腺相关病毒与变异体DHFR和GFP重组载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

全身化疗仍然是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,而化疗对骨髓造血的抑制严重影响治疗肿瘤的疗效。将耐药基因导入造血干细胞可以保护机体的造血,从而提高对化疗敏感肿瘤患者对化疗药物的耐受性,增大化疗药物的剂量,缩短化疗间隔时间提高疗效。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)能稳定整合宿主细胞染色体中、感染静止期细胞和无致病性等优点,已成为基因治疗中的热点载体。变异体二氢     

中大剂量阿糖胞苷强化巩固治疗急性髓系白血病15例

目的 观察中大剂量阿糖胞苷作为急性髓系白血病(AML)缓解后强化治疗方案的临床疗效及其对自体外周造血干细胞采集及造血重建的影响;观察染色体核型分析结果 与临床预后的关系.方法 15例AML患者缓解后予中大剂量阿糖胞苷强化治疗;此后有3例患者接受异基因造血干细胞移植(allo-SCT),7例接受自体外周造血干细胞移植(APBSCT).结果 2例在CR1期行非血缘allo-SCT,日前均无病生存,1例在复发期行单倍型allo-SCT,在+110天复发;7例行APBSCT的患者中3例无病生存,另外4例复发;未行移植的5例患者均死亡.7例接受APBSCT的患者采集的中位MNC 7.33×108/kg,中位CD+34细胞6.9×106/kg,中性粒细胞>0.5×109/L的中位时间+11天,血小板>20×109/L的中位时间+13大.具有预后良好核型的患者3例,2例无病生存;具有预后不良核型的患者4例,2例行allo-SCT,1例行APBSCT,目前均无病生存,另外1例死亡;具有预后中等核型的患者共6例,其中1例联合APBSCT,目前无病生存,其余患者均死亡.结论 中大剂量阿糖胞苷不联合造血干细胞移植作为AML缓解后强化治疗患者复发率较高,具有预后中等和不良染色体核型的患者行allo-SCT可能改善预后;采用中大剂量阿糖胞苷巩固强化治疗的患者均能采集到足够的造血干细胞并能造血重建.     

我院人血白蛋白的临床应用分析

目的：了解我院人血白蛋白的临床应用情况,评价其使用的合理性。方法：采用回顾性调查方法,对我院2007-06～12所有使用白蛋白的住院病人的性别、年龄、临床诊断、住院科室、人血白蛋白的应用指征、用法、用量、用药起止时间,实验室检查中白蛋白的浓度等内容进行统计、分析。结果：38例患者中,以普通外科、消化内科、干部内分泌科分布较多。联用药品种类多为抗菌药、扩容药、利尿药等。主要用于癌症、肝硬化、低蛋白血症等。结论：我院人血白蛋白的应用还存在一些误区,建议医生应严格掌握白蛋白使用适应证,谨慎用药。     

慢性粒细胞白血病的信号传导及对策

信号传导在细胞增殖和分化中扮演着重要的角色,信号传导链中任何一种蛋白出现异常均会对细胞产生重大的影响。细胞信号传导异常是肿瘤发生的重要机制。慢性粒细胞白血病CML ABLBCR融合蛋白是一典型的酪氨酸激酶,能够激活胞浆内许多蛋白酶,对胞内信号的传导产生重要的影响,是CML发病的重要机制之一,而针对此机制而设计的治疗方法正日益受到重视。     

替米沙坦对动脉粥样硬化的作用及高血压的疗效观察

目的探讨替米沙坦对动脉粥样硬化及高血压的治疗作用。方法 2008年1月-2010年12月临床确诊为高血压合并动脉粥样硬化56例患者为观察对象,结合临床资料分析替米沙坦药物的诊治方案及进展。结果治疗后8周,患者血压值、BMI指数、动脉硬化指数及临床症状改善均好于治疗前(P<0.05)。结论替米沙坦对动脉粥样硬化及高血压有很好的治疗效果,能显著降低血压,延缓动脉硬化的发生,具有显著临床意义。     

二氢生物喋呤还原酶减轻脂肪酸诱导的细胞凋亡的机制研究

目的 探讨二氢生物喋呤还原酶(QDPR)高表达对脂肪酸(PA)诱导的细胞凋亡的作用.方法 HEK293T细胞转染实验分为A、B、C 3组,A组为空载体转染组,B组为经过PA刺激的空载体转染组,C组为经过PA刺激的QDPR重组质粒转染组.首先将空载体及构建的QDPR重组质粒分别转染至HEK293T细胞,培养24 h后采用0. 5 mmol/L PA刺激上述细胞,将没有经过PA刺激的空载体组细胞、PA刺激的空载体组细胞和PA刺激QDPR重组质粒组细胞三组细胞继续培养24 h后收集细胞.采用四氢生物喋呤(BH4)和活性氧簇(ROS)检测试剂盒检测3组BH4和ROS的生成量;采用Western blot法检测3组凋亡相关蛋白Beclin 1 、Caspase 3和Beclin 2的表达.结果 ①转染细胞后,QD-PR融合蛋白成功表达;②与A组相比,B组的BH4生成量差异无统计学意义;与B组相比,C组BH4生成量明显增多(P<0.05);③与A组相比,B组的ROS生成量明显增加(P<0.05);与B组相比,C组ROS生成量明显下降(P<0. 05);④Western blot结果显示:与A组相比,B组经过PA刺激后细胞中Beclin 1和Caspase 3表达水平显著上调(P< 0.05),Beclin 2表达水平下降(P<0. 05);QDPR过表达后C组Beclin 1和Caspase 3表达水平显著下调(P<0. 05) , Beclin 2表达水平升高(P<0.05).结论 QDPR高表达后,可以刺激BH4的生成,同时能降低PA诱导的ROS的生成量,还可以降低细胞凋亡相关蛋白Beclin 1和Caspase 3的表达,增强抗凋亡蛋白Beclin 2的表达,提示其可能通过调节 BH4和ROS含量影响细胞凋亡.     

Exendin-4 通过PI3K/Akt 信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

目的探讨Exendin-4 促进脂肪来源干细胞（ADSCs）旁分泌细胞因子的机制。方法混合酶消化法提取和培养SD大鼠
腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4 处理后的第4 代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、
20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12 h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的
表达变化。Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用。同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测
Akt 通路阻断后Exendin-4 对于旁分泌蛋白的影响。结果分离培养的ADSCs 高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、
CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点。Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表
型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs 在体外增殖（P<0.05）。不同浓度Exendin-4 处理ADSCs 12 h 后,旁分泌蛋白bFGF、
VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/L Ex-4处理12 h可能为最佳处理浓度（P<0.05）。Western blotting和qPCR
提示Exendin-4 能够显著提高胞内Akt 的磷酸化水平,而给予LY-294002 后,磷酸化Akt 表达减弱,同时ADSCs培养液上清中
bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低（P<0.05）。结论短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖
能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1。10 nm/L可能为Exendin-4 最适促旁分泌浓
度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导。
     

难治复发性多发性骨髓瘤特点分析

目的 探讨难治复发性多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者临床特点及预后因素。方法 回顾性分析初治并随访为难治复发的MM患者53例,对他们的临床表现及预后进行分析。并比较进展时间(time to progression,TTP)＜1年和≥1年两组患者预后。结果 53例难治复发的MM患者14例存活,25例死亡,14例失访。初诊时骨痛患者占78.6%,进展时为48.2%。临床Durie-salmon分期多为Ⅲ期,占89.3%。53例患者中10例合并髓外浆细胞侵犯,1例合并浆细胞白血病。53例患者中位进展时为16.0个月,进展后中位随访时间为6.0个月,中位随访时间为29.5个月。21例患者进展时间＜1年,32例≥1年。两组中位随访时间分别为11.0个月,44.0个月,进展后中位随访时间分别为4.0个月,12.0个月。结论 MM患者治疗过程中出现骨痛多提示疾病进展;骨髓浆细胞含量较高的患者预后较差;进展时间较早患者其进展后生存时间也相对较短。     

重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体转染293细胞和CD34^＋细胞

目的研究重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染293细胞(人胚肾细胞)和人CD34^ 细胞后绿色荧光蛋白的表达情况。方法用CS-3000血细胞分离机分离骨髓单个核细胞，免疫磁性分离仪纯化CD34^ 细胞，重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染两种细胞，并通过荧光显微镜、流式细胞仪对绿色荧光蛋白的表达进行分析。结果荧光显微镜下两种细胞均可见绿色荧光蛋白表达，流式细胞仪于一定时间内检测293细胞的基因转导效率最高为32．8％，CD34^ 细胞的基因转导效率最高为25％．在所观察的时间内，转染率呈先升高后降低趋势。结论重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体能转染293和CD34^ 细胞，绿色荧光蛋白基因可作为良好的报告基因，为将来的干细胞基因治疗打下良好基础。     

氯吡格雷在急性冠状动脉综合征早期应用的临床研究

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)早期应用氯吡格雷75mg/d及氯吡格雷75mg/d加阿司匹林100mg/d的有效性及安全性.方法:将202例ACS患者随机单盲分为3组.A组(阿司匹林组)67例,首剂150mg/d,而后100mg/d;B组(氯吡格雷组)68例,首剂300mg/d,而后75gm/d;C组(氯吡格雷加阿司匹林组)67例,阿司匹林100mg/d,加氯吡格雷75mg/d,随访2年,观察住院期间及随访期间心脑血管事件发生情况,抗炎症因子,改善心功能及减少颈动脉内膜-中层厚度(IMT)作用、药物不良反应.结果:3组住院期间及随访2年中均能降低心脑事件发生,但住院期间反复发作心绞痛(AP),心律失常,心力衰竭(HF)发生危险C组优于B组(但P＞0.05),优于A组(P＜0.05),而B组优于A组(但P＞0.05);随访2年中,复发性AP,再发生非致死性心肌梗死(MI),心律失常、HF、需做经皮腔内冠状动脉介入术/冠脉旁路移植术(PCI/CABG)、因缺血发作需再住院等,C组明显比A组减少(P＜0.05).同时,3组治疗6周后,P-选择素、血纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、D-二聚体、纤维蛋白原(FG)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、均较治疗前明显降低(P＜0.01).而C组在降低上述5项炎症物作用优于B组(P＜0.05),优于A组(P＜0.05);B组作用优于A组,但P＞0.05.3组治疗6周后,均较治疗前明显改善左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS),二尖瓣快速充盈期和心房收缩期血流速度比(E/A)(3组P均＜0.01),上述3项指标改善C组优于A组(P＜0.05)和B组(P＞0.05),B组优于A组(但P＞0.05);同时3组治疗1年和2年,均较治疗前明显减少颈内动脉(ICA)的IMT和颈总动脉(CCA)的IMT(P均＜0.05～0.01),上述作用C组优于A组(P＜0.05)和B组(P＜0.05),而B组优于A组(但P＞0.05).3组不良反应均轻微.结论:ACS早期应用氯吡格雷75mg/d或氯吡格雷75mg/d加阿司匹林100mg/d且一直用2年,能明显减少住院和随访期心脑事件发生,明显抑制炎症因子,改善收缩/舒张功能,减少ICA/CCAIMT,且安全耐受性好,值得临床推广应用.