促肾上腺皮质激素释放激素基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因敲除(KO)小鼠饲养、繁殖及基因型鉴定的方法。方法从美国Jackson实验室引进CRH KO小鼠,按照遗传学规则,对杂合子型(CRH+/-)小鼠进行配对繁殖,提取幼鼠尾部组织全基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对幼鼠基因型进行鉴定。结果 CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠的繁殖和饲养均获得成功,采用PCR成功地对所获得的小鼠进行基因分析,在子代小鼠中存在野生纯合子型(CRH+/+)、杂合子型(CRH+/-)及CRHKO纯合子型(CRH-/-)小鼠。CRH-/-小鼠较另外2种基因型小鼠存活率明显下降,但3种基因型小鼠在出生后10 d及30d体质量无明显差异。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法可从杂合子型(CRH+/-)小鼠中获得CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠。     

恶性肿瘤化疗多药耐药动物模型的实验研究

目的建立肿瘤多药耐药动物模型,为筛选有效逆转肿瘤多药耐药的药物及研究克服肿瘤耐药、提高化疗效果奠定基础。方法模拟恶性肿瘤细胞在人体内经化疗逐渐演化为多药耐药细胞的生理过程,利用BABL/c小鼠,腹腔接种S-180瘤细胞建成小鼠肿瘤动物模型,在低剂量阿霉素腹腔注射治疗下,经过15个周期的培育传代,获得了耐药的肿瘤细胞株S-180R。结果耐药细胞株对阿霉素的耐药性比亲本细胞株高66倍,对VP-16的耐药性高9倍;免疫细胞化学证实耐药细胞显示肿瘤多药耐药基因产物P-170糖蛋白过量表达;流式细胞仪荧光检测表明耐药细胞比亲本细胞排除药物的能力提高89倍。结论本研究成功地建立了S-180R耐药细胞株的肿瘤多药耐药动物模型,为进一步筛选有效逆转肿瘤多药耐药的药物及研究克服肿瘤耐药、提高化疗效果奠定了基础。     

乳腺癌中COX-2、Bax、Bcl-2的表达及熊果酸的干预作用

目的研究熊果酸（UA）对人乳腺癌SK-BR-3细胞COX-2、Bax、Bcl-2 mRNA的表达的影响,结合人体乳腺癌组织凋亡相关蛋白表达检测,探讨其作用机制,为UA的临床应用提供实验依据。方法 RT-PCR技术检测SK-BR-3细胞中COX-2、Bax、Bcl-2 mRNA的表达;免疫组织化学技术检测雌激素受体（ER）（-）,人表皮生长因子受体-2（HER-2）（＋）的人乳腺癌组织中COX-2、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 UA作用48 h后能使乳腺癌SK-BR-3细胞中COX-2、Bcl-2 mRNA表达明显减少（P〈0.05）,使Bcl-2/Bax比值减小（P〈0.05）,而对Bax mRNA的表达未见明显影响;COX-2、Bcl-2、Bax蛋白在ER（-）,HER-2（＋）的乳腺癌组织中的表达阳性率分别为86.67%（26/30）,63.33%（19/30）,56.67%（17/30）,COX-2与Bax表达呈明显负相关（P〈0.05）,与Bcl-2未见明显相关性。结论 UA可抑制COX-2、Bcl-2 mRNA表达,使Bcl-2/Bax减小;ER（-）,HER-2（＋）的人乳腺癌组织中COX-2中阳性表达率较高,COX-2与Bax表达呈明显负相关,与Bcl-2表达未见明显相关性。     

PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成激酶3 β（GSK3 β）信号通路及内质网（ER）分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化.方法：54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（Con组）,1个周期受压组（1c组）、3个周期受压组（3c组）、6个周期受压组（6c组）、9个周期受压组（9c组）和恢复期1 d组、3d组、5 d组、7 d组,每组各6只.取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹（Western blotting）法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化.结果：HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3 β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势.结论：难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程.     

锌指蛋白A20在创伤感染时对小鼠肝组织的影响

目的　研究创伤感染时小鼠肝组织中锌指蛋白A2 0的表达规律及其对内毒素性肝损害病理改变的影响。方法　选用健康昆明种小白鼠 95只 ,雌雄不拘 ,体重 18～ 2 2 g ,制作双侧股骨闭合性骨折创伤及创伤合并内毒素血症模型。随机分为正常对照组、单纯创伤组、单纯内毒素组和创伤内毒素组。以Westernblot技术检测肝组织中锌指蛋白A2 0的含量变化 ,结果以 5次实验结果的A2 0蛋白条带平均吸光度值的平均值作为蛋白含量的相对值。结果　正常对照组A2 0蛋白呈现低量表达 (12 .90± 2 .18) ;单纯创伤组各时相点与正常对照组相比差异无显著性 ;单纯注射内毒素后 0 .5h ,A2 0蛋白含量较对照组升高明显 (2 3 .80± 4.61,P <0 .0 5 ) ,至 2 .0h表达又有所升高 (2 8.40± 10 .2 0 ) ,内毒素注射后 4.0～ 7.0h为A2 0蛋白表达的高峰期 ,且较单纯创伤组显著升高 ;而创伤并注射内毒素后 0 .5hA2 0蛋白表达较单纯创伤组 0 .5h显著增高 (3 4.5 3± 1.64 ,P <0 .0 1) ;至 2 .0h表达又明显升高 (4 1.94± 3 .0 7) ,且也显著高于单纯创伤 2 .0h(P <0 .0 1) ;2 .0h后A2 0蛋白表达仍呈升高趋势 ;创伤并注射内毒素后 7.0h时表达至高峰 (5 4.2 0± 5 .61) ,与单纯创伤组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。病理观察结果显示 :创伤并注射     

1829例结直肠癌患者的临床病理特征及预后分析

目的探讨结直肠癌的临床病理特征和预后。方法应用SPSS10.0软件对1991年1月至2002年12月间经手术和病理确诊、且随访资料完整的1829例结直肠癌患者的临床资料进行统计分析,并通过Cox回归模型,确立影响预后的独立因素。结果1829例结直肠癌患者的平均生存时间为76.8个月,5年生存率56.9%。单因素分析结果显示年龄、出现症状的时间、肿瘤部位、手术性质、病理类型、肿瘤直径、原发肿瘤侵犯深度、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期与预后相关。多因素回归分析显示肿瘤部位、手术性质、病理类型、肿瘤直径、原发肿瘤侵犯深度、淋巴结转移和Dukes分期是影响结直肠癌患者术后生存的独立因素。结论应加强普查和早诊的意识,早期发现、早期诊断和治疗结直肠癌,最大限度地改善患者的生存状况。     

膀胱非尿路上皮性肿瘤的诊治(附46例报告)

目的:探讨膀胱非尿路上皮性肿瘤的诊断、治疗方法和预后。方法:回顾性分析2002年1月～2010年12月收治的46例膀胱非尿路上皮性肿瘤患者的临床资料:男34例,女12例。年龄30～82岁,平均61.3岁。术前辅助检查主要包括B超、盆腔CT、膀胱镜加病理活检以及131I-MIBG。42例行手术治疗,4例放弃手术。结果:46例术前或术后病理检查诊断为膀胱鳞状细胞癌19例,膀胱腺癌18例(单纯性非脐尿管腺癌8例,脐尿管腺癌5例,转移性腺癌5例),膀胱小细胞癌4例,膀胱嗜铬细胞瘤5例。术后40例随访12～72个月,膀胱嗜铬细胞瘤5例均健在,膀胱鳞癌及腺癌各2例随访至14～26个月仍存活,其余患者平均存活时间13.2个月。结论:膀胱非尿路上皮恶性肿瘤恶性程度高,确诊时大多已是晚期,预后差。膀胱根治性切除术是除转移性癌和小细胞癌外的膀胱非尿路上皮性恶性肿瘤的推荐手术方案,小细胞癌以化疗为主,转移性癌以改善尿路症状为主,良性嗜铬细胞瘤以膀胱部分切除为主。     

BCG和IL—2膀胱灌注预防膀胱癌复发的疗效观察

为了解ＢＣＧ与白介素２（ＩＬ２）联合应用膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效，将６８例膀胱癌随机分为两组：一组用ＢＣＧ１５０ｍｇ＋ＩＬ２１００００Ｕ，另一组单用ＢＣＧ１５０ｍｇ行膀胱内灌注。随访３～７５个月，平均３９．６个月，无肿瘤复发者ＢＣＧ＋ＩＬ２组３２例（９４％），单用ＢＣＧ组２８例（８２％），两组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ＢＣＧ与ＩＬ２联合应用能更有效地防止膀胱癌术后复发。     

食管癌围手术期死亡原因分析

目的探讨食管癌围手术期死亡原因及影响因素。方法总结1970年-2004年1858例食管癌手术患者临床资料,选择17个可能影响围手术期死亡的因素,应用Cox回归模型进行多因素分析。结果1858例食管癌手术患者围手术期死亡36例(1.94%)。呼吸系统并发症是引起围手术期死亡最常见的原因(41.7%)。Cox模型多因素分析显示严重吞咽困难、长期重度吸烟史、手术时间和手术年代是影响食管癌围手术期死亡的独立因素(P<0.05)。结论加强营养、改善肺功能、缩短手术时间是降低食管癌围手术期死亡率的重要方法。     

原发性气管肿瘤的外科治疗

目的探讨原发性气管肿瘤外科治疗特点及预后,提高其诊治水平。方法回顾性分析1982年2月至2009年8月中南大学湘雅医院和湖南省肿瘤医院收治的38例原发性气管肿瘤患者的临床资料,其中男24例,女14例;年龄7～65岁。良性病变2例,腺样囊性癌13例,鳞癌11例,粘液表皮样癌5例,腺癌4例,其他组织类型3例。1例行开胸探查术,33例行肿瘤切除术和气道重建术,根据肿瘤生长特征行气管环形切除术＋端端吻合术或气管楔形切除术,1例在纤维支气管镜下行乳头状瘤切除术;另3例未行手术治疗。采用Kaplan-Meier法计算生存率,采用log-rank法比较不同气管肿瘤组织类型及行不同术式患者的生存率。结果行开胸探查术1例患者术后第3d死于呼吸衰竭,围术期病死率2.94%（1/34）,余33例术后康复出院。术后早期并发症发生率35.29%（12/34）,其中肺部感染6例、肺不张4例及声音嘶哑2例。随访6个月～15年,随访率97.29%（36/37）。3例未手术患者均在出院后6个月内死亡。33例患者术后1年、5年和10年生存率分别为88%[95%CI（0.77,0.99）]、47%[95%CI（0.29,0.66）]和41%[95%CI（0.21,0.61）]。腺样囊性癌及粘液表皮样癌术后生存率明显高于鳞癌及其他组织类型（χ2=17.581,P=0.001）。患者行气管楔形切除术与环形切除术后5年生存率分别为63%[95%CI（0.34,0.91）]和77%[95%CI（0.44,0.99）],其差异无统计学意义（χ2=0.021,P=0.886）。结论原发性气管肿瘤首选手术治疗,术后远期生存率与肿瘤组织类型有关