重组结核分枝杆菌1600O蛋白抗原(rPA16)豚鼠皮肤试验效果的研究

目的以豚鼠为动物模型,分析重组16000蛋白抗原rPA16能否引起迟发型超敏反应(DTH)。方法连续3次皮下注射结核分枝杆菌H37Rv热灭活菌体,使豚鼠致敏后进行皮肤试验。以生理盐水为阴性对照,PPD为阳性对照组,重组蛋白则设置0.1,0.2,0.4μg三个剂量,分别进行背部皮内注射,注射后24～72h观察豚鼠注射局部皮肤的皮痘、硬结程度。结果0.1～0.4/0.2ml的重组蛋白抗原rPA16在48～72h阳性反应平均直径与PPD相比均无显著差异(均P＞0.1),3种浓度的重组蛋白豚鼠皮肤反应的阳性率之间也无显著差异(P＞0.1)。48h为rPA16引起豚鼠皮肤反应的较佳测量时间。结论重组结核分枝杆菌16000蛋白抗原与PPD相比,所引起的豚鼠皮肤DTH的反应能力基本相似,具有皮肤试验的潜在应用价值。     

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白38kD(rTPA38)和16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原,PPD为对照,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 246例肺结核病组,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为66.3%、63.0%和72.3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测,rTPA38特异性分别为97.6%、96.8%、86.0%。rTPA16特异性分别为94.7%、93.1%、75.0%。PPD特异性为93.4%、85.7%、67.9%。统计分析显示,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组,其阳性率有显著性差异 (P＜0.05)。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P＜0.05)。rTPA38和rTPA16同时检测108例肺结核病组血清可提高11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性,是ELISA的可靠抗原,与rTPA16联用可提高灵敏度,对结核病血清学诊断有较高参考价值。     

入伍新兵结核病感染情况调查

目的 调查入伍新兵结核感染状况,为部队结核病防治提供决策依据。方法对2007年入伍新兵进行结核菌素试验,并进行相关分析。结果共调查入伍新兵5059人,有卡痕率39．14％,结核菌素试验阳性率、强阳性率、有卡阳性率、无卡痕阳性率分别为50．48％、2．33％、75．40%和34．46％。中、东、西部地区来源卡介苗接种率分别为32．89％、47．34％、46．55％,结核菌素试验阳性率分别为47．00％、55．88％、50。99％。城市来源入伍新兵结核菌素试验阳性率与强阳性率与农村者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在新兵中进行结核菌素试验调查,可以监测新兵结核感染率．筛选卡介苗接种对象。     

Ag85a-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的 构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗.方法 通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85a的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗.结果 通过PCR扩增获得约800 bp的ag85a基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明ag85a基因正确插入到pYUB295质粒中.将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好.pYUB295-ag85a重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:ag85a-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85a蛋白在卡介苗中分泌表达.结论 成功构建了ag85a-卡介苗重组疫苗.     

ag85b-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究ag85b-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、ag85b-卡介苗重组疫苗免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果ag85b-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比,无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,ag85b-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组均有抗Ag85B特异性抗体产生,ag85b-卡介苗重组疫苗组抗Ag85B特异性抗体水平高于卡介苗组;卡介苗、ag85b-卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上。结论结核分枝杆菌ag85b基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体。     

结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用

目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体.结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD.经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上.Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应.ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清.结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌.纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值.