天然ABO抗体缺失的分子机制研究

目的 从ABO基因水平探讨正常人群血型鉴定中出现天然抗体缺失的机制.方法 部分或全部缺失抗体导致ABO血型正反定型不一致的15个正常健康个体运用检验红细胞表面血型抗原最为敏感的方法-吸收放散试验未能检测出其抗原性.PCR扩增后直接序列分析ABO基因全长编码区及5'端调控(CBF/NF-Y)增强子区域多态性.结果 在常规的血清学反向定型实验中,这15个标本的血清中部分或全部缺失抗体,吸收放散实验与A或B型红细胞反应均为阴性.12个标本的ABO基因分析定型、增强子区域多态性与血清学结果相符合,1个O表型的标本中存在B101等位基因,2个B表型标本中检测出A102等位基因.结论 天然ABO抗体缺失的分子机制可能部分被揭示:ABO基因编码少量表达抗原,按照天然抗体产生规律,导致不能产生相应的ABO抗体.ABO基因分型在正反定型不符的疑难血液标本鉴定中,是血清学方法 非常有益的补充手段,是正确鉴定血型的有效方法.     

新疆维吾尔族人群ABO基因多态性的研究

目的研究中国新疆维吾尔族人群ABO基因多态性分布。方法对新疆维吾尔族随机群体160人份血样进行DNA抽提,采用聚合酶链反应-序列特异性引物方法对ABO血型定型,疑难的ABO基因采用直接序列测定。结果160人中检出A101、A102、A201、A205、B01、O016种等位基因,其基因频率分别为0.2062、0.0563、0.0156、0.0031、0.1875、0.5312。结论阐明中国新疆维吾尔族人群的ABO基因结构的特点,提示中国维吾尔族人群与汉族人群间遗传多态性存在着较大程度的区别,既具有差异性又具有融合性。     

PCR-高分辨熔解曲线法在Kidd血型基因分型中的应用

目的:探讨PCR-高分辨熔解曲线(HRM)法在Kidd血型基因分型中的应用。方法:采用简单随机抽样法,选择2019年10月至11月,于深圳市血液中心参加无偿献血的256例献血者为研究对象。本组献血者年龄为18～60岁;男性献血者为142例,女性为114例。采用血型血清学试验方法对本组献血者全血标本的红细胞抗原表型进行检...     

ABO血型中的一个新变异O1等位基因的鉴定

目的 鉴定中国人群的ABO血型新等位基因。 方法 ABO血清学定型、PCR-SSP基因定型、基因克隆和测序分析。结果 一个血型血清学为A2亚型、PCR-SSP基因定型为A201的健康捐血者,其O1基因单倍体的2个碱基发生了缺失突变,即第6外显子区域中261位G缺失和第7外显子区域中496位A缺失。该等位基因与ABO*0101基因序列的差异在于496位A缺失。 结论该等位基因是一个与O1基因相关的新变异等位基因,GenBank的注册号为AY374123。     

中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因研究

为观察中国人群真实RhD阴性个体和RhD^el型RHD基因存在情况，采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选RhD阴性捐血者，通过吸收放散试验性确定其中RhD^el和真实RhD阴性，并采用PCR技术检测RHD基因第4内含子，对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术测定RHD基因第3，4，5，6，7，9和10个外显子，观察基因变异。筛选获得104名RhD阴性捐血者，吸收放散试验鉴定25名（24.0％）为RhD^el型，79名（76.0％）为真实RhD阴性；25例RhD^el全部检测到D基因exon4-intro4-exon5区域，79名真实RhD阴性个体中有5名（6.3％）个体（2名Ccdee，2名ccdEe）检测到D基因第4内含子；PCR-SSP结果显示5名个体中，4名存在全部被检测的D基因区域，1名个体（ccdEe）第5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的RhD阴性中国人存在高比率的RhD^el型，且均可检测出RHD基因第4内含子；若排除RhD^el，携带D基因的RhD阴性中国人的比率明显降低，且这些个体并非如经往报道的均为C抗原阳性。     

GPA,GPB分子相关基因GYPA,GYPB外显子全长序列直接测序方法的建立及应用评价

目的 建立人类GPA,GPB分子相关基因GYPA,GYPB外显子全长序列的DNA直接测序方法,并将此方法应用于RBC血型MNS抗原的分析.方法 以整群随机抽样法选择从2011年11月至2012年5月在本中心无偿献血的175例健康成年人的全血样品为研究对象.以血清学方法与序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法鉴定其MNS血型.根据GenBank提供的NG-007470与NG-007483基因参照序列为依据,自行设计GPA相关基因GYPA全部外显子的7对引物与GPB相关基因GYPB全部外显子的5对引物,探索最佳反应体系与PCR扩增条件,且能同时扩增2个基因全长外显子碱基序列,使用ABI3730XL DNA测序仪进行序列分析,以Oli6installer分析软件分析碱基序列.结果 所建立的测序方法可于同一反应体系、相同PCR扩增条件同时检测GPA,GPB相关基因GYPA,GYPB外显子全长序列,并准确分析本组血液样本的MNS血型的特征.基因测序结果与血清学分析及PCR-SSP鉴定结果完全一致.结论 首次建立了稳定、精确、简捷的基因直接测序分型方法,可用于检测MNS血型基因型,并分析GPA,GPB肽链中氨基酸序列的多态性,为MNS血型系统的研究以及人类群体遗传学及分子进化的研究等方面提供广泛的应用价值.     

天然ABO抗体缺失的分子机制研究

目的 从ABO基因水平探讨正常人群血型鉴定中出现天然抗体缺失的机制.方法 部分或全部缺失抗体导致ABO血型正反定型不一致的15个正常健康个体运用检验红细胞表面血型抗原最为敏感的方法-吸收放散试验未能检测出其抗原性.PCR扩增后直接序列分析ABO基因全长编码区及5'端调控(CBF/NF-Y)增强子区域多态性.结果 在常规的血清学反向定型实验中,这15个标本的血清中部分或全部缺失抗体,吸收放散实验与A或B型红细胞反应均为阴性.12个标本的ABO基因分析定型、增强子区域多态性与血清学结果相符合,1个O表型的标本中存在B101等位基因,2个B表型标本中检测出A102等位基因.结论 天然ABO抗体缺失的分子机制可能部分被揭示:ABO基因编码少量表达抗原,按照天然抗体产生规律,导致不能产生相应的ABO抗体.ABO基因分型在正反定型不符的疑难血液标本鉴定中,是血清学方法 非常有益的补充手段,是正确鉴定血型的有效方法.     

A放散型血型分子遗传结构的研究

目的研究A放散型血型的分子生物学特性。方法对5例血清学定为Ael或AelB的个体，采用4对特异性引物进行PCR扩增后，对其ABO基因的第6、7外显子进行序列测定。且对其中1例表型为AelB样本的ABO基因转录结构进行序列分析。结果1例表型为Ael的样本含已报道的Ael01基因，1例表型为Ael的样本含Ael05基因，2例表型为AelB和1例表型为Ael的样本未测出任何A等位基因，而是含有261G缺乏的001或002基因。结论A放散型血型分子结构呈多样性，含261G缺失的O等位基因的样本有弱A抗原表达的机理有待说明。     

中国人副孟买型的FZ／T1和FUT2基因的分子遗传研究：一个新的FZ／T1等位基因的鉴定

目的在7例由血清学方法确定为副孟买表型的中国人个体中，进行了分子生物学分析。方法采用聚合酶链反应和DNA直接测序、克隆测序等方法，检测7例标本的FUTl和FUT2基因的核苷酸序列组成，并对一个新的非功能性FUTl等位基因进行家系调查。结果7例标本的FUTl基因型分别为hlhl（4例），h2h2（2例），h^328 h^new（1例），hl等位基因在547～552位缺失1个AG，使得氨基酸序列发生182框码移位；b2等位基因在880～882位缺失两个T，使得氨基酸序列发生294框码移位；h^32S等位基因（nt328G〉A）导致110位丙氨酸（Ala）被苏氨酸（Tnr）置换；除h一以外，hl、h2、h^32S这3种等位基因以前都有报道，h^new以杂合子形式存在于标本7中，经克隆测序发现该新基因在nt36m400位缺失GGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC,共33个碱基，家系调查证明h^new来自其母亲。7例标本的FUT2基因型分别为，3例为正常野生型Se^357 Se^357，3例标本为Se^357 Se^357,385，1例标本为Se^357,716 Se^357,716，已知Se^357（nt357C〉T）和Se^716（nt716G〉A）为功能性的FUT2等位基因，Se385（nt385A〉T）为弱功能性的FUT2等位基因，7例副孟买表型个体至少带一个拷贝的功能性FUT2等位基因，与其分泌状态一致。结论发现一个新的非功能性FUT1等位基因，其在nt36-400位缺失33个碱基，引起氨基酸序列框码移位，不能编码有活性的H抗原转移酶。     

反定型A型试剂细胞中获得性类B抗原原因分析

目的分析A型试剂红细胞出现获得性类B抗原的原因。方法使用血型血清学及基因分型技术鉴定混合A型试剂细胞中3个样本的ABO血型,确定有无未被检出的B亚型供者。用定型血清酸化试验、半乳糖胺中和试验,及3个不同批号的单克隆抗-B和人源抗-B定型试剂鉴定获得性类B抗原。结果送检A型试剂红细胞经证实为标准A型,未混有B型红细胞。发现A型试剂红细胞和正常B型红细胞在酸化后,以及半乳糖胺中和后与抗-B反应有显著差异,且被检A型试剂红细胞与不同批号的单克隆抗-B均不反应,而和人源抗-B定型试剂呈2+凝集反应。结论ABO反定型的误判因A型试剂红细胞存在获得性类B抗原引起,其可能因制作或贮存时污染所致。