MEF2A基因21碱基特异性缺失突变的检测及其临床意义的探讨

本研究旨在检测中国汉族人群MEF（myocyte enhance factor）2A基因第11号外显子区21-bp的特异性缺失突变，并分析其临床意义。     

尿液8-oxo-Gsn和8-oxo-dGsn对HBV感染引起肝损伤程度的价值评估

目的 探讨尿液中核酸氧化代谢产物8-oxo-Gsn和8-oxo-dGsn对HBV感染引起肝损伤程度的评估价值。方法 收集笔者医院94例慢性乙型肝炎（以下简称慢乙肝）患者行超声引导下肝穿刺活检前的尿液,95例健康者以及25例乙肝表面携带者的随机尿液,采用同位素稀释高效液相-串联质谱法（ID-LC-MS/MS）分析尿液中DNA氧化标志物8-oxo-dGsn和RNA氧化标志物8-oxo-Gsn,并结合病理结果和生化指标（ALT和AST）,分析各指标之间的相关性,通过ROC曲线评估二者对肝损伤程度的预测价值,并分析8-oxo-Gsn和8-oxo-dGsn在不同炎症活动度和不同纤维化程度患者中的水平差异。结果 实验组中,88.5%（46/52）的男性8-oxo-Gsn高于正常对照组,85.7%（36/42）的女性8-oxo-Gsn高于正常对照组;肝脏炎症程度高的患者（G₃~G₄）尿液中RNA氧化标志物8-oxo-Gsn显著高于炎症程度低的患者（G₀~G₂）（4.28 vs 3.26,χ²=11.117,P=0.009）,纤维化程度高的患者8-oxo-Gsn水平也高于纤维化程度低的患者（3.66 vs 3.29）,但未达到显著性水平（χ²=3.626,P=0.323）。尿液中RNA氧化标志物8-oxo-Gsn对肝脏炎症程度有较好的预测价值（敏感度为82.4%,特异性为75%,AUC=0.813）,对纤维化程度有较好的预测价值（敏感度为83.3%,特异性为77.1%,AUC=0.824）。结论 尿液中RNA氧化标志物8-oxo-Gsn可能是HBV感染引起的肝损伤严重程度的评估指标。     

K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及下游信号通路的影响

目的 探讨K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及其下游信号通路的影响。方法 选用本室已构建好的稳定高表达WT、G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株作为研究对象,通过GST-Raf-1 Ras结合域特异性结合Ras-GTP空间构象,免疫沉淀细胞内具有活性的K-ras蛋白,利用Western blot技术检测沉淀下来的Ras-GTP水平并进行比较分析;通过Western blot法检测K-ras下游信号通路中MER、ERK、ATK蛋白分子的磷酸化水平。结果 饥饿处理后表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平较低,而表达G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平活性为WT型K-ras蛋白3.5~40倍不等;表达K-ras突变蛋白的cos7同源细胞株内MEK、ERK和AKT的磷酸化水平比表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 K-ras第12密码子突变导致K-ras蛋白自身永久活化,且不需要外源性生长因子的刺激;突变K-ras可以持续激活K-ras蛋白下游效应因子,使K-ras信号通路持久活化。     

北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素相关性研究

目的 了解北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素.方法 以在北京医院体检人群为对象开展问卷调查,内容包括基线调查问卷和亚健康评定量表(Sub-Health Measurement Scale,SHMS V1.0).结果 本研究最终纳入91例,总体亚健康发生率为69.23％,青年组和中年组心理亚健康发生率均明显高于老年...     

卫生部临床检验标准化委员会分子生物学专家委员会会议简讯

卫生部临床检验标准化委员会分子生物学专家委员会于10月22日，在京召开“临床检验标准化委员会分子生物学工作会议”，十几名委员和厂家的专家学者出席了会议。会议的主题是：临床检验标准化委员会“十一．五”分子生物学技术标准规划。     

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化

目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性.方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达.结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CAl及CA3区.AD患者8-oxo-dC的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组.结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dc含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关.     

MEF2A基因CAG三核苷酸重复序列与冠状动脉病变及严重程度的相关性

目的 探讨北京地区汉族人群中MEF2A基因CAG三核苷酸重复序列与冠状动脉病变及严重程度的相关性.方法 用聚合酶链反应产物直接测序法对所有研究对象进行MEF2A基因11号外显子测序,用病例-对照方法研究CAG重复序列与冠状动脉病变支数的相关性.结果 在473例冠心病病例和303例对照中,MEF2A基因11号外显子CAG重复序列存在多态性,按照不同遗传模式分析,4～8个CAG重复序列均与冠状动脉病变支数无明显相关性.结论 MEF2A基因11号外显子4～8个CAG重复序列和北京地区汉族人群中冠状动脉病变的严重程度无明显相关性.     

ID-LC-MS/MS方法对高糖血症SD大鼠肾组织DNA中8-oxo-dGsn的检测

目的 用同位素稀释高效液相-串联质谱法（Isotope-Diluted LC-MS/MS,ID-LC-MS/MS）和免疫组化法检测高糖血症SD大鼠肾组织DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷（8-oxo-dGsn）的含量,评价高糖血症对大鼠肾组织DNA氧化损伤的影响.方法 健康雄性SD（Sprague-Dawley rats）大鼠28只,随机分为4组：3月糖尿病模型组（3DR组）及其对照组（3CR组）,6月糖尿病模型组（6DR组）及其对照组（6CR组）.糖尿病模型组接受腹腔单次链脲佐菌素（streptozotosin,STZ）每公斤70mg注射,对照组接受腹腔生理盐水注射.糖尿病模型组造模成功3个月及6个月后,分别抽提大鼠肾组织DNA,用ID-LC-MS/MS方法检测其DNA氧化产物8-oxo-dGsn的含量;用免疫组化法观察肾组织中DNA氧化损伤部位及程度.结果 糖尿病模型组造模成功3个月时肾组织DNA中8-oxo-dGsn高于对照组高,造模成功6个月时肾组织DNA中8-oxodGsn含量比正常对照组增加显著（P＜0.01）;免疫组化结果显示3个月模型组DNA氧化损伤水平高于对照组,6个月时模型组DNA氧化损伤更为严重.结论 高糖血症3个月可造成大鼠肾组织DNA的氧化损伤,高糖血症6个月时大鼠肾组织中DNA氧化损伤程度呈显著增加,高糖血症是肾组织中DNA氧化损伤的重要原因.     

MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响

目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。