沙利度胺治疗多发性骨髓瘤及其作用机制的研究进展

沙利度胺 (thalidomide)又名反应停、酞胺哌啶酮 ,是一种谷氨酸衍生物。 2 0世纪 60年代中期反应停引起了医学史上最大的意外———一定比例口服反应停的孕妇生产了畸形胎儿 ,因此 ,一定时期内反应停几乎退出了其应用的历史舞台。但随着科学的不断进步 ,人们发现反应停在治疗癌     

多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2表达载体的构建

目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体.方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析.结果:获得阳性重组质粒,读框没有发生改变.结论:成功获得DAZAP2的原核表达重组质粒,可以用于下一步实验.     

东方田鼠天然抗日本血吸虫感染相关蛋白质的分离和纯化

目的从东方田鼠血清中分离纯化与其天然抗日本血吸虫感染特性相关的蛋白质。方法以分子筛色谱及高效液相色谱技术对东方田鼠血清蛋白质进行分离和纯化,以体外日本血吸虫童虫杀伤实验确定具有抗日本血吸虫童虫活性蛋白质,并对活性蛋白质进行N端氨基酸序列测定,通过检索蛋白质数据库以确定活性蛋白质的性质和种类。结果利用分子筛色谱及高效液相色谱技术从东方田鼠血清中获得了三个对日本血吸虫童虫具有明显杀伤活性的蛋白质组份1-1、4-1、6-3,经对4-1的N末端氨基酸序列进行测定,其序列为DAHKSEIAHR,检索蛋白质数据库,该蛋白质为白蛋白样蛋白质,但与人或其它动物的白蛋白进行比较,存在较大程度的氨基酸残基变。结论东方田鼠血清中的白蛋白是东方田鼠天然抗日本血吸虫感染的重要效应分子。     

基于激光解析／离子化-飞行时间质谱技术的中药阿胶蛋白质组分析

目的:应用激光解析/离子化-飞行时间质谱技术对传统中药阿胶蛋白/肽成分进行蛋白质组初步分析,建立阿胶蛋白质质量指纹图。方法:实验于2004-06/2005-03在湖南中医药大学蛋白质组学实验室完成。采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得阿胶水溶性蛋白/肽,采用Ciphergen BiosystemsInc.ProteinChipRBiology System(美国PBSⅡ )及配套的NP10芯片、激光解析/离子化-飞行时间质谱技术,分析阿胶Mr1500～13000区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量。结果:Mr2000～4000区间显示4个相对分子质量峰,可能是2种肽;Mr4000～5000区间显示8个相对分子质量峰,可能为2种肽;Mr5000～5500区间显示16个相对分子质量峰,约为3种肽;Mr5500￣6200区间无峰;Mr8100～8200区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种肽;Mr11200～11400区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种蛋白质。不同质量浓度稳定获得的有意义蛋白/肽共计9个。不同相对分子质量肽之间差分别提示可能为丙氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸残基相对分子质量。结论:通过分析,可以形成阿胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为阿胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证阿胶功能相关活性蛋白质/肽组分提供可靠信息。     

东方田鼠血清组分对日本血吸虫童虫的体外杀伤力

目的 探讨东方田鼠血清不同组分对日本血吸虫童虫的杀伤力，以期发现东方田鼠血清中参与其天然抗日本血吸虫的相关蛋白质。 方法 以离子交换柱层析及分子筛柱层析技术对东方田鼠血清蛋白质进行分离，将所得血清不同组分加入体外培养的2日龄日本血吸虫童虫中（100±20条/孔），计算童虫死亡率以判断血清不同组分对童虫的杀伤力。 结果 从东方田鼠血清分离出58个蛋白组分，其中6个组分具有明显的杀伤日本血吸虫童虫的活性，童虫死亡率均在37% 以上，特别是组分18.1的童虫死亡率达87.5%，而阴性对照组童虫死亡率为25.0%（P＜0.01）。 结论 东方田鼠血清中某些蛋白质参与其抗日本血吸虫的过程。     

日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析

目的为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。方法制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌(雄)成虫抗原、虫卵抗原，采用Western blot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原(LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应，分析其交叉性。结果LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原，且所识别的抗原成分有明显差异，雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有3条和2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别，而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。结论在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中，LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体，而雄虫次之。     

人鼻咽癌细胞株和组织中Kappa样蛋白的检测

目的：为进一步研究免疫球蛋白Ｋａｐｐａ基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞中的表达,对ＮＰＣ细胞株ＣＮＥ２,ＮＰＣ活检标本及石蜡切片中的Ｋａｐａ样蛋白进行了检测。方法：从ＮＰＣ细胞株、ＮＰＣ活检标本得到蛋白抽提物,用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法进行纱－抗生物素蛋白与生物素－辣根过氧物酶系统放大,然后再用ＥＣＬ化学发光试剂盒进行检测,ＮＰＣ石蜡切片用免疫组化进行检测。结果：ＮＰＣ株ＣＮＥ２中检测到和３１Ｋｄ的Ｋａ     

中国HIV感染者VPR序列变异对细胞周期和致凋亡作用的影响 FREE

目的研究带有不同变异位点的人免疫缺陷病毒1型（HIV 1）vpr基因对感染细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡的机制间的可能关系。方法以14个带有HIV 1 vpr基因片段的pcDNA3.1（+）真核表达载体构建重组质粒,将其转染Hela细胞,并设立保守株vpr基因转染细胞、突变株vpr FS基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照,经逆转录多聚酶链式反应（RT PCR）检测目的基因转染成功后,Pi染色,用流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率。结果14个带有不同变异位点HIV 1 vpr基因片段的Hela细胞经流式细胞仪检测,显示出不同的致细胞周期阻滞和致细胞凋亡的能力。发现转染保守片段HIV 1 vpr的Hela细胞,其细胞周期出现G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高,但转染vpr C末端截断的vpr FS片段的细胞、空载体pcDNA3.1（+）转染细胞和未转染的Hela细胞无此现象。转染了HIV 1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V、85P、86G、94G突变的片段,较vpr保守片段致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降。初步发现vpr诱导G2期阻滞百分率越高,其所致凋亡率亦越高。结论HIV 1vpr基因有明显的致感染细胞G2周期阻滞和致细胞凋亡的作用,但vpr C末端截断的vpr FS片段无此功能。说明中国感染者HIV 1 vpr基因表达蛋白的70V、85P、86G、94G位点突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降。vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关,提示两者的发生机制可能有一定的关联。本研究为进一步探讨HIV 1致病机制和探索可能的基因干预措施打下了基础。     

中西药联合治疗龟头包皮炎90例报告

作者自1993年以来,应用纯天然中药制剂“天霸克毒王”与西药联合治疗90例龟头包皮炎患者,疗效良好,报告如下: 临床资料 一、一般资料:1.天霸克毒王 西药治疗组:本组共治疗我院病例90例,最大45岁。最小17岁,病程最长半年,最短1周,90例病人中,81例有不洁性交史。2.西药治疗组(对照组):46例,最大43岁,最小18岁,病程最长8个月,最短1周,病人均有不洁性交史。 二、临床表现:1.症状:局部瘙痒或疼痛,摩擦后明显,部份病人有疲乏感。2.体征:多数病人龟头或包皮粘膜有水肿红斑,糜烂及渗出。感染念珠菌者,表现为红斑,皮损表面光滑,边缘轻度脱屑,并有丘疱疹和小脓疱;感染滴虫者,龟头起丘疹和红斑,红斑上有针头至粟粒大水泡,互相融合。局部炎症显著者伴有低热     

Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究

目的探讨Tet调控下的自杀基因HSVtk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pRevTRE／HSVtk，通过磷酸钙共沉淀法，分别将pRevTRE／HSVtk和pRevTet-On导入乳腺癌细胞株MCF-7。以RT—PCR法检测不同Dox浓度下转染乳腺癌细胞中HSVtk基因的表达，MTT法检测细胞生长抑制率，通过检测混合细胞生长克隆来评价Tet调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素（Doxcycline，Dox）诱导、表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF／TRE／tk／Tet—On。当Ganciclovir（GCV）及Dox浓度增加时，细胞存活率下降。MCF／TRE／tk／Tet—On在总细胞中的比例〉10％时，有明显的旁观者效应。结论在Tet—On调控下，导入乳腺癌细胞中的HSVtk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质，并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。