基于激光解析/离子化飞行时间质谱技术的中药龟甲胶蛋白质组分析

目的对传统中药龟甲胶蛋白质、肽成分进行组蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐法获得龟甲胶蛋白质成分,美国Ciphergen Biosystems Inc.ProteinChip Biology System(PBSⅡ )及配套的NP10芯片、激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS,Surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flightmass spectro metry)技术,分析了龟甲胶1 500～13 000 Da区间蛋白质、肽分布及其分子量。结果龟甲胶蛋白质/肽质量1 500～3 000区间显示1个分子量峰;4 800～5 400显示3个分子量峰,其中相对分子量分别相差410.8、151.7;8 000～8 600区间显示1个分子量峰;10 000～13 000区间显示1个分子量峰。共获得6个肽分子量峰。结论通过分析,可以形成龟甲胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为龟甲胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证龟甲胶功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。     

PCR法用于MSH2基因突变的检测

目的：介绍简便、快速、准确的针对一种MSH2新突变基因的诊断方法。方法：根据该MSH2基因突变的位点和特征,设计突变位点特异性引物,进行PCR扩增,电泳检测PCR产物,从而鉴定出该基因突变的携带者或非携带者。结果：用该方法成功检测出遗传性非息肉型直结肠癌家系中的表型正常的MSH2基因新突变携带者。结论：该方法简便、快速、准确又节省成本,可应用于MSH2基因突变的检测。     

分泌高滴度重组人糖皮质激素β受体正义和反义cDNA逆转录病毒细胞系的建立

目的：建立分泌重组人糖皮质激素β受体cDNA的逆转录病毒的细胞系。方法：脂质体介导含人糖皮质激素β受体正义和反义全长cDNA的重组逆病毒质粒分别转染包装细胞PA317，经G418筛选抗性克隆。结果：细胞培养上清液的RT-PCR联合序列分析表明G418抗性PA317细胞克隆能稳定合成并分泌相应的重组病毒颗粒；NIH3T3细胞测定的正、反义cDNA重组病毒滴度分别为2×105 CFU/ml和1.8×105 CFU/ml。结论：成功建立了能分别产生重组hGRβ正义和反义cDNA逆转录病毒的高滴度细胞系，为后续研究工作打下坚实基础。     

抑制消减杂交(SSH)技术及在克隆基因方面的最新进展

基因表达的变化是调控细胞生命活动的核心机制 ,分离并克隆差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点 ,亦是功能基因组学研究的重要内容之一。抑制消减杂交技术以其低假阳性率、高灵敏度等优点 ,被广泛应用于生物及医学领域中差异表达基因的克隆     

5′和3′末端快速扩增法克隆多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2

目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与NCBI核酸数据库进行比对。结果该序列全长cDNA长度为1913bp,登陆号为AY430097,与来源于人睾丸cDNA文库的序列DAZAP2同源性高达99%以上。该序列具有较短的5′非翻译区及长的3′非翻译区,开放阅读框序列从第84位碱基至590位碱基,具有poly(A)尾。结论利用RACE法,从骨髓单个核细胞中成功克隆了DAZAP2全长cDNA。     

以蛋白质芯片为中药蛋白质/肽相互作用载体分析中药地龙生干品和炮制品的生物学特征

背景：激光解析\离子化-飞行时间质谱技术为以蛋白质/肽为主要成分的中药蛋白质组学研究提供了重要的技术平台。 目的：对传统中药地龙蛋白/肽成分进行蛋白质组分析。 设计、时间及地点：对比实验,于2004-12/2005-10在中南大学生物科学与技术学院分子生物学实验中心完成。 材料：生干地龙和炮制品（沙烫）地龙，均购于湖南长沙九芝集团芝林大药房，源产地湖南。 方法：以蛋白质芯片为载体，激光解析\离子化-飞行时间质谱法获取两者所含蛋白质/肽成分信息。 主要观察指标：两种地龙Mr 1 500~13 000 区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量。 结果：共获得29个蛋白质/肽相对分子质量峰，其中生干品地龙17个有意义峰，炮制品地龙获取12个峰；多个相邻蛋白质峰之间质量相差一个氨基酸残基。并且生地龙与炮地龙有多组相对分子质量分别极为相近，推测可能为相同的肽段。 结论：应用激光解析\离子化-飞行时间质谱技术可以形成生品地龙及炮地龙蛋白质/肽成分质量指纹图，可作为地龙数字化质控标准,并为进一步分离、纯化及验证中药地龙功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。     

人胚鼻咽上皮细胞培养、化学转化及鼻咽癌恶性转化基因的克隆

鼻咽癌是我国南方和东南亚国家相当高发的恶性肿瘤。湖南省鼻咽癌的死亡率在全国列第四位,严重危害人民的生命健康。有效地防治鼻咽癌已提到十分突出的位置。但迄今为止,鼻咽癌的病因发病机理尚不清楚。人们试图从流行病学、病理学、分子生物学等方面进行探讨,也取得了一些有意义的研究结果,但未能系统、     

Na~ 、K~ -ATP酶的作用特征和影响因素

Na~ 、K~ -ATP酶广泛存在于多种细胞的细胞膜上。现已证明,纯化的Na~ 、K~ -ATP酶,如果重组入含有磷脂的脂质体,有催化ATP水解和运输Na~ 、K~ 的能力。这些重组实验,为Na~ 、K~ -ATP酶就是Na~ 泵提供了直接的证据。Na~ 、K~ -ATP酶催化ATP水解的同时,能对抗细胞膜两侧的电化学梯     

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的增殖及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、荧光染色法、流式细胞仪（FCM）检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL-60细胞的影响。结果：雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖,降低肿瘤细胞的存活率,其半数细胞抑制剂量( IC50 )为5.0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2/M期（P<0.05）。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞,且凋亡细胞百分率显著上升(P<0.05),凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论：雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖并促进细胞凋亡。     

菝葜皂甙元对Na~ ,K~ -ATP酶抑制的机理探讨

中药知母是一种清热泻火药,临床上主要用于阴虚内热的患者。陈锐群等认为,阴虚内热主要是体内Na~ ,K~ -ATP酶活性过高的一种表现,知母中的有效成分菝葜皂甙元(Sarsa-sapogenin)能抑制此酶活性,从而使体内产热下降。