改良消减杂交法筛选结核分枝杆菌毒力相关基因

0　引言　结核病是长期危害人类健康的严重疾患之一 ,目前我国每年死于结核病的人数达 2 5 .6万 ,在传染病中居第一位 .然而结核分枝杆菌的致病详细机制至今仍不清楚 ,给结核病的治疗和预防带来一定困难 .人型结核分枝杆菌毒株H37Rv是引起结核病的主要病原 ,其基因突变株 H37Ra丢失致病能力 .利用改良消减杂交技术筛选出 H37Rv株与H37Ra株之间的差异基因片段 ,为进行毒力基因研究提供了基础 .1　材料和方法1.1　 m RNA提取　结核分枝杆菌经溶菌酶和蛋白酶 K处理后 [1 ] ,采用 Promega Poly ATtract○RSystem10 0 0试剂盒分别提取毒…     

结核分泌蛋白MPT64用于101例结核病快速诊断的研究

目的：比较痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，评价MPT64蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法：对101例结核病患者进行分析，同时进行痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，对结果进行比较对照分析。结果：痰检阳性率20．8％0，结明试验45．5%，PPD试验77．2％，PPD抗体79．2%，MPT64抗体74．2％；在肺结核患者，MPT64抗体与PPD试验一致率为75．6％；在胸膜炎患者，MPT抗体检测特异性高达86．7％。结论：PPD试验仍是目前结核病早期诊断与鉴别诊断的重要方法，分泌蛋白MPT64可作为新型结核病快速诊断试剂的组分。     

脑卒中后的早期心身康复效果观察

1 资料与方法 1.1 资料 患者 200例,其中康复组 100例,男 63例,女 37例。年龄 47～ 65岁,平均 56.3岁。脑梗死 76例,脑出血 24例。病程 1～ 3个月,平均 1个半月。药物治疗组 100例,男 59例,女 41例。年龄 45～ 70岁,平均 59.6岁。脑梗死 66例,脑出血 34例。治疗时间 14 d～ 1个月,平均 20 d。药物治疗组均为神经内科住院病人,两组病例均通过 CT或 MRI检查而确诊。 1.2 方法 康复组采用常规药物治疗基础上按运动发育顺序进行系统 PT功能训练,按 Bobath技术的原则,采用卧、坐、站、走等人类正常的运动发育程序刺激运动通路…     

早期NSCLC无均整器模式VMAT计划剂量比较研究

目的 通过对比传统均整器(FF)模式剂量分布,研究无均整器(FFF)模式下VMAT计划对早期NSCLC的剂量分布特点,及通过三维剂量验证系统来验证TPS对FFF模式的剂量计算精度。方法 采用美国瓦里安公司TrueBeam加速器和Eclipse TPS,对2015年间收治的20例接受SBRT的早期NSCLC病例,采用4DCT模拟定位和平均密度法重建三维结构并勾画轮廓;基于同样设备参数进行FF和FFF模式VMAT的计划设计,比较靶区和OAR剂量体积参数。采用ArcCheck的DVH进行三维剂量验证和中心点绝对剂量验证,并进行两种模式计划验证结果的配对t检验。结果 两种模式CI_100%基本一致(P=0.82),FFF模式CI_80%、CI_50%低于FF模式(P=0.02、0.01)。患侧肺、全肺受量FFF模式明显减少(P均<0.01)。两种模式机器跳数相近(P=0.34),但FFF模式出束时间明显少于FF模式(P<0.01)。两种模式的DVH总通过率、γ通过率、中心点绝对剂量偏差值均相近(P=0.05、0.16、0.26)。结论 对早期NSCLC患者VMAT计划采用FFF模式比FF模式能改善剂量分布适合度,减少肺受量及患者治疗中体位变化对靶区及OAR受量的影响。通过DVH三维剂量验证证明Eclipse TPS对基于FFF的VMAT剂量计算精度能满足临床要求。     

柳珊瑚来源真菌Penicillium chrysoygenum中的1个新的α吡喃酮发现

目的 柳珊瑚来源真菌Penicillium chrysogenum (TA10-16)次级代谢产物及其生物活性研究。方法 通过广泛的波谱数据,包括1D/2D NMR,HRESIMS和ECD谱从而确定化合物的结构。结果 共分离获得7个聚酮化合物,包括1个新的α-Pyrone（1）和6个已知化合物（2–7）。化合物1和6对白色念珠菌表现出中等的抗真菌活性,MIC值为12.5 μmol/L,而化合物7对白色念珠菌的MIC值则为25.0 μmol/L。结论 化合物1的结构通过1D/2D NMR、HRESIMS和ECD等综合光谱数据进行了鉴定。同时,通过活性测试,化合物1和6具有潜在的抗真菌活性。     

结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达纯化与鉴定

目的:表达和纯化RpfA融合蛋白.方法:将含有RpfA基因片段的质粒用NdeI与BamHⅠ双酶切,然后将目的基因片段克隆入pcDNA3.1 载体构建重组载体pcDNA3.1 -RpfA,测序正确后再将目的基因片段亚克隆入pET19b原核表达载体并转化E.coli DE3,IPTG诱导表达融合蛋白,Western blot鉴定融合蛋白.在变性条件下Ni2 -NTA 亲和色谱柱纯化目的融合蛋白.结果:目的基因片段测序与Genbank报道一致(切去了5'端99 bp).SDS-PAGE显示,在Mr约为80 ku处有表达条带,Western blot鉴定为(His)6融合蛋白,并与小鼠抗Rv1884和抗Rv2389免疫血清有交叉反应.可溶性分析发现融合蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化得到了融合有6个组氨酸残基的RpfA融合蛋白.结论:成功构建了pET19b-RpfA表达载体,并在E.coli DE3中高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白.     

125I-rFlic及125I-rFlicΔ180-400的制备及其在同种移植排斥监测中的作用

目的 探讨放射性碘125标记基因重组鞭毛蛋白(¹²⁵I-rFlic)及其片段(¹²⁵I-rFlicΔ180-400)在同种移植模型中的生物学分布及靶向性。 方法 用1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲(Iodogen)碘化标记rFlic及rFlicΔ180-400,分析标记率及稳定性,进行放射性配基结合分析;构建小鼠同种/同系皮肤移植模型,于术后第8天尾静脉注射标记物,分析生物学分布和药代动力学特征,进行全身磷屏自显影显像。 结果 成功制备¹²⁵I-rFlic及rFlicΔ180-400,且具有较好的体外稳定性;¹²⁵I-rFlicΔ180-400对移植受体脾细胞亲和力更高。生物学分布结果显示,与¹²⁵I-rFlic组相比,¹²⁵I-rFlicΔ180-400注射组24 h的 移植皮片/对侧正常皮片(T/NT)明显升高,P=0.014 8。药代动力学结果表明,与¹²⁵I-rFlic相比,¹²⁵I-rFlicΔ180-400代谢更快。全身磷屏自显影显像显示,注射后6 h的同种移植皮片放射性浓聚较1 h更明显;与¹²⁵I-rFlic组相比,¹²⁵I-rFlicΔ180-400组移植皮片显像更加清晰。注射后24 h两组均可得到清晰移植皮片显像。 结论 ¹²⁵I-rFlic与¹²⁵I-rFlicΔ180-400在移植皮片处高度特异性浓聚,可成功显示同种移植急性排斥,而后者比前者拥有更快的代谢率和更快的特异性浓聚。     

利妥昔单抗治疗抗NMDAR脑炎安全性和有效性的系统评价与Meta分析

目的通过系统评价探讨利妥昔单抗治疗抗NMADR脑炎的安全性和有效性。方法检索目前权威的中英文医学数据库(Embase、CBM、PubMed、The Cochrane Library、CNKI和WanFang Data),搜集有关利妥昔单抗治疗抗NMADR脑炎的研究,检索时限从建库至2020-01。由2名研究者独立筛选文献,并依次进行相关数据提取,纳入的研究偏倚风险评价,最后Meta分析在RevMan 5.3中进行。结果纳入包含91例抗NMDAR脑炎患者的7篇文献。Meta分析显示,抗NMDAR患者接受利妥昔单抗治疗前后改良的Ranking量表(mRS)变化为[WMD=2.99,95%CI(2.09,3.88),P0.01],CD19~+B淋巴细胞变化为[WMD=26.84,95%CI(5.77,47.91),P0.01]。不良反应发生率为12.08%,但是均为轻微反应,年复发率为7.6%。结论对于一线药物治疗效果不好的抗NMADR脑炎患者,利妥昔单抗显示良好的治疗效果,且不良反应小,复发率低。受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚待更多高质量研究予以验证。     

结核分枝杆菌Rv2389基因真核表达质粒的构建及表达

目的:构建结核分枝杆菌Rv2389基因真核表达载体.方法:PCR扩增Rv2389基因,测序正确后克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定正确后以阳离子聚合物转染CHO细胞后, 分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达.结果:构建了重组质粒pCDNA- Rv2389, RT-PCR结果证明Rv2389可在CHO细胞中转录,间接免疫荧光检测证明,表达有Rv2389蛋白的细胞着染.结论:成功构建了结核分枝杆菌Rv2389基因的真核表达载体pCDNA-Rv2389,Rv2389基因可以在CHO细胞中表达.     

结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的免疫学特性

目的:研究结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPT64的免疫学特性. 方法:用原核表达的MPT64蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果. 分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激,MTT方法检测IFN-γ产生水平和MTT法检测淋巴细胞增殖,并对脾脏细菌负荷计数. 结果:MPT64免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激,淋巴细胞的增殖较显着. MTT方法检测小鼠的IFN-γ量为1024 ng/L,而生理盐水对照组低于80 ng/L. 结论:MPT64蛋白有可能作为新型结核疫苗的组分.