基因芯片技术检测鉴定临床常见致病真菌的初步研究

目的为了快速、简便、高通量地鉴定临床常见致病真菌,建立了一种采用基因芯片技术对临床常见的致病真菌鉴定的分子生物学方法。方法以5.8S rDNA与28S rDNA间的内转录间区2(internal transcribed spacer-2,ITS-2)为靶标,针对待检的临床常见致病真菌设计合成一系列寡核苷酸探针,制成寡核苷酸芯片。待检真菌DNA经通用引物扩增标记后,与芯片杂交,对杂交图谱分析归纳,得到一套种特异性的典型杂交图谱。待检的样品菌与基因芯片杂交,得到的杂交结果与典型图谱比对即可判断出样品的种类。结果以涉及8个属20个种的标准致病真菌菌株对芯片的特异性、重复性、灵敏度进行考察,结果表明,该研究建立的基因芯片技术可以有效地区分20种临床常见致病真菌,特异性良好,重复性良好(信噪比CV<10%),灵敏度为15 pg/ml真菌DNA。收集从临床分离的84株致病真菌菌株对基因芯片进行试用,结果显示基因芯片的鉴定结果与常规鉴定方法的鉴定结果一致。结论这项技术的建立可以稳定、特异性地实现临床常见致病真菌的高通量鉴定,为进一步检测研究奠定了基础。     

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测GⅡ型诺如病毒

目的建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的GⅡ型诺如病毒快速检测方法。方法设计针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列的RPA引物,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过2%琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分析鉴定,从而对引物扩增效率、特异性、灵敏度和稳定性进行评价。结果本研究针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列设计了RPA特异性引物RPAf/RPAr,利用RPA检测试剂盒建立了RPA扩增体系。引物筛选实验结果显示,RPA检测方法在扩增反应5min后即可定性检测诺如病毒。将GⅡ.4型诺如病毒、GⅡ.17型诺如病毒、GⅡ.3型诺如病毒、GⅡ.6型诺如病毒、星状病毒、MS2噬菌体、人轮状病毒和人腺病毒基因组作为模板进行特异性检测。结果显示,只有GⅡ.4、GⅡ.17、GⅡ.3和GⅡ.6型诺如病毒有特异性扩增,表明该方法特异性良好,可基本满足对GⅡ型诺如病毒的检测。灵敏度实验结果显示,该方法可检测低至106 copies/μL的诺如病毒。利用10例诺如病毒阳性粪便样品对RPA检测方法稳定性进行评价。结果表明,10例样品均被特异性扩增,表明该方法稳定较好。结论本文建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好以及可操作性强,可用于对诺如病毒的检测。     

天津市婴幼儿病毒性腹泻诺如病毒检测

目的研究天津市秋冬季婴幼儿腹泻患儿中诺如病毒感染的流行情况及其基因型别。方法 2008年10-12月收集天津市儿童医院住院部310例疑似病毒性腹泻的婴幼儿粪便标本,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粪便中诺如病毒核酸,并将部分阳性株的PCR产物进行测序,采用序列分析软件分析测序结果 ,推断其毒株型别。结果 310份腹泻标本中,诺如病毒RT-PCR阳性37份(GII型37份,GI型0例),检出率为11.94%;23份PCR产物送往测序,经Genebank Blast及系统进化树分析,所有诺如病毒均为诺如病毒基因组Ⅱ型,其中GII-4/2006b占95.65%(22/23),GII-3占4.35%(1/23);感染诺如病毒的患儿多为1岁以下,且11月份检出率最高。结论诺如病毒是天津市秋冬季婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,2008年诺如病毒以GII-4/2006b型毒株流行为主。     

天津市腹泻患儿腺病毒感染情况分析

目的了解天津市腹泻婴幼儿腺病毒的感染情况及其分型特点。方法于2008年4月—2009年4月收集天津市儿童医院住院部病毒性腹泻患儿粪便标本766例,通过PCR法确定阳性标本,将阳性标本进行细胞培养产生细胞病变后,再次PCR扩增确证,并将产物测序,进行基因型别分析。结果 766例标本中腺病毒的检出率为17.62%,其中肠道腺病毒Ad41型占阳性标本的86.67%,Ad1型占13.33%,Ad40型未检出。感染腺病毒患儿的年龄中位数为8.00月龄(0.06～24月龄),全部分布在2岁以下。腺病毒感染全年存在,尤以7月感染最多,其次是2月和9月。结论肠道腺病毒是天津市住院婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体之一,2008年4月—2009年4月以Ad41型流行为主。     

包头市牧区水环境隐孢子虫和贾第鞭毛虫调查

目的了解包头市典型牧区水环境中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的污染状况。方法于2016年2月至2018年9月的春、夏、秋、冬四季分别采集包头市某牧区旗1处集中式供水和2处分散式供水的饮用水、2处典型地表水和当地污水处理厂进水及出水水样各1次,进行隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测。结果共采集饮用水样品12份,均未检出隐孢子虫和贾第鞭毛虫。地表水各个季节均有不同程度隐孢子虫和贾第鞭毛虫检出,检出率分别为50%(4/8)和37.5%(3/8)。污水厂水样在春、夏、秋季检出隐孢子虫和贾第鞭毛虫,检出率分别为42.9%(3/7)和57.1%(4/7)。结论本次调查包头市典型牧区生活饮用水未发现隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染,而地表水和污水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染较为普遍。     

天津市某地区自来水中抗生素耐药菌及其相关基因的调查

目的研究天津市某地区自来水中抗生素耐药菌及其相关基因的分布。方法于2015年10月—2016年1月采集天津市某地区自来水样,并采用PCR技术检测六大类27种耐药基因,同时分离培养耐药菌并进行种属鉴定。结果该自来水微生物指标合格,但是自来水样中检测出了四环素类、磺胺类、β内酰胺类和氨基糖苷类耐药菌及其耐药基因,其中磺胺类耐药菌及其耐药基因的检出率最高。磺胺类耐药菌检出率达83.33%(10/12),sul1耐药基因检出率达91.67%(345/545)。经鉴定,耐药菌主要分布于肠球菌、葡萄球菌、微杆菌、微球菌、假单胞菌、芽孢杆菌属。结论天津市该地区自来水中存在少量的耐药菌。     

鄱阳湖流域抗生素耐药基因分布特征及其与新型指示菌相关性研究

目的了解鄱阳湖流域抗生素耐药基因的时空分布规律,探究耐药基因与拟杆菌之间的相关性。方法选取鄱阳湖流域具有代表性的6个采样点,采集6个月的水样,通过q PCR方法定量检测五大类8种抗生素耐药基因[tet C,tet Q,erm B,sul1,sul2,bla TEM,aad A,aac(6')-1b]和2种拟杆菌(通用型拟杆菌,人特异性拟杆菌)的绝对浓度。结果 8种耐药基因均被检出,tet C,tet Q,erm B,sul1,sul2,bla TEM,aad A,aac(6')-1b的检出率分别为94.4%、66.7%、61.1%、97.2%、97.2%、97.2%、88.9%、94.4%;8种耐药基因的绝对浓度范围为0~2.9×107copies/ml,磺胺类基因检出浓度最高,是鄱阳湖流域中主要的抗生素耐药基因。tet Q和sul1基因在枯水期的绝对浓度高于丰水期(P0.05),8种耐药基因在上游河流的绝对浓度均明显高于湖泊上段和湖泊下段(P0.05),8种耐药基因与拟杆菌之间均存在较高的相关性(P0.05)。结论鄱阳湖流域磺胺类耐药基因污染较为严重,上游河流的耐药基因污染程度高于湖体,拟杆菌可能对抗生素耐药基因的污染具有一定的指示作用。     

镉对小鼠外周血免疫细胞线粒体功能的影响

目的探究镉体内染毒对昆明小鼠外周血免疫细胞线粒体功能的影响。方法选用20±2 g雄性昆明小鼠,适应性饲养一周,随机分为对照组、镉低剂量实验组和镉高剂量实验组,实验组分别于每周一、三、五灌胃给予不同剂量(7.5 mg/kg,15 mg/kg)的氯化镉溶液,连续6周,对照组给予同等体积的蒸馏水,于第8周提取小鼠外周血,血细胞计数仪计数外周血白细胞、淋巴细胞与红细胞数目,流式细胞仪测定外周血T、B、髄系细胞线粒体膜电位和线粒体活性氧(ROS)水平。结果与对照组相比,实验组小鼠外周血白细胞、淋巴细胞数目均显著下降(P0.05,P0.01);镉低剂量实验组小鼠与对照组相比,仅外周血髓系细胞线粒体ROS显著升高(P0.05),而镉高剂量实验组小鼠外周血髓系细胞、T细胞线粒体ROS均显著升高(P0.05,P0.01);镉高剂量实验组小鼠与对照组小鼠相比,外周血髓系细胞、T细胞线粒体膜电位均显著下降(P0.05)。结论镉体内染毒导致昆明小鼠外周血免疫细胞线粒体功能下降,且与剂量相关。