抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

甘露醇治疗早期筋膜间隙综合征20例

本院1995年8月～1998年11月应用甘露醇治疗早期筋膜间隙综合征20例,疗效满意。1　临床资料1.1　一般情况　本组均为男性,年龄21～50岁,平均35岁。前臂4例,小腿16例,均伴骨折。致伤原因:车祸轧伤14例,重物砸伤4例,在外院石膏固定过紧2例。受伤至来院时间1.5～12h。1.2　治疗方法及结果　均于早期应用20%甘露醇250ml在10～15min内输完,间隔2h左右重复1次。其中12例仅输2次甘露醇后症状明显改善,肿胀消退,疼痛消失,指(趾)活动不受限;6例输3或4次甘露醇后症状逐渐缓解;2例效果不明显,予筋膜切开减压术,术后肢体功能恢复正常,未遗留后遗症。2　讨…     

应用T型微型锁定钢板侧方固定治疗近节指骨近端骨折

[目的]探讨应用T型微型锁定钢板侧方固定治疗近节指骨近端骨折的手术方法及临床效果。[方法]2012年3月～2016年10月,应用T型微型锁定钢板侧方固定治疗近节指骨近端骨折32例,男18例,女6例;年龄24～52岁,平均(35.52±4.34)岁;拇指3例,食指4例,中指10例,环指9例,小指6例;根据骨折移位情况以及骨折近端螺钉固定时可供操作空间选择合适的侧方入路,于手指近节侧方作纵行或向背侧弧形切口,拉开或切除伸指肌腱侧束,暴露骨折断端,直视下复位。于近节指骨侧方,手内在肌以及侧副韧带止点远端放置T型微型锁定钢板固定骨折断端。[结果]所有病例切口均一期愈合,无感染发生,32例患者均获得随访,随访时间12～30个月,平均(22.53±7.16)个月,所有骨折均完全愈合。术后患指活动功能按手指总活动度(TAM)功能评定:优34.38%(11指),良50.00%(16指),可15.63%(5指),优良率为84.38%。[结论]应用T型锁定钢板侧方固定治疗近节指骨近端骨折可解决螺钉有效固定空间小,固定强度不足问题;术后患者可早期进行功能锻炼,恢复手指伸屈功能,疗效肯定。     

类风湿关节炎患者自身反应性B细胞异常表达相关分子的检测和分析

目的:分析类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者自身反应性B细胞及与之功能相关的自身抗体和信号分子的表达。方法:采用流式细胞仪分析22例RA患者及10例正常对照者的外周血自身反应性B细胞比率及RA和骨关节炎(OA)患者(n=10)外周血单个核细胞(PBMC)Th2的表达。用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测RA患者及正常对照者PBMC细胞外信号调节激酶(ERK)、黏着斑激酶(FAK)基因的相对表达量,并采用蛋白印迹法检测NF-κB信号通路的磷酸化格局;用ELISA法检测和分析RA及OA患者血清及关节滑膜液抗Ⅱ型胶原抗体水平,同时检测RA患者血清及关节滑膜液中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达状况。结果:相对于正常对照者,RA患者外周血中存在高表达CD19+的自身反应性B细胞;同时其PBMC中ERK基因相对表达量提高、NF-κB信号通路磷酸化活跃。相对于OA患者,RA患者关节滑膜液中抗Ⅱ型胶原抗体水平显著升高。RA患者关节滑膜液中MMP-3及TIMP-1等水平较其自身血清中升高。结论:RA患者自身反应性B细胞及相关分子的异常表达可能是介导RA发病的又一重要因素。     

类风湿关节炎患者自身抗体及关节损伤因子检出的临床意义

目的:检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节损伤因子及多种自身抗体,探讨其与RA发病间的关联性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测15例RA患者血清和滑膜液中关节损伤相关因子基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinases 3,MMP3)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)、骨破坏因子——核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和其保护性抑制剂骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达。检测6例RA患者的sIL-6和sIL-6Rα、sgp130表达水平,同时设骨关节炎(osteoarthritis,OA)为对照组(6例)及正常对照组(8例)。分析22例RA患者临床常用的检测指标,包括类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、葡萄糖-6-磷酸异构酶及23例RA患者抗胶原Ⅱ抗体的表达,并以OA患者为对照;针对用合成的EBV肽段和人HLA-DR4肽段检测和分析15例RA患者抗EBV肽段和抗HLA-DR4肽段抗体的阳性率。结果:RA患者关节腔滑膜液中MMP3和TIMP1表达异常,滑膜液MMP3/TIMP1比值显著高于相应的血清相应比值(P<0.001)。与OA组相比,RA患者血清及滑膜液中RANKL水平升高(P<0.05)。RA患者体内IL-6信号系统表达异常,其滑膜液中sIL-6Rα水平高于OA组(P<0.05),而天然拮抗剂sgp130的血清水平则显著低于OA组血清中(P     

干扰素β通过RANK／RANKL信号分子调控胶原抗体诱导关节炎小鼠的分子学机制

目的：研究干扰素β（interferonβ，IFN-β）在抗胶原Ⅱ功能域抗体诱导的小鼠类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）样模型中的调控作用，探讨RA潜在的干预新靶点。方法：应用抗胶原Ⅱ功能域抗体诱导建立胶原抗体诱导关节炎（collagenantibodvinducedarthritis，CAIA）小鼠模型，通过其表型、关节评分、免疫组织化学染色、X射线衍射分析是否建模成功，并用IFN-β基因工程药物干预，RANK体外诱导破骨细胞生成，抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞数量．实时荧光定量聚合酶链反应检测RANK／RANKL关键分子变化。结果：CAIA小鼠建模成功，IFN-β能显著缓解CAIA小鼠的病情，实时荧光定量聚合酶链反应显示IFN—β干预后小鼠骨关节中c—FOS、NFATc-1的表达量下降，IFN—β能抑制破骨细胞生成。结论：IFN—β缓解CAIA小鼠模型发病的可能机制是通过RANK／RANKL-IFN．β-NFATc-1下调破骨细胞的生成。     

带蒂胸脐皮瓣加部分皮片回植治疗前臂大面积皮肤脱套伤

目的探讨应用带蒂胸脐皮瓣及部分皮片回植治疗前臂大面积皮肤脱套伤的临床疗效。方法对2009年2月-2012年8月收治的10例前臂大面积皮肤脱套伤,根据脱套皮肤损伤情况,采用带蒂胸脐皮瓣修复腕或肘关节,同时根据伤情修剪部分脱套皮肤成中厚皮片、含真皮下血管网皮片或吻合静脉,作原位回植修复其余创面。所有皮瓣均于术后3～4周断蒂。结果10例皮瓣全部成活,2例回植皮片成活面积100％,5例回植皮片成活95％。2例回植皮片成活90％,1例回植皮片成活80％,遗留创面经二期植皮或换药全部愈合。术后随访3～12个月,皮瓣外形较好,质地柔软,回植皮肤无溃疡;腕、肘关节功能恢复良好。结论带蒂胸脐皮瓣加部分皮片回植治疗前臂大面积皮肤脱套伤,有助于肘、腕功能恢复;彻底清创、对脱套皮肤的伤情评估、尽量削薄及静脉修复是提高回植皮肤成活率的关键。     

IL-6/IL-6受体与类风湿关节炎关联性研究新进展

IL-6是一种多效性前炎症细胞因子,有多种生物活性,包括介导炎症反应,免疫反应等。IL-6在许多炎症性疾病中高表达,如RA,SLE,Crohn’s病等。IL-6的产生受多种因素的调节如NF-κB,Lin28,let-7 microRNA,IL6阳性反馈环,JunB等。IL-6受体(IL-6R)包括特异性IL-6Rα及IL-6Rβ即IL-6家族成员共有的信号转导蛋白gp130。IL-6可通过两种途径向细胞内传导信号:传统途径及反式信号途径,LMO4可参与反式信号途径的调节。IL-6/IL-6R在T、B细胞的发生中起重要作用。IL-6可抑制Th1、Treg的分化,促进Th2的分化;而且IL-6是CD4+T细胞分化为Th17细胞所必需;在B细胞中IL-6可诱导RAG基因的表达,促进抗体的产生。近年来越来越多的证据表明IL-6/IL-6R与RA存在密切关联性。RA患者血清及滑液中IL-6及sIL-6R的浓度升高,并且IL-6水平与疾病活性及临床表现密切相关,这可以解释RA患者的许多症状。因此可将IL-6信号转导途径相关的分子作为RA的治疗靶点,目前也研制出几种药物,其中之一为抗sIL-6R的人源化抗体Tocilizumab。临床试验中,该药可减轻RA患者的症状,降低疾病活性,可是也带来一定的副作用,这就限制了该药在临床中的应用。正在研制的另一种抗IL-6R的抗体可能为干预RA带来新的希望。     

足背内侧皮神经内侧支营养血管皮瓣逆行修复 趾缺损

采用足背内侧皮神经内侧支营养血管皮瓣逆行转移修复趾创面 8例。皮瓣面积最小 5 cm× 3cm,最大 7cm× 5 cm。全部成活 ,皮瓣质地柔软 ,感觉恢复良好。体会 :足背内侧皮神经位置较恒定 ,皮瓣切取方便 ,操作简单 ,不须牺牲主干血管。皮瓣内皮神经可与受区神经吻合 ,使皮瓣恢复感觉 ,耐磨损。足背内侧皮神经内侧支营养血管皮瓣逆行修复趾缺损@苗平$天津蓟县52891部队 @阎永起$天津蓟县52891部队 @周明武$中国人民解放军第一五三医院     

一例双手十指离断伤再植患者的护理

通过回顾研究一例过程曲折,效果满意的双手十指离断再植病例,总结通过优质、个性化护理,注重心理疏通,建立医护之间互信,及时发现并解决血管危象,手指成活后制定系统的康复训练计划是其中的护理要点。