GSIS相关基因在大鼠胚胎胰腺发育后期表达模式

目的探讨大鼠胚胎发育晚期胰腺13细胞GSIS功能相关基因的表达趋势。方法利用显微分离方法分离胚胎15．5d（E15．5）和胚胎18．5d（E18．5）胰腺组织，提取RNA并与大鼠基因组芯片杂交。数据处理后，获得E15．5和E18．5胰腺组织基因表达谱。进而利用RT—PCR对芯片结果进行验证。结果在E15．5至E18．5，肝核因子（hepatocyte nuclear factor，Hnf）1α及4α特异表达，其下游基因胰岛素1（Insl），葡萄糖转运体2（Glut-2）、L型丙酮酸激酶（L—PK）和醛缩酶B（Aldolase B）表达上调，而葡萄糖激酶（GCK）无表达。RT-PCR方法进一步验证，Hnflα及Hnf4α在E18．5特异表达，至初生时，Hnflα表达下调，Hnf4α无表达，GCK明显表达。结论Hnflα及Hnf4α及其下游基因在大鼠胚胎胰腺发育后期出现高表达。     

ETS1在多巴胺能神经元发育中的作用

【立论依据】 帕金森病是第二大神经系统退行性病变,主要多发于60岁以上的老年人。其基本病理改变是特异性多巴胺能神经元因各种原因渐行性退变坏死,数量减少,致使多巴胺释放减少,但具体机制不明。从多巴胺能神经元发育的角度或许能解释多巴胺释放减少的分子机制。多巴胺神经元发育的各个阶段都有转录因子基因参与调控, 如SHH、FGF、Nurr1、Pitx3、Mash1 等。这些因子决定了多巴胺能神经元发育的命运并控制了一些重要的发育过程。作为转录因子,ETS1表达于发育中的脑组织。在前期研究发现ETS1影响胚胎神经发育的基础上,过表达ETS1抑制酪氨酸羟化酶(TH)的表达。但ETS1在多巴胺能神经元发育的哪一阶段发挥作用,如何发挥作用均未阐明。 【设计思路】 利用非洲爪蟾作为模式动物,通过过表达或封闭ETS1表达,检测在多巴胺能神经元发育的不同阶段标志基因的表达,探讨ETS1影响多巴胺能神经元发育的阶段;进而寻找ETS1的下游靶基因。 【实验内容】 选择分裂良好的非洲爪蟾胚胎,利用显微注射方法注射ETS1 mRNA或反义寡核苷酸,实现ETS1的过表达或基因封闭,在神经发育的不同阶段收集胚胎,提取RNA或蛋白质,利用定量RT-PCR、整胚原位杂交及蛋白质印迹方法检测标志基因的表达改变。之后,通过萤光素酶报告基因方法检测ETS1对其靶基因的转录调控。 【材料】 非洲爪蟾胚胎,ETS1 mRNA、反义寡核苷酸,原位杂交用探针及其他试剂,RT-PCR、蛋白质印迹试剂,报告基因检测系统,其他常规试剂。 【可行性】 本课题建立在前期预实验的基础上,研究方向明确;非洲爪蟾胚胎体积大,易于进行显微注射;胚胎在体外发育,便于随时观察表型。 【创新性】 发现新的调节多巴胺能神经元发育的转录因子ETS1及其作用机制,为探讨帕金森病的发生机理提供新的线索。     

PBL教学模式下结合多媒体的生物化学课程设计

生物化学是医学院校学生就学期间一门非常重要的基础科目,为适应现代医学教育发展,提高教学质量,培养学生综合素质,有必要在教学方法上进行改革.探讨了在医学生物化学的教学中,结合现有的多媒体教学法,将以问题为基础的PBL教学模式应用在生物化学学科的课程设计,为医学生物化学教学方法的改革提供一定的理论依据.     

苏州地区耐左氧氟沙星无乳链球菌临床分离株分子及质谱学特征分析

摘要：目的?回顾分析苏州地区临床分离左氧氟沙星耐药无乳链球菌菌株分子及蛋白质谱学特征。方法?收集2018年1月至2019年1月临床连续分离非重复耐左氧氟沙星无乳链球菌58株，用PCR法及Sanger基因测序方法检测gyrA、parC和parE基因突变、细菌血清型以及多位点序列分型；用ClinPro Tools 3.0软件对左氧氟沙星耐药菌株蛋白质谱特征峰进行筛选并验证。结果?测序检出耐左氧氟沙星菌株以携带gyrA_Ser81Leu+parC_Ser79Tyr+parE_His225Tyr突变为主，占44.8%(26/58)，以血清Ⅲ型和ST19型为主，并伴有血清Ⅰb型及ST23型流行；耐药菌株蛋白质谱峰分析显示6 894、3 445、5 076、4 544以及3 721 m/z为主要特征峰。结论?本地区耐左氧氟沙星无乳链球菌主要为gyrA_Ser81Leu+parC_Ser79Tyr+parE_His225Tyr突变，且以血清Ⅲ型及ST19型为主，具有以6 894 m/z为代表的质谱特征峰。     

白细胞介素-1β对胰岛β细胞胰岛素原剪切的作用及机制研究

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对胰岛β细胞中胰岛素原剪切的影响及作用机制。方法将原代小鼠胰岛分为对照组(正常培养)和IL-1β处理组, 将大鼠β细胞系INS-1细胞分为对照组、IL-1β处理组、15 μmol/L SKF9636处理组、15 μmol/L SKF96365+IL-1β处理组、1 μmol/L Go6976处理组、1 μmol/L Go6976+IL-1β处理组、10 μmol/L U0126处理组、10 μmol/L U0126+IL-1β处理组、30 μmol/L磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路抑制剂LY294002处理组、30 μmol/L LY294002+IL-1β处理组、2 μmol/L核因子-κB(NF-κB)通路抑制剂BAY117082处理组、2 μmol/L BAY117082+IL-1β处理组。每组设置3个平行组。通过酶联免疫吸附试验法检测胰岛素原和总胰岛素浓度, 并以胰岛素原与总胰岛素的比值来评价胰岛β细胞中胰岛素原的剪切水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测IL-1β处理后胰岛素原剪切关键酶激素原转化酶...     

尼莫地平对急性损伤后大鼠背根节细胞c-fos、c-jun mRNA表达的影响

目的探讨钙离子拮抗剂尼莫地平对急性外周神经损伤后大鼠背根神经节c—fos、c-junmRNA表达的影响。方法建立大鼠坐骨神经切断模型,利用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）半定量法,检测经尼莫地平预处理的大鼠在制模后不同时间（5min、15min、30min、60min、120min）,以及同一时间（60min）应用不同剂量（2．5mg／kg、5mg／kg、10mg／kg）尼莫地平时大鼠背根神经节c—fos、c-junmRNA的表达水平的变化。结果与对照组比较,损伤组c-fos mRNA表达于损伤后30min、60min、120min,c-jun mRNA表达于损伤后15min、30min、60min、120min显著升高（均P〈0．05）;而尼莫地平组与对照组各时间点c—fos、c-jun mRNA表达比较差异无统计学意义。与损伤组比较,尼莫地平组c—los、c-jun mRNA表达于30min、60min、120min明显降低（均P〈0．001）。不同剂量尼莫地平预处理后,c—fos mRNA的表达随尼莫地平剂量的增加而逐渐减少,各剂量组问比较差异有统计学意义（均P〈0．05）,c—fos mRNA表达水平与用药剂量呈负相关（r=-2．663,P〈0．05）;c-jun mRNA表达各剂量组问比较差异无统计学意义,亦无剂量相关性。结论急性外周神经损伤时应用钙离子拮抗剂尼莫地平,早期通过抑制c—fos、c-jun mRNA的表达,对外周神经损伤有一定的保护作用。     

急性外周神经损伤时大鼠c-fos和c-jun mRNA表达的时序性变化

目的了解c-fos,c-jun mRNA在大鼠背根神经节细胞的表达情况,探讨急性外周神经损伤对大鼠背根神经节的c-fos,c-jun mRNA表达的影响.方法建立大鼠的坐骨神经切断模型,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法,检测急性外周神经损伤后,在不同的时间点(5,15,30,60,120 min)大鼠的背根神经节的c-fos,c-jun mRNA表达.结果损伤后5 min损伤组与对照组间c-fos,c-jun表达[(0.51±0.18)%,(0.63±0.17)%]差异无显著性意义(P＞0.05).c-fos于损伤后30～120 min表达为(1.41±0.22)%,(1.22±0.21)%,(0.98±0.17)%,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);c-jun于损伤后15～120 min表达为(0.63±0.17)%,(0.80±0.20)%,(1.47±0.17)%,(2.68±0.22)%,(1.60±0.18)%,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).损伤后c-fos,c-jun mRNA表达逐渐升高,呈时间依赖性.结论c-fos,c-jun是神经细胞损伤的敏感标志,急性外周神经损伤能引起c-fos,c-jun mRNA表达的时序性变化,为基因水平认识和防护外周神经损伤提供理论依据.     

α-内收蛋白、ACE基因多态性及环境因素与高血压病的关系

目的　研究α -内收蛋白基因、血管紧张素转换酶 (ACE)基因多态性及环境因素与原发性高血压病 (EH)的关系。方法　聚合酶链反应 (PCR) -琼脂糖凝胶电泳检测基因型。结果　 (1)α -内收蛋白基因、ACE基因各基因型及TrpTrp +DD联合基因型在正常血压组和EH组的分布差异无显著性。 (2 )在与EH有关的危险因素存在的条件下 ,肥胖组、高甘油三酯血症组、吸烟组α -内收蛋白基因TrpTrp型EH患者患病率高于其他基因型 ,有统计学差异 (P <0 0 5)。结论　EH是环境与遗传因素共同作用的结果 ,环境因素可能更重要     

生物化学实验教学改革初探

实验教学是生物化学教学中的重要组成部分,如何提高教学质量是生化教育工作者面临的重要课题.南京医科大学生物化学与分子生物学系在实验内容、教学方式以及考核方法等几方面进行了教学改革,为提高医学院校生化实验教学质量进行了初步探索.     

巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表达变化

目的：探讨巢蛋白(nestin)在胚胎后期、新生期、成年三阶段的核酸、蛋白水平表达的变化．方法：取三个发育时期的胰腺,应用RT—PCR、免疫组化的方法进行半定量、定位分析．结果：在胚胎后期、新生期、成年三阶段nestin在核酸、蛋白水平均有表达,阳性细胞主要分布在胰岛,在腺泡周围的外分泌中有少量分布．结论：随大鼠胰腺的生长发育,核酸、蛋白表达下调．胰岛内nestin阳性细胞数也呈下降趋势．