消脂护肝方对脂肪肝模型大鼠血脂、肝功能的恢复作用及对下丘脑瘦素和瘦素受体表达的影响

[目的]观察消脂护肝方对脂肪肝模型大鼠血脂、肝功能的恢复作用及其机理。[方法]Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组和消脂护肝方组(中药组),除正常组外,采用体积分数为40%CCl4豆油溶液按前3周2 ml/kg,后3 周1 mL/kg剂量皮下注射结合高脂饮食复制大鼠脂肪肝模型;造模期间中药组灌服消脂护肝方(12.4 g·kg-1·d-1),6周后处死所有大鼠,检测肝功能、血脂并观察肝组织病理变化;采用免疫组化方法检测下丘脑组织中瘦素(Leptin)、瘦素长型受体OB-RL的含量。[结果]消脂护肝方组大鼠肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)及血脂指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)均较模型组显著降低(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05),表明该方具有抑制脂肪肝形成作用;免疫组化法结果显示,消脂护肝方组大鼠下丘脑组织内Leptin、OB-RL的表达均较模型组升高(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]消脂护肝方可使脂肪肝大鼠升高的血脂和损伤的肝功能恢复至正常,其可能的机理是与升高下丘脑组织中Leptin、OB—RL的表达有关。     

黄芪注射液加等容血液稀释疗法对老年脑梗死血瘀证患者血液流变学的干预效应

背景:脑梗死多与血瘀证密切相关,血液流变学异常改变常表现为血黏度和红细胞压积增高。等容血液稀释疗法通过放血并移走一定量的红细胞,同时补充等容量的稀释剂,可降低全血黏度。目的:观察补气中药黄芪注射液和等容血液稀释疗法对脑梗死血瘀证患者血液流变学的改善作用。设计:随机对照实验,病例-对照分析。对象:脑梗死组为2002-03/2004-03华中科技大学附属协和医院收治的老年缺血性脑血管病住院患者64例,所有患者年龄>60岁,同时符合血瘀证诊断标准,按随机数字表法分为常规治疗组和中西医治疗组两组各32例。以正常体检的47名年龄相似的健康人为正常对照组。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院。方法:常规治疗组采用脑梗死常规方法治疗,包括扩容、降黏、抗凝、阻滞血小板凝聚、脱水及一般对症支持治疗。中西医治疗组在常规对症治疗基础上加用等容血液稀释和益气中药黄芪注射液治疗:从患者静脉抽取总血量的10%(450～650mL),继之静脉注射等量胶体液,每隔5d治疗1次,连续治疗3次;黄芪注射液50mL加入生理盐水250mL静脉滴注,1次/d,连用3周。主要观察指标:①常规治疗组和中西医治疗组治疗前后血液流变学各指标比较。②脑梗死组和正常对照组血液流变学各指标比较。结果:按意向处理分析,64例患者和47名正常人均进入结果分析。①脑梗死组和正常对照组比较:脑梗死组全血比黏度、红细胞压积和纤维蛋白原高于正常对照组[(3.90±0.73),(3.40±0.28)mPa·s;(46.39±6.03)%,(42.61±2.91)%;(3.25±0.75),(3.08±0.46)g/L,P<0.01,0.05],红细胞变形指数低于正常对照组(0.958±0.006,0.961±0.004,P<0.05)②常规治疗组和中西医治疗组比较:治疗前无差异,治疗后中西医治疗组全血黏度、红细胞压积和纤维蛋白原均低于常规治疗组[(3.90±0.52),(4.21±0.68)mPa·s;(43.80±3.29)%,(48.47±4.50)%;(3.31±0.60),(3.68±0.67)g/L,P<0.01,0.05]。结论:对血瘀证的老年脑梗死患者用等容血液稀释疗法加益气中药黄芪注射液治疗,有较好的降低血黏度、改善血液流变学、减轻症状的作用。     

从验案看中医独特临床研究方法

中医学理论经历了两千多年历史无数次重复验证,直到今天仍有着旺盛的生命力.与中医独特的理论体系相适应,历代遗留下来的中医临床验案以其独特的临床研究方式保存,沿用至今,正是中医药数千年来"无数次重复验证"的具体记述.     

EGCG联合不同剂量放疗对人肝癌细胞系HepG2中hTERT表达的影响

目的:研究相同剂量表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达的影响, 探讨EGCG成为放疗增敏剂的作用.方法:用MTT比色法检测EGCG对HepG2细胞增殖的影响, 用荧光显微镜检测EGCG诱导HepG2的细胞凋亡, 从而找到合适的EGCG(25μmol/L)剂量用于观察其放射效果的实验; 采用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0、2、4、6 Gy)联合EGCG和不联合EGCG治疗后, HepG2中hTERT基因的表达. 放疗用直线加速器6MVX线.结果:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡的作用. 同时, 不同剂量放疗联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2中hTERT基因的表达比较, 空白组无显著差异; 2Gy组、4 Gy组、6 Gy组均有显著差异(hTERT基因表达的扩增倍数: 0.477±0.025 vs 0.973±0.024; 1.110±0.083 vs 1.382±0.051; 1.174±0.128 vs 1.452±0.109, P <0.01或0.05), 并以2 Gy组最为显著.结论:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的作用; EGCG联合不同剂量放疗可能下调HepG2中hTERT基因水平, 从而抑制端粒酶活性, 以放射剂量为2 Gy时显著, 因此,EGCG有可能成为放疗增敏剂.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.     

滋肾清热活血方治疗大鼠系膜增生性肾炎报告

系膜增生性肾小球肾炎 (含ＩｇＡ介导的ＭｓＰＧＮ )是我国肾小球疾病中常见的病理类型。 1985年南京报道占5 7% ,北京占 6 9.9%。日本在 2 0年的观察中发现 ,超过30 %的ＩｇＡ介导的ＭｓＰＧＮ病人进展到终末肾功衰。系膜细胞增生和系膜基质的增多最终导致肾小球硬化。大量研究显示中医药对肾脏病有巨大潜力和良好治疗前景 ,本课题采用ＳＤ大鼠ＭｓＰＧＮ模型 ,以肾小球培养上清中白细胞介素 - 1,肿瘤坏死因子 -α的活性等指标观测滋肾清热活血方对ＭｓＰＧＮ的防治作用 ,从细胞因子水平为中医药防治ＭｓＰＧＮ进行性恶化提供实验依据。材…     

High Glucose Promotes the CTGF Expression in Human Mesangial Cells via Serum and Glucocorticoid-induced Kinase 1 Pathway

The role of serum and glucocorticoid-induced kinase 1 （SGK1） pathway in the connective tissue growth factor （CTGF） expression was investigated in cultured human mesangial cells （HMCs） under high glucose. By using RT-PCR and Western blot, the effect of SGK1 on the CTGF expression in HMCs under high glucose was examined. Overexpression of active SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- S422D hSGK1 （SD） could increase the expression of phosphorylated SGK1 and CTGF as compared with HMCs groups transfected with PIRES2-EGFP （FP） under high glucose or normal glucose. Overexpression of inactive SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- K127N hSGK1 （KN） could decrease phosphorylated SGK1 and CTGF expression as compared with HMCs groups transfected with FP under high glucose. In conclusion, these results suggest that high glucose-induced CTGF expression is mediated through the active SGK1 in HMCs.     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在糖尿病小鼠肾皮质中的表达变化

目的探索在糖尿病（diabetes mellitus，DM）肾脏病变进程中，血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glueoeortieoid—inducible kinase 1，SGK1）在肾皮质中的表达变化。方法采用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）单次腹腔注射诱导小鼠DM模型，设DM组和正常对照（normal control，NC）组，在DM模型1、3、4、6和12周时，检测肾重指数、血糖和糖化血红蛋白（HbA1c），RT-PCR方法检测肾皮质SGK1 mRNA的表达，Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达，同时应用免疫组织化学技术检测肾皮质中肾小球的SGK1蛋白的表达。结果与NC组相比，从第1周末起到第12周末DM组小鼠肾重指数、血糖和HbA1c均显著增加；第1周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白以及肾小球中SGK1蛋白的表达即开始上调，到第4周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白表达达到顶峰，第6周至第12周仍有较高表达。结论随DM肾脏病变发展，肾皮质及肾小球中SGK1持续高表达，进一步提示它在DM肾脏病变进程中起重要作用。     

下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化实验研究

目的探讨下瘀血汤是否通过恢复或重建肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的自稳平衡抑制肝纤维化进展。方法将27只Wistar雄性大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、去除病因组、下瘀血汤组和氯沙坦钾组。除正常组外,各实验组大鼠背部皮下注射2.5 mL/kg 40%四氯化碳橄榄油混悬液造模,并以下瘀血汤及氯沙坦钾干预肝纤维化进展,应用HE染色、Masson三色胶原染色和超微病理学方法观察肝脏组织结构的改变,采用免疫组织化学染色法检测各组AT1R、TGF-β1表达,采用RT-PCR及Western-blot法检测RAS相关因子的基因和蛋白表达。结果①HE染色、Masson三色胶原染色和超微病理学结果均显示去除病因组、下瘀血汤组、氯沙坦钾组和模型组肝纤维化程度依次加重。②RT-PCR及Western-blot结果显示,与正常组相比,其他组RAS相关分子ACE2、ACE、AngⅡ、AT1R及TGF-β1的mRNA及蛋白表达均升高;除去除病因组TGF-β1基因表达差异无统计学意义(P>0.05)之外,其他组间比较均具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,去除病因组、下瘀血汤组、氯沙坦钾组RAS相关分子ACE2、ACE、AngⅡ、AT1R及TGF-β1的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05)。③与氯沙坦钾组比较,下瘀血汤组ACE2的mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),而AngⅡ及TGF-β1的mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论下瘀血汤可能通过增加ACE2的表达,抑制ACE、AngⅡ和TGF-β1的表达,使RAS中促进肝纤维化的经典通路ACE-AngⅡ-AT1R转变为抑制肝纤维化的ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴为主导,从而抑制肝纤维化。