正形红细胞在肾性血尿中的评价

目的 为了正确地应用及评价红细胞位相对血尿定位的标准，认识正形红细胞的诊断意义。方法 对674例肾活检诊断为各类 肾小球疾病的尿红细胞形态作对比分析，结果 其中有58例表现为正形红细胞，占8.6%，说明了即使红细胞形态正常，也不能排除肾小球疾病。结论 在肾小球疾病中，正形红细胞的形成是多因素的，我们应该客观地结合临床来评价检测方法和结果。     

镉染毒后肾小管上皮细胞内氧自由基代谢与损伤之间关系的研究

本文以离体肾小管上皮细胞为研究对象，观察了镉致肾小管上皮细胞损伤时细胞内氧自由基反应及其与细胞超微结构改变之间的关系。结果表明，镉可诱发离体肾小管上皮细胞脂质过氧化反应增强，脂质过氧化产物明显增加，超氧化物歧化酶及过氧化氢酶活性显著受抑，与此同时肾小管细胞出现一系列超微结构改变；抗氧化剂ＶｉｔＥ可使脂质过氧化作用明显减弱。提示镉臻肾小管上皮细胞损伤与氧自由基对细胞膜结构及功能的损伤有关，氧自由基在     

镉对离体肾小管上皮细胞的毒性及机理研究

为了进一步了解镉的肾毒性机理，作者采用放射免疫、细胞化学及生物化学分析的方法，观察了重金属镉对离体肾小管上皮细胞功能及代谢方面的直接作用。结果发现，经镉染毒后，肾小管上皮细胞对α－甲基－Ｄ－葡萄糖苷的摄取量明显减少，同时Ｋ离子外流增加，ｃ－ＡＭＰ含量降低，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性明显受抑，在葡萄糖转运过程中，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶所维持的电化学梯度对Ｎａ／糖转运起着极为重要的作用，肾小管上皮细胞内能源系统受损可能是镉致肾损伤的发病机理之一。此外，本研究尚检测了一组肾小管标志酶及功能酶（ＡＫＰ、γ－ＧＴ、ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ、ＮＡＧ）的变化，发现它们可很好地反应肾小管上皮细胞的损伤程度及代谢状态，具有较好的临床实用价值。     

系统性红斑狼疮肿瘤坏死因子受体Ⅱ196位点基因多态性及重组反转录病毒载体的构建

目的调查南方地区中国人肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNFRⅡ)196位基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)的关系并构建野生和突变的反转录病毒载体以研究其功能差异。方法利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了106例SLE和119名健康人TNFRⅡ196位的基因型。将扩增TNFRⅡ196McDNA克隆到PMD18-T载体上,定点突变为TNFRⅡ196R,然后亚克隆到反转录病毒载体PLXSN上(PLXSN-TNFRⅡ196M和PLXSN-TNFRⅡ196R)并分别转染大鼠系膜细胞,以四甲基偶氮唑(MTT)法观察对系膜细胞增生的影响。结果①SLE组TNFRⅡ196R等位基因型明显高于正常组(35.2%vs14.3%,P<0.05);②成功构建野生型和突变型重组反转录病毒载体;③rhTNF-α刺激后196R型转染系膜细胞的增生明显高于196M型(P<0.05)。结论TNFRⅡ196R与中国南方地区SLE相关,其可以高效传导TNF-α的信号,可能参与SLE的发病。     

清栓抗癌灵胶囊的含量测定

本文采用二阶导数紫外光谱法测定干蝮蛇毒蛋白含量：于波长240～320nm处，△λ为4，上下范围为：0．1，测定二阶导数光谱。以峰谷法测定波长2981nm和2811nm之间的振幅值。特样品和对照品振幅值相此较，计算含量，平均回收率100．0%，CV=0，n=5。方法简便，准确，但需要对照品；用酶的相对活力测定含量：在底物N-对苯磺酰-L-精氨酸甲酯过剩的条件下，蝮蛇毒素催化底物水解，在257nm波长处测吸收虎改变值，计算所台的相对酶活力单位。平均回收率99．6％，CV=0．6％，n=7。此法不需用对照品，能直接测定精氨酸酯酶含量。     

普通光镜对血尿定位诊断的评价

对２１４例血尿患者进行了４１２次新鲜尿沉渣光镜检查以观察尿红细胞的形态。结果发现：１８５例经肾穿刺确诊为肾小球疾病的患者中，尿红细胞形态以畸形红细胞为主者占８５％；２９例非肾小球血尿患者尿红细胞形态的诊断符合率为９０．４％。提示普通光镜观察尿红细胞形态和计数确有鉴别血尿来源价值。     

不同固定剂在激光共聚焦荧光技术中的效果评价

【目的】 探讨3种不同的固定剂在激光共聚焦免疫荧光技术中对信号表达的影响。 【方法】 对培养的NRK-52E细胞分成胞浆,胞膜及胞核抗原3组,每组用4 g/L PFA,甲醇及丙酮分别固定后,完成免疫荧光实验;原代滑膜成纤维样细胞分两组用4 g/L PFA 固定后分别用TritonX-100 和预冷的甲醇进行打孔,完成免疫荧光实验之后,使用Confocal显微镜在条件同等的情况下观察并拍摄荧光图像,以证实不同的固定剂对信号表达的影响。【结果】 胞浆蛋白α-SMA用丙酮固定时信号清晰锐利,将Actin蛋白的丝状结构表达得非常充分;胞膜蛋白ZO-1用甲醇固定处理的信号最清晰;胞核蛋白磷酸化的Smad3用4 g/L PFA固定时p-Smad3信号与细胞核具有很好的共定位关系;原代滑膜成纤维样细胞用预冷甲醇打孔处理的细胞,其磷酸化的骨架相关蛋白(P-ERM)蛋白信号明显优于用TritonX-100打孔处理的细胞。 【结论】 针对不同抗原结构特点选用固定剂;有机溶剂固定剂用于细胞支架成分的固定,交联剂固定剂用于膜相关成分的固定,同时使用交联剂固定剂及有机溶剂打孔可较好的保存抗原而获得高质量的荧光图片。     

肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1在马兜铃酸I跨细胞转运及其在细胞毒性中的作用

目的 探讨肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1（OAT1）在马兜铃酸I（AAⅠ）跨细胞转运中的作用及其毒效关系。 方法 体外构建重组大鼠OAT1（rOAT1）基因的真核表达质粒,将含rOAT1质粒导入人胚肾细胞(HEK-293)。观察rOAT1及被其特异性底物对氨基马尿酸（PAH）阻断后对AAⅠ摄取的作用。并分别观察不同浓度AAⅠ对转染细胞caspase-3 mRNA表达和细胞凋亡的影响。Western 印迹检测转染细胞rOAT1表达;毛细管电泳法检测细胞内PAH 浓度;高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内AA浓度。RT-PCR检测细胞caspase-3 mRNA表达;流式细胞法（Annexin V-FITC）检测细胞凋亡水平。 结果 转染rOAT1 质粒的HEK-293细胞特异性表达rOAT1。以40、80、120、160 mg/L AAⅠ分别刺激细胞45 min,转染rOAT1组细胞内AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。以 120 mg/L AAⅠ分别刺激细胞30、60、90、120 min,转染组细胞AAⅠ浓度显著高于空载体组（均P < 0.05）。加入PAH （5 mmol/L）特异性阻断OAT1 35 min后,以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞,细胞内AAⅠ浓度显著低于未阻断组（均P < 0.05)。以上述不同浓度 AAⅠ分别刺激转染细胞和空载体细胞,两组细胞caspase-3 mRNA表达及细胞凋亡随AAⅠ浓度上升而增加,转染组细胞凋亡率显著高于空载体组（均P < 0.05）。 结论 转染含rOAT1 质粒的HEK-293细胞表达rOAT1。AAⅠ呈浓度依赖性和时间依赖性进入rOAT1转染细胞,并呈剂量依赖性诱导OAT1表达细胞凋亡。提示OAT1介导AAⅠ的肾细胞转运及细胞毒性。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞IL-17表达的初步观察

目前ＩＬ 17的研究已发现 ,其在一些自身免疫性疾病如移植肾排斥反应、类风湿性关节炎、多发性硬化、支气管哮喘等存在表达、分泌的异常 ,但在系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)患者中 ,其表达、分泌是否存在异常 ,目前国内、外尚未见研究报告〔1〕。本研究通过测定ＳＬＥ患者血清、无刺激或加不同刺激培养外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)上清液ＩＬ 17蛋白水平和其ＰＢＭＣ内ＩＬ 17ｍＲＮＡ水平的表达量 ,以了解ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ表达、分泌ＩＬ 17有无异常及其与ＳＬＥ疾病活动性的关系。材料与方法病例选择 :30例患者 ,全部符合美国风湿病协会1982…     

环孢素致离体肾小管上皮细胞损伤时的氨基酸代谢及甘、丙氨酸的保护作用

目的研究环孢素Ａ（ＣｓＡ）的肾毒性机制。方法制备了体外ＣｓＡ致肾小管上皮细胞（ＴＥＣ）损伤模型，对ＴＥＣ内氨基酸组成、含量、ＡＴＰ水平及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放率等指标进行了一系列检测。结果（１）经ＣｓＡ处理，ＴＥＣ内氨基酸水平没有明显变化；（２）体外投入甘、丙氨酸对ＣｓＡ所致的损伤可起保护作用，其作用与投入时机及剂量有关，而与Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶的抑制无直接联系。结论ＣｓＡ肾中毒时对细胞内氨基酸代谢影响不大，甘、丙氨酸对ＣｓＡ性肾损伤有明确的保护作用，其作用发挥可不依赖正常的能量代谢