冬季天津典型集约化畜禽养殖场粪便微生物污染调查

目的了解冬季天津市集约化畜禽养殖场(猪、牛、鸡)粪便微生物污染情况及无害化处理对粪便中微生物的灭活效果。方法 2018年冬季在天津市9个典型集约化畜禽养殖场采集无害化处理前后的粪便样品共126个,分别采用酶底物法和PCR技术对样品中的指示微生物(总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希菌)和致病微生物(沙门菌)进行检测和分析。结果不同种类粪便中指示微生物数量基本呈现出猪粪鸡粪牛粪的规律,无害化处理后指示微生物的数量显著降低,3种粪便经无害化处理后指示微生物的去除率均在90%以上。在牛粪与鸡粪中均检测出沙门菌。经无害化处理后,3种畜禽粪便的粪大肠菌值均不符合《粪便无害化卫生要求》(GB 7959—2012)中的相关规定。结论本次调查的粪便无害化处理效果有待进一步提升。     

鸡血藤水提物体外抗肠道病毒作用研究

目的揭示鸡血藤提取液体外抑制肠道病毒的作用。方法采用细胞病变抑制试验、MTT比色法,以病毒唑为阳性对照药,测定了鸡血藤水提液AE(aqueous extracts)对Vero E6细胞的细胞毒性,并在对细胞的最大无毒浓度下观察不同浓度的提取液AE在Vero E6细胞中对5种肠道病毒的抑制作用,计算药物半数有效浓度(50%inhibition con-centration,IC50)和药物治疗指数(therapeutic index,TI)。在此基础上采用分组实验初步探讨了提取物样品的抗病毒机制。结果提取物AE半数中毒浓度(CC50)为≥250.0 ug/ml;抑制肠道病毒柯萨奇病毒B3、B5、埃可病毒Echo 9、Echo 29、脊髓灰质炎病毒Polio virusⅠ的IC50分别为60.8、47.1、14.8、65.52、9.1 ug/ml,TI分别为4.1、5.3、16.9、3.8、8.6,对肠道病毒的抑制作用存在量效反应关系;机制研究表明,AE在与CVB3的四种分组作用方式中均呈现不同程度的抗病毒作用。结论鸡血藤抗病毒提取液AE在Vero E6细胞中对肠道病毒有明显的抑制作用;鸡血藤水提物AE不仅具有直接杀灭CVB3病毒作用,而且还可进入细胞或吸附在细胞表面,从而达到抑制或杀伤病毒的效果。     

常见致病真菌通用引物PCR检测技术研究

目的 建立常见致病真菌的通用引物PCR检测技术,为研究致病真菌的基因芯片检测技术打下基础.方法 以真菌的5.8S rRAN基因和28S rRAN基因为靶基因,利用其保守序列设计用于常见致病真菌检测的PCR通用引物,并观察检测方法的特异性及敏感性.结果 建立的常见致病真菌通用引物PCR检测方法可有效检测白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉等20个种属的致病真菌,敏感性为15 pg/ml DNA,实际应用效果与标准菌株检测结果一致.结论 本研究建立的通用引物PCR可以用于常见致病真菌的检测.

Abstract：

Objective To develop the detection method of common fungal pathogens by general primer PCR.Methods The primers were designed from the target genes of 5.8S rDNA and 28S rDNA of fungi,and the specificity and sensitivity were observed.Results The general primer PCR can be used to detected C.albicans,C.parapsilosis,C.krusei,C.glabrata,C.tropicalis,C.neoformans,A.fumigatus,A.flavus,A.nidulans,A.niger,C.carrionii,P.verrucosa,Sschenckii,F.pedrosoi,T.rubrum,T.mentagrophytes,M.gypseum,M.canis,E.floccosum,M.racemosus,the sensitivity was 15 pg/ml of DNA.Conclusion The general primer PCR can be used to detect common fungal pathogens.     

汶川地震灾区水磨镇水质调查

5·12汶川地震发生后,笔者对汶川县水磨镇地震后水源水质进行了调查,水磨镇距离此次地震的震中———映秀镇直线距离只有5km,人员伤亡和房屋倒塌极为严重,是重灾区     

氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:体外观察氧化苦参碱(OM)抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并初步探讨其作用机制.方法:用125,250,500,1000,2000 mg·L-1OM连续作用于90％汇合度的HepG2.2.15细胞9d,以MTT比色法观察药物细胞毒性;用酶联免疫法测定细胞上清液中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定细胞上清液中HBV DNA,细胞中HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:OM对细胞内HBV DNA和cccDNA,以及细胞外HBV DNA均有抑制作用,随着浓度升高抑制作用加强,2000 mg·L-1OM对细胞内HBV DNA,cccDNA和细胞外HBV DNA的抑制率分别为64.56％,52.12％,54.25％;对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,且浓度越高、处理时间越长,抑制作用越明显;在相同条件下对HBsAg的抑制作用强于HBeAg,OM浓度为2000 mg·L-1时对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为51.59％,17.88％.结论:OM能有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制,该作用是抑制病毒核酸复制和基因表达的结果.     

天津海河流域冬季微生物污染和水质特征研究

目的了解天津海河流域冬季微生物污染状况及指示菌与致病菌之间的关系。方法于2013年冬季在天津海河流域上、中、下段的7个采样点采集21个水样,分别对水样中菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希菌、肠球菌、通用性拟杆菌、沙门菌、弧菌和大肠杆菌O157及浊度、pH值、氨氮和高锰酸盐指数等进行检测和分析。结果建立了通用性拟杆菌荧光定量PCR标准曲线,检测限达到18 copies。天津海河流域水质理化指标和微生物指标污染程度的检测结果基本呈现下段中段上段的趋势。Spearman相关分析结果表明通用性拟杆菌与致病菌呈正相关。结论天津海河流域从上段至下段水质污染逐渐加重,通用性拟杆菌与致病菌呈现一定的相关性。     

天津市病毒性腹泻婴幼儿诺如病毒感染调查

为调查天津市秋冬季婴幼儿腹泻患儿中诺如病毒(Norovirus,No Vs)的感染情况,收集2009年10—12月天津市儿童医院住院部的319例疑似病毒性腹泻婴幼儿的粪便标本,采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Nov的衣壳蛋白基因后,将部分阳性PCR产物测序,通过Genbank的Blast比对和系统发育树分析,推断各毒株型别。结果显示,在319件标本中,Nov的PCR阳性标本60件(GⅡ型59件,GⅠ型1例),检出率为18.81%。将24件PCR阳性产物测序和分析,1株为No V GⅠ型;23株为Nov GⅡ型,且GⅡ-4/2006b有15株,GⅡ-3有2株。感染Nov的患儿多为2岁以下且无性别差异。提示Nov是天津市秋冬季婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,且2009年仍以GⅡ-4/2006b型毒株流行为主。     

水中肠道食源性病毒的多重RT-PCR检测法

目的 建立能同时检测水环境中肠道病毒(Enterovirus,EVs)、诺如病毒GⅡ(Norovorus,Nov GⅡ)、轮状病毒(Rotavirus,RVs)、腺病毒(Adenovirus,AdVs)的多重RT-PCR检测.方法 根据GenBank收录的肠道食源性病毒核酸序列,利用软件DNAMAN设计肠道病毒通用引物以及Nov GⅡ、RVs、AdVs的特异性引物;将这4对引物置于同一体系中进行多重RT-PCR,利用各种肠道食源性病毒的核酸模板检测其特异性并通过不同滴度[100～107 pfu(copies )/ml]病毒测试其灵敏度;利用加标实验验证该方法的准确性;通过对5份河水或某水厂出水大体积水样(50L)进行病毒富集与检测,以确定该方法的实用性,同时,采用传统细胞培养法验证其结果.结果 该方法对目的病毒均获得了理想的电泳条带,而对其他病毒无非特异扩增;对EVs、AdVs的最低检出滴度均为10 pfu/ml,Nov GⅡ-4为10 copies/ml,对RVs的最低检出滴度为102 pfu/ml;加标实验检测结果准确率为100％;对5份河水或某水厂出水大体积水样进行病毒富集与检测,对以上各种病毒均有检出且与细胞培养结果一致.结论 该方法不仅特异性强、灵敏度高、简便快捷,而且准确率高,实际应用性强,适用于水中肠道食源性病毒的快速检测.     

不同地理来源的食品中大肠埃希氏菌eBURST分析

目的 研究不同地理来源的食品中大肠埃希氏菌的群体进化关系,为流行病学调查及有效控制食源性大肠埃希氏菌导致的食品安全事件提供理论支持.方法 按照大肠埃希氏菌多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)规则,根据地理溯源研究中遴选的4个持家基因测序数据,利用数据库查询每株食品分离株的序列类型(sequence types,ST),再对所有食品分离株进行eBURST(enhanced based upon related sequence types)分析.结果 得到了食品中大肠埃希氏菌分离株群体的遗传关系.eBURST分析显示不同地理来源菌株存在相同起源株,不仅在同一大洲相邻国家或地区之间,而且在不同大洲非相邻国家或地区之间都存在着同质性的克隆株复合体.结论 大肠埃希氏菌在具有相同起源的基础上存在丰富的遗传多样性;eBURST分析更擅于揭示不同地理来源大肠埃希氏菌株之间的进化关系.