹血糖(FBG)、脑出血体积,分析其与MODS的关系。结果 MODS组患者与非MODS组相比,IL-10水平、FBG水平、APACHE-Ⅱ评分以及出血体积显著升高,而GCS评分显著较低,差异均有统计学意义(P0.05);多元Logistic回归分析显示,血清IL-10水平、FBG水平、出血体积以及APACHE-Ⅱ评分越大,MODS发生率越高(P0.05)。结论对于老年脑出血昏迷患者入院后24h内上述指标的变化,均会影响MODS发生率,均能作为老年脑出血昏迷患者继发MODS的早期预测指标。     

谷氨酰胺联合乌司他丁治疗ICU脓毒症患者的临床疗效及机制分析

目的 观察谷氨酰胺联合乌司他丁治疗脓毒症患者的临床疗效及机制。方法 选取2014年3月-2017年6月中山市博爱医院重症监护室收治的脓毒症患者78例,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组39例。对照组给予乌司他丁40万U/次,3次/d;观察组在对照组的基础上给予谷氨酰胺0.4 g/（kg·d）,均治疗1周。比较两组治疗前后APACHE Ⅱ评分、血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-6、IL-1β及免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）浓度的变化,比较两组不良反应的发生情况。结果 治疗前,两组患者APACHE Ⅱ评分、血清TNF-α、IL-6、IL-1β及IgG、IgA、IgM浓度间无显著性差异。治疗后,观察组APACHE Ⅱ评分为（14.2±3.7）分,显著低于对照组的（16.3±4.4）分,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β浓度均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义（P<0.05）,且观察组以上指标明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者血清IgG、IgA、IgM浓度均显著升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义（P<0.05）,且观察组以上指标显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗期间,观察组不良反应发生率（2.56%）与对照组（5.13%）无差异。结论 谷氨酰胺联合乌司他丁治疗脓毒症疗效好,能抑制炎症反应并促进患者免疫功能的恢复,值得临床应用于推广。     

抗人LOC51255单克隆抗体的制备及亚细胞定位

目的:制备抗人LOC51255单克隆抗体,并构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,了解LOC51255在人肝癌细胞株HepG2中的亚细胞定位情况,为进一步研究其功能提供实验工具和基础.方法:以纯化的重组蛋白pET28b/LOC51255为抗原,免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备LOC51255单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定;通过构建含红色荧光蛋白(pDsRed1)的pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,转入人肝癌细胞株HepG2表达重组蛋白,并对LOC51255进行亚细胞定位.结果:成功建立2株稳定分泌抗LOC51255单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA检测抗LOC51255单克隆抗体的腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600.2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1.通过Western blot实验证实,2株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性LOC51255蛋白.荧光显微镜观察发现LOC51255主要定位于HepG2细胞的细胞浆.结论:成功制备了2株效价高、特异性好的抗LOC51255单克隆抗体,制备的单克隆抗体可用于LOC51255蛋白的鉴定;亚细胞定位分析证实LOC51255主要表达于HepG2细胞的胞浆,为LOC51255的生物学功能研究奠定了基础.     

PSMA7在多种肿瘤细胞的表达及意义

[摘要] 目的 了解人蛋白酶体α亚基PSMA7在多种肿瘤细胞的表达情况,为下一步研究作准备。方法 通过Western blot检测比较PSMA7在不同肿瘤细胞中的表达水平。结果 Western blot检测显示PSMA7在所有检测细胞中广泛表达。与人胚肾293T细胞（正常细胞对照）相比,PSMA7在A549、BACP-37、HeLa、HO-8910、MCF-7和NCI-H446细胞中无明显差异（均P﹥0.05）,而在Lovo中表达降低（P﹤0.05）,SW480中增高（P﹤0.05）。与人chang肝细胞（正常细胞对照）相比,PSMA7在肝癌细胞系Bel7402和QGY7703中无明显差异（P﹥0.05）,在SMMC7721和HepG2中明显增高（P﹤0.05）。结论　PSMA7在肿瘤细胞中广泛表达,具有一定的组织特异性。 [关键词] PSMA7;肿瘤细胞;Western blot;表达     

人基因XAPC7在肺腺癌细胞及组织中的表达和定位

目的了解XAPC7在肺腺癌细胞和组织中的表达及定位情况,为后续的功能研究提供线索。方法首先采用Western-blot技术检测XAPC7在HBE135-E6E7正常支气管上皮细胞株、A549肺腺癌细胞株、NCI-H446小细胞肺癌细胞株中的表达;再用细胞免疫荧光技术,以HBE135-E6E7和A549细胞为研究对象,用鼠抗人XAPC7单克隆抗体分析该蛋白的细胞定位情况;最后利用免疫组织化学法随机检测34例肺腺癌及相应癌旁组织中XAPC7蛋白的定位及表达。结果 Western-blot显示：与HBE135-E6E7相比,XAPC7在NCI-H446中表达明显降低（P〈0.05）,在A549中表达有所增加,但差异无统计学意义（P〉0.05）。激光共聚焦显微镜观察发现XAPC7在A549中主要定位于细胞浆,胞核中少见,而在HBE135-E6E7中除胞浆外,胞核中也有较多分布。免疫组化显示：XAPC7在肺腺癌和肺鳞癌组织细胞的胞浆和胞核中均有表达。在34例肺腺癌中,癌组织胞浆中XAPC7蛋白的表达明显高于癌旁组织胞浆的表达（Z=-4.341,P=0.000）,而在癌组织与癌旁组织的胞核中XAPC7蛋白的表达差异无统计学意义（Z=-0.167,P=0.867）。另外,XAPC7蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织分化和有无淋巴结转移无关（P均〉0.05）。结论 XAPC7在肺腺癌细胞株中有表达,主要定位于胞浆。在肺腺癌组织和癌旁组织胞浆中的表达差异有统计学意义,为后续研究打下了基础。     

人类泛素耦联酶E2C与肿瘤的关系

人类泛素耦联酶E2C(UBE2C)属于泛素.蛋白酶体途径的E2酶家族,其通过调控cyclinA和cyclin B的周期性变化在维持细胞周期的正常运转中起着重要作用.UBE2C通过其N末端来控制细胞周期末期促进复合物(APC)的激活阈值,并加强对APC检查点的调节,而UBE2C的细胞周期依赖性表达又受APC的调控.UBE2C在多种肿瘤细胞株和组织中高表达,与肿瘤的发生、增殖、转化以及恶性程度密切相关,可作为肿瘤的诊断和治疗的新靶点.     

人类泛素耦联酶E2C与肿瘤的关系

人类泛素耦联酶E2C(UBE2C)属于泛素.蛋白酶体途径的E2酶家族,其通过调控cyclinA和cyclin B的周期性变化在维持细胞周期的正常运转中起着重要作用.UBE2C通过其N末端来控制细胞周期末期促进复合物(APC)的激活阈值,并加强对APC检查点的调节,而UBE2C的细胞周期依赖性表达又受APC的调控.UBE2C在多种肿瘤细胞株和组织中高表达,与肿瘤的发生、增殖、转化以及恶性程度密切相关,可作为肿瘤的诊断和治疗的新靶点.