达亚美Techno TwinStation血型仪在交叉配血中的应用

目的评价达亚美Techno TwinStation全自动血型仪在交叉配血中的准确性。方法用达亚美Techno TwinStation全自动血型仪对4 500例患者样本进行交叉配血,并与传统的抗人球蛋白试管法、聚凝胺法进行对照试验。结果 (1)200份抗体筛查阴性的标本,三种方法交叉配血试验结果完全相符;4 280份抗体筛查阴性的标本,全自动血型仪和聚凝胺法交叉配血试验结果完全相符;(2)20份抗体筛查阳性标本,交叉配血试验结果为:全自动血型仪法20例不相容,聚凝胺法16例不相容,抗人球蛋白试管法18例不相容,结果比较无统计学差异(P>0.05)。结论达亚美Techno TwinStation血型仪用于交叉配血检测,结果可靠,实验操作规范化、标准化,降低了人为错误的发生率;实验结果可永久保存,便于查询和医疗举证。     

结核杆菌抗原Ag85A HLA-A*0201限制性CD8+ CTL表位的预测和鉴定

目的预测结核杆菌（Mtb）抗原Ag85A的HLA-A＊0201限制性CD8^＋细胞毒性T细胞（CTL）表位,并对其进行鉴定。方法应用数据库SYFPEITHI预测可能存在的HLA—A＊0201的限制性CD8^＋CTL表位,并经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A＊0201的亲合力,经时间荧光分辨法检测结核（TB）患者外周血单个核细胞（PB-MC）对抗原肽的增殖反应,再通过细胞毒实验研究抗原肽诱导的T细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Ag85A的HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL表位。结果位于Ag85A氨基酸序列7（48-56aa）和5（242-250aa）的表位与HLA—A＊0201分子具有较高的亲和力,并能刺激HLA-A＊0201阳性结核患者PBMC增殖,诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽7GLPVEYLQV（48—56aa）和肽5KLIANNTRV（242—250aa）是Mtb抗原Ag85A的HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL表位。     

结核分枝杆菌抗原Ag85A(Rv3840c)限制性CD8+CTL表位的预测及鉴定

目的预测及鉴定新的HLA-A*0201结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85A中的CD8+CTL优势表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测可能存在的HLA-A*0201的限制性CD8+CTL表位,并经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力、经时间荧光分辨法检测结核(TB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应,再通过细胞毒实验研究抗原肽诱导的T细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于Ag85A氨基酸序列(48-56)的肽表位与HLA-A*0201分子具有较高的亲和力,并能刺激HLA-A*0201阳性结核患者PBMC增殖,诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽6(GLPVEYLQV,48-56aa)是Mtb抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,这为今后进一步研究结核杆菌,作为设计结核疫苗的候选表位奠定了一些基础。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群检测的意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的特点及意义。方法 以35倒健康人作为对照组,用流式细胞术分析了35例确诊的PBC患者外周血T淋巴细胞亚群及其分泌IL-4和IFN-γ情况。结果 PBC患者组CD^4＋T细胞升高,CD8^＋T细胞下降,CD4^＋T／CD8^＋T比值上升（P〈0．05）;PBC患者CD4^＋T细胞IFN-1表达显著升高（P〈0．05）,而IL-4水平与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 在PBC发病机制中,CD4^＋T细胞和TH1亚群细胞超重要作用。     

结核分枝杆菌抗原Rv0173的克隆、表达与纯化

目的 在大肠杆菌中表达、纯化结核分枝杆菌Rv0173抗原,为研制新型结核病疫苗打下基础.方法 将结核杆菌抗原Rv0173的全长cDNA插入到原核表达载体pGES-4T-1中,构建成Rv0173重组质粒.将重组质粒转入大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白.结果 获得了pGEX4T-Rv0173 重组子,Rv0173蛋白在BL21菌中获得表达,表达的蛋白条带大小约45KD,与预期结果相符.结论 成功地对结核杆菌免疫保护性抗原Rv0173进行了基因克隆与表达,为进一步研究其在结核病新型疫苗研制中的应用奠定了基础.     

人源M2二联体靶抗原BO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

目的:表达二联体BO-E2重组融合蛋白,以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)方法扩增得到抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链:二氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a( ),构建重组表达载体pET28a( )-BCOADC-E2,pET28a( )-OGDC-E2,pET28a( )-BO-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE、westem blot等鉴定.结果:经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了3种重组质粒.异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,获得3种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论:重组表达的BO-E2融合蛋白将有利于PBC的实验室诊断.     

ORTHOAutoVueInnova强生全自动血型仪常见故障分析及排除方法

近年来，ORTHO AutoVue Innova强生全自动血型仪在全国各地血站及各大医院的输血科得到了广泛应用。全自动血型仪可以实现高智能的自动化，逐步得到了医务工作者的认可。我院输血科运用强生全自动血型仪主要开展临床交叉配血试验、血型鉴定试验、抗体筛查试验等。现将我科使用强生全自动血型仪遇到的常见故障和排除方法作一总结。     

三种全自动血型仪在交叉配血试验中的应用比较

目的 比较3种全自动血型仪用于交叉配血试验的准确性和敏感性.方法 随机将1台全自动血型仪检测出的交叉配血阳性患者和相应献血者标本,置另外2台全自动血型仪进行交叉配血试验,共计80对交叉配血标本,用经典抗人球蛋白配血法进行交叉配血验证.分析不同仪器的假阳性率,并进行比较.结果 达亚美、强生、戴安娜3种全自动血型仪用于交叉配血试验的敏感性较高,假阳性率分别为8.97％、11.25％、10.13％,经分析,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种全自动血型仪应用于临床交叉配血试验较敏感,均有一定程度的假阳性率.对于仪器交叉配血显示的弱阳性结果,需用经典抗人球蛋白配血法进行验证.     

自身抗原gp210融合蛋白的重组表达及其临床应用研究

目的 重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化（PBC）的临床诊断和病情监测。方法 针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a（＋）,构建重组表达载体PET28a（＋）-gp210,转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋白,进一步经Ni2＋亲合层析柱纯化。应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体。结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a（＋）-gp210重组质粒。经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白。经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5%,与疾病对照组及正常对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。PBC患者临床资料分析表明,抗gp210阳性患者中IgM浓度显著高于抗gp210阴性患者;经UDCA治疗后,28位PBC患者中,3例抗gp210抗体由阳性转为阴性,9例抗gp210抗体持续阳性,1例抗gp210抗体由阴性转为阳性,16例抗gp210抗体持续阴性;其他临床症状与抗gp210抗体无显著相关。结论 应用重组gp210融合蛋白建立ELISA检测自身抗体,对PBC诊断具有较好的特异性,为PBC的临床诊断和病情监测提供了有力依据。     

OGDC-E2和BCOADA-E2的二联体检测在原发性胆汁性肝硬化中的意义

目的通过重组表达抗原OGDC-E2和BCOADC-E2的二联体融合蛋白(B0),并用于检测自身抗体及临床意义。方法重组表达的融合蛋白(B0),通过Ni-NTA亲和柱纯化,经过免疫印迹法(IBT)和酶链免疫吸附(ELISA)法检测56份PBC患者血清,以48份自身免疫病患者、50份其他肝病患者、70例正常人血清为对照组。结果56例确诊的PBC患者中,42例阳性,阳性率为75.0%。而健康体检者和疾病对照组血清中的M2抗体均为阴性。结论通过用重组表达的二连体B0检测PBC患者血清中的M2抗体,具有一定的特异性及敏感性,为临床进一步研究PBC,辅助诊断提供一些辅助参考。