抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析

目的 :对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析。方法 :采用细胞ELISA ,免疫组化 ,DNA序列测定和计算机分析方法 ,对 5个单克隆噬菌体抗体 (CH2 73,CH2 0 5 ,CH2 0 9,CHA12 ,CH72 3)进行初步鉴定和序列分析。结果 :5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应 ,也与人正常肝细胞有弱阳性反应 ,但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应。细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性。大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应 ,而不与正常大肠组织反应。测序结果为CH2 73ScFv全长 732bp ;V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker V1 13 JL2 ,GenBank序号为AY0 2 8777和AY0 2 8996 ;CH2 0 5全长 36 6bp ,V ,D ,J分别VH1 4 6 D6 13 JH3,GenBank序号为AF35 936 5 ;CH2 0 9,CHA12和CH72 3的ScFv基因完全相同 ,全长 72 3bp ,其VH DH JH与CH2 73ScFv基因中的VH DH JH 完全一致 ,V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker L2 Jκ2 ,GenBank序号为AF36 3774。结论 :噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性 ,为进一步开发临床应用人源抗肿瘤抗体和小分子抗体片段奠定基础     

加强和重视颅脑创伤的救治工作

近十年来,我国颅脑创伤患者呈急剧上升的趋势,据早年统计,我国每年发病率约为1‰,绝对数量可达到100万人左右,其中重型颅脑创伤患者为18%~20%，造成的直接经济损失超过200亿元以上[1].     

脂质体载体法转染FPRL1基因到HEK293细胞及其鉴定

目的验证脂质体载体法将FPRL1基因有效转染到HEK293细胞.方法G418筛选,RT-PCR和趋化试验.结果用脂质体载体法将FPRL1基因转染HEK293细胞,G418筛选,3周形成集落状细胞克隆;RT-PCR以FPRL1特异性引物扩增,凝胶电泳可见1条约700 bp的目的片段,对照组为阴性;趋化实验显示HEK293/FPRL1细胞在一定浓度的fMLP的刺激下有趋化活性,而HEK293细胞无反应.结论初步证实脂质体载体法能有效地将FPRL1基因导入HEK293细胞,且FPRL1在细胞中有表达.     

D-二聚体在创伤后颅内进展性出血性损伤中的变化及意义

目的探讨急性颅脑创伤后血浆D-二聚体变化及其与颅内进展性出血性损伤（PHI）的关系。方法回顾性分析108例颅脑创伤患者（PHI组48例,非PHI组60例）的临床资料,比较不同性别、年龄、受伤至首次CT检查时间、格拉斯哥昏迷评分、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆D-二聚体浓度对PHI发生的影响;Logistic回归分析PHI发生的危险因素;受试者工作特征（ROC）曲线计算血浆D-二聚体浓度与PHI发生的关系。结果PHI组的D-二聚体浓度为（7．08±3．87）mg／L,非PHI组为（4．34±3．21）mg／L,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。Logistic多元回归分析显示,受伤至首次CT检查时间和D-二聚体浓度与PHI的发生有关（分别为OR=0．407,95％CI：0．132—0．825,P=0．018和OR=1．254．95％CI：0．980～1．374,P=0．021）。ROC曲线推算D-二聚体浓度的最佳临界值为4．05mg／L,此时灵敏度和特异度分别为79％和70％,大于此值PHI的发生率达74,1％。结论颅脑外伤后血浆D-二聚体的水平可作为PHI发生的一个预判指标,结合影像学检查及其他相关临床因素分析可以更好地预判和及时诊断颅脑创伤后PHI的发毕。     

2O72例颅脑创伤患者用血状况调查

目的 掌握华东六省一市颅脑创伤(TBI)患者用血状况,为临床合理输血和及时救治患者提供理论依据.方法 组织华东六省一市77家医院神经外科医生对经治的14 948例颅脑创伤患者严格填写<颅脑创伤流行病学调查表>,收集2004年颅脑创伤住院患者输血与疾病的诊断、治疗及预后等相关因素的信息,获得的数据用SPSS13.0进行统计分析.结果 14 948例患者中经输血治疗2 072例,其中男性1 663例(80.26%),女性409例(19.74%),平均年龄(41.56±17.36)岁,15～44岁的占56.00%.平均每人输血1 114.03ml,54%的患者输血量在400～800 ml.术中输血(70.08%)和失血性休克(23.75%)为输血主要原因.合并伤越重、颅内受损越重、颅脑手术越复杂者输血概率越大;颅脑损伤程度越重,输血量越多(Χ2=103.44,P＜0.005);输血越多,引起感染等并发症的概率越大(Χ2=1 593.98,P＜0.001),预后越差(Χ2=62.42,P＜0.005).结论 对颅脑患者早期应积极控制出血性休克,预防各种感染、休克等并发症,术中严格控制出血,术后及时纠正贫血.     

己酮可可碱对小鼠急性脑缺血的保护作用研究

目的　研究己酮可可碱 (PentoxifyllinePTX)对急性脑缺血所致小鼠大脑功能改变的保护作用。 方法　采用双侧颈总动脉不完全和完全结扎法及小鼠快速断头法 ,观察小鼠在急性脑缺血时的所产生的神经症状、存活时间和脑细胞的改变及己酮可可碱 (PTX)的保护作用。结果　 2 5、5 0mg·kg -1的PTX可以显著减少急性不完全性脑缺血致小鼠神经症状的发生 ,减少小鼠大脑细胞的坏死百分率 ;可以显著延长急性完全性脑缺血小鼠断头张口喘气时间并能增加小鼠耐缺氧的存活时间。结论　PTX对小鼠急性完全和不完全性脑缺血具有保护作用。     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究 Ⅰ.具有复制能力野生型反转录病毒检测

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗过程中具有复制能力野生型反转录病毒（RCR）。方法：RCR检测主要方法有：DNA聚合酶链式反应（PCR），反转录PCR（RT／PCR），Southern杂交以及neo基因和lacZ基因的补救分析。结果：建立了RCR的检测系统，从DNA水平、RNA水平和病毒活体水平对产HSV－TK病毒包装细胞（TK／VPC），C6转TK基因细胞和实验动物血液可能存在的RCR野生型病毒进行检测，结果均没有检测到野生型反转录病毒。结论：采用的反转录病毒基因转移系统没有产生野生型病毒，为临床试验的安全进行提供了保证。     

腺病毒载体基因转移系统的建立及其在脑肿瘤中的高效表达

构建了含有CMV启动子调控的HSV－tk基因的重组质粒pAdCMVtk，将其与缺陷型腺病毒Ad5大框架pJM17一起共转染病毒包装细胞293细胞，获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVtk，以其感染大鼠C5脑胶质瘤细胞后用PCR方法证实HSV-tk基因能被腺病毒有效转入靶细胞。用带报告基因LacZ的腺病毒感染大鼠C5脑胶质瘤细胞，经x-gal染色，证明腺病毒载体的基因转移效率可达100％。     

腺病毒介导的HSV—tk基因治疗大鼠脑胶质瘤实验研究

目的：带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的重组腺病毒（ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ）结合核苷类似物（ＮＡ）治疗大鼠Ｃ６脑胶质瘤。方法：用Ｘ－ｇａｌ染色测定ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ转染大鼠Ｃ６胶质瘤细胞的效率。用ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ／ＡＣＶ、ＧＣＶ离体及活体治疗大鼠Ｃ６胶质瘤。结果：ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ感染Ｃ６细胞效率达１００％，ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ感染Ｃ６细胞，在病毒感染复数为１０００时，ＧＣＶ和ＡＣＶ半致死剂量分别为３μｇ／ｍｌ和２０μｇ／ｍｌ，Ａｄ－ＨＣＭＶ－ｔｋ／ＡＣＶ治疗大鼠Ｃ６胶质瘤模型，大鼠生存期超过９０天，而对照组分别为１７．０±１．６天（生理盐水组）、１４．５±１．３天（ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ组），Ｐ＜０．００１。结论：重组腺病毒对靶细胞感染效率可达１００％，ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ用ＧＣＶ的杀伤Ｃ６胶质瘤细胞比ＡＣＶ强，而ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ用腺病毒介导治疗大鼠脑肿瘤疗效显著。