正常胃粘膜、癌周粘膜和癌组织中Cu Zn SOD免疫组化研究

本文首次报道了利用兔抗人Cu Zn SOD抗血清对正常胃粘膜和癌周及癌组织中Cu Zn SOD分布,进行免疫组化定位研究。发现正常胃粘膜组织中Cu Zn SOD染色强度明显高于癌周粘膜(P<0.05);癌周粘膜组织明显高于癌组织(P<0.05)。表明胃癌细胞中Cu Zn SOD具有明显降低的现象。结果还显示了39例胃癌组织中Cu Zn SOD染色阳性强度与术中所见腹腔转移有一定的关系,表现为中度阳性组其腹腔转移率(37.5％)低于弱阳性和阴性组(51.3％)。本文还对上述结果形成机制和外源性SOD制剂的临床应用做了简要探讨。     

围术期胃癌患者血小板膜糖蛋白CD41、CD62P的变化

目的 :研究胃癌患者围术期血小板膜糖蛋白CD41、CD6 2P的变化 ,为围术期防凝抗凝提供理论依据。方法 :应用SDS -PAGE蛋白电泳和Westernblot(免疫印迹技术 )检测 2 6例胃癌患者围术期CD41、CD6 2P表达的变化。结果 :与正常人相比 ,胃癌患者CD41、CD6 2P含量增多 ,随着手术进行 ,两者含量进一步升高 ,尤以术后 30min为甚。结论 :胃癌患者术前血小板即处于活化状态 ,手术造成活化程度增强。因此 ,应注意围术期防凝抗凝措施 ,以防止血栓病的发生。     

肺癌组织p16和Rb基因mRNA表达的双重原位杂交观察

目的：研究Ｐ１６和Ｒｂ基因在ｍＲＮＡ表达及其与肺癌的关系。方法：制备ｐ１６和Ｒｂ基因ｃＤＮＡ探针,采用双重原位杂交的方法,地８９例肺癌和正常肺组织进行了Ｐ１６ 一Ｒｂ基因ｍＲＮＡ表达的定位研究。结果：小细胞肺癌ｐ１６ｍＲＮＡ阳性表达率高达８２．４％,而非小细胞肺癌阳性率为４５．８％,两者差异有显著性。非小细胞肺癌ＲｂｍＲＮＡ阳性表达率为８１．９％,而小细胞肺癌一率仅５．９％,两者差异有高度显著性,     

CDKN 2/p16基因甲基化失活与肺癌关系的研究

目的 研究ＣＤＫＮ２／ｐ１６基因５’端调控序列区ＣｐＧ岛甲基化的状态与肺癌发展的关系。方法 采用甲基化敏感性核酸酶切基因组ＤＮＡ的方法,对８９例肺癌的ＣＤＳＮ２／ｐ１６基因进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果 ８９例肺癌发现该基因甲基化２１例,甲基化频率为２３．６％（２１／８９）,其中１７例发生于４２例Ｐ１６蛋白 阴性表达的患者。结论 ＣＤＫＮ２ｐ／１６基因５’端ＣｐＧ岛甲基化可能是该基因失活的重     

携带p16基因真核表达质粒载体的构建

p16基因定位于9p21,编码一个16kD的蛋白质,此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）的抑制因子（CDK4I）。有研究发现将全长p16基因的cDNA导入无p16基因的人类胶质瘤细胞中可显抑制其生长。因此,构建p16真核表达载体,针对恢复p16基因功能的基因治疗策略,将对肿瘤的治疗产生积极的意义。     

p53基因及CAR受体对ONYX-015肿瘤杀伤作用的影响

目的：利用肿瘤特异性增殖型腺病毒ONYX-015分别感染具有柯萨奇病毒和腺病毒联合受体（CAR）水平正常、p53正常或突变的,以及CAR水平低下、p53突变的肿瘤细胞株,研究ONYX-015对这些肿瘤细胞的特异性增殖及杀伤能力。方法：以正常的肝细胞株L02作为对照,用细胞病变效应（CPE）实验观察ONYX-015对细胞的选择性杀伤效应;病毒增殖实验检测野生型腺病毒（Ad5）、ONYX-015在多种肿瘤细胞中的增殖能力。结果：ONYX-015对正常的肝细胞L02无杀伤性,但能够有效地杀伤p53突变的肝癌细胞Hep3B、p53正常的肝癌细胞HepG2及肺癌细胞A549,不能杀伤p53突变的人乳腺癌细胞株MDA—MB-231。在CAR受体水平正常的癌细胞株Hep3B、HepG2和A549中,Ad5和ONYX-015均可增殖。在CAR受体水平低下、p53突变的人乳腺癌细胞株MDA—MB-231中,两种病毒均不增殖。结论：CAR受体对ONYX-015的增殖力起着至关重要的作用。在CAR受体水平正常的前提下,无论肿瘤细胞的p53基因正常与否,ONYX-015均可以有效增殖并杀伤细胞;相反,如果CAR受体水平低下,即使该种肿瘤细胞p53基因突变,ONYX-015在该细胞中的增殖力也会受到限制。ONYX-015不杀伤CAR受体及p53基因均正常的正常肝细胞。     

腺病毒介导的ＢＩＲＣ５-ｓｈＲＮＡ增强索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的　研究ＢＩＲＣ５靶向基因治疗联合索拉非尼分子靶向治疗肝癌的协同效应以及对肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法　构建ＢＩＲＣ５特异性小发卡ＲＮＡ的腺病毒ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５,用免疫细胞化学染色法检测其对ＢＩＲＣ５的沉默作用。建立肝癌移植瘤模型验证ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼治疗的疗效,采用免疫组化染色法鉴定ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５对癌细胞ＢＩＲＣ５基因表达的抑制作用;ＴＵＮＥＬ法标记ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡。结果　腺病毒介导的ＢＩＲＣ５-ｓｈＲＮＡ表达能有效沉默肝癌细胞ＢＩＲＣ５表达,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＣｔｒｌ对照组的ＢＩＲＣ５阳性表达率为（７８.８±１２.６）％,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５实验组为（２０.６±８.２）％,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０１）。Ｈｅｐ３Ｂ裸鼠移植瘤治疗后５周,与空白对照组相比,ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼组、单用ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５组、单用索拉非尼组的抑瘤率分别为６１.７８％（Ｐ＝０.００３２）、４２.３６％（Ｐ＝０.００５９）和２９.２０％（Ｐ＝０.０１６９）;与此对应,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼组与单用索拉非尼组相比,肝癌细胞ＢＩＲＣ５表达被抑制（Ｐ＝０.０３６４）,细胞凋亡比例明显升高（Ｐ＝０.０２９６）。结论　针对ＢＩＲＣ５的基因治疗能提高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性,显著诱导癌细胞凋亡。     

miR-126对细胞周期的调控及其与肺癌患者预后的关系

目的研究miR-126在肺癌中的表达变化及其与癌细胞周期调控的关系,并分析miR-126表达对肺癌患者术后生存期的影响。方法对肺癌细胞株A549和49例临床肺癌手术标本进行实时定量RT-PCR检测miR-126的表达;A549细胞转染miR-126表达载体,MTT和流式细胞术检测miR-126表达对癌细胞增殖和细胞周期的影响;Kaplan-Meier曲线和log-rank分析方法比较miR-126高、低表达组之间无瘤生存期和总生存期的差别。结果A549肺癌细胞miR-126低表达（2.10±0.67）,转染miR-126表达载体后,miR-126表达升高（12.33±1.67）;转染miR-126后96小时,A549细胞存活率为（68.33±6.67）%,明显低于亲本A549细胞（105.33±8.58）%,差异有统计学意义（P〈0.001）;与亲本A549细胞比较（G0/G1期：37.48±3.28;S期：62.03±5.23）,转染miR-126的A549细胞G0/G1期细胞比例上升（53.67±6.06）,S期下降（43.21±3.75）,差异有统计学意义（P〈0.001）;肺癌组织miR-126表达水平（12.41±4.34）明显低于癌旁肺组织（23.29±6.28）,差异有统计学意义（P〈0.001）;miR-126高表达组无瘤生存期和总生存期均明显高于低表达组（P〈0.01,P〈0.001）。结论 miR-126在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能成为肺癌治疗的可选靶点之一。     

hSulf-1基因腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖、迁移能力的影响

目的 构建携带人硫酸酯酶1基因(hSulf-1)的腺病毒载体,研究其对于人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖、迁移能力的影响。方法 通过基因操作技术将hSulf-1基因插入到腺病毒基因组中,构建重组腺病毒Ad5-hSulf1;应用蛋白质免疫印迹法检测hSulf-1蛋白在ECV-304细胞中的表达及细胞内磷酸化Akt、ERK的表达变化;MTT实验检测hSulf-1过表达对于ECV-304细胞增殖的影响;采用划痕实验研究hSulf-1过表达对于ECV-304细胞迁移的影响。结果 成功构建携带目的基因hSulf-1的腺病毒载体;免疫印迹结果表明hSulf1基因过表达会下调ECV-304细胞Akt和ERK信号分子的磷酸化水平;细胞增殖实验结果表明hSulf1基因过表达抑制了ECV-304细胞增殖,感染复数为50、100时细胞存活率下降至(68.49±0.05)%以及(67.78±0.06)%(P<0.05);划痕实验结果表明hSulf1基因过表达能够抑制细胞的迁移,相比于对照组细胞迁移能力减弱(P<0.01)。结论 重组腺病毒Ad5-hSulf1介导的hSulf-1基因在ECV-304细胞中的过表达明显抑制细胞增殖及迁移,为hSulf-1用于肿瘤及血管生长相关疾病的基因治疗奠定了基础。     

P16、Rb、C—myc基因在肾癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨P16、Rb、C-myc基因在肾癌中的表达以及肾癌组织中细胞凋亡的发生,了解两之间的相互关系。方法采用免疫组织化学法检测肾癌组织中的P16、Rb、C—myc基因的表达情况,同时用TUNEL法观察肾癌中细胞凋亡现象。结果在肾癌中,P16总阳性率为61．3％,Rb总阳性率为64．5％,C—myc总阳性率为48．4％,它们的阳性表达与细胞凋亡有相关性。结论肾癌中P16、Rb、C—myc基因促进肾癌细胞凋亡的发生,在机体抗肿瘤机制中起积极作用。