类鼻疽伯克霍尔德菌经鼻感染BALB/c小鼠模型的构建与评价

目的 构建类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)经鼻感染BALB/c小鼠动物模型,为后续类鼻疽菌的毒力研究和急性类鼻疽的致病机制研究提供可靠的动物模型。方法 采用经鼻主动吸入的感染途径,通过大体解剖、组织病理和组织匀浆计数菌落等方法观察类鼻疽伯克霍尔德菌感染小鼠的病理生理反应、脏器病理损伤和细菌定植情况,分析急性类鼻疽感染小鼠模型的生物学特征,并比较致病性类鼻疽临床株与非致病性类鼻疽泰国株(伯克霍尔德菌)感染BALB/c小鼠的不同表现。结果 急性类鼻疽菌经鼻感染模型中,BALB/c小鼠死亡多集中在感染后第3到第5天,3×10⁵～3×10⁶CFU可作为急性类鼻疽BALB/c小鼠病死模型的合适攻毒剂量,而半数致死量约在3×10⁴～3×10⁵CFU。大体解剖和组织HE染色均可见肺脏、脾脏和肝脏组织中形成脓肿或坏死病灶,其中在脾脏最明显,并与攻毒剂量呈正相关。类鼻疽菌感染的小鼠血液、肺脏、脾脏及肝脏中均发现类鼻疽菌定植,且定植量与组织特异性有关,血液中分离到的活菌浓度...     

β淀粉样肽与HbcAg/MIR融合蛋白的免疫血清在AD转基因细胞模型中的生物效应

目的 研究β淀粉样肽(Aβ)与乙肝核心抗原主要免疫优势区(HbcAg/MIR)的融合蛋白(c-Aβ-c)在BL21/pET28原核表达体系的表达并进行腹腔内注射表达的融合蛋白免疫小鼠,检测免疫血清的免疫原性以及体外的生物学效应.方法 应用分子克隆技术构建原核表达质粒pET-28a/c-Aβ-c并进行c-Aβ-c融合基因在BL21菌的IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白,用纯化的c-Aβ-c融合蛋白腹腔注射免疫动物,ELASA检测其抗Aβ抗体效价,MTT法和流式细胞术检测它应用于Alzheimer's disease(AD)转基因细胞的生物效应.结果 表达的c-Aβ-c融合蛋白主要以包涵体形式存在于细菌的沉淀中,表达水平占细菌总蛋白量的30%以上.免疫小鼠血清中抗Aβ抗体效价达1∶16000,抗血清抑制了AD转基因细胞中Aβ的神经细胞毒性,明显降低了细胞凋亡的比率.结论 c-Aβ-c融合蛋白具有良好的Aβ免疫原性,其动物免疫血清有效抑制Aβ肽的细胞毒性.     

短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达

目的：探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site APP cleaving enzyme，BACE）的短干扰RNA（short interfering RNAs，siRNA）是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达，为阿尔茨海默病（AD）的治疗提供新的手段。方法：采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA（siBACE），随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN，通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE进行鉴定；制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株，用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果：成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论：成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达，为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。     

支架辅助的经皮腔内血管成型术治疗颅内段椎动脉狭窄二例

颅内椎基底动脉狭窄的预后很差，有很高的死亡率和致残率。回顾性的研究数据提示，即使在使用抗凝或者抗血小板药物的情况下，症状性的颅内段椎动脉和基底动脉狭窄患者的年卒中发生率分别是7．8％和10．7％，因此，颅内椎基底动脉狭窄必须得到积极治疗。由于材料研制的进展，支架可以被放置到细小、迂曲的血管中，支架辅助的经皮腔内血管成型术（Stent-assisted percutaneous transluminal angioplasty，STENT-PTA）已经用于治疗颅内动脉的狭窄，但是相关的报道都是小样本的初步临床研究，尚没有随机、双盲、对照的研究。我们对2例药物治疗无效的症状性颅内椎动脉狭窄患者的STENT-PTA治疗结果进行报道，并对STENT-PTA治疗颅内段椎动脉狭窄的疗效、并发症以及筛选和随访方法等问题作简要探讨。     

病毒载体介导BDNF基因表达在大鼠神经元AD模型中的作用

目的 探讨重组腺伴随病毒（rAAV）载体介导表达人脑源性神经营养因子（hBDNF）基因以及表达的hBDNF对β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的AD模型神经元保护效应的机制。方法 使用分子克隆技术克隆了hBDNF基因,并且构建了携带hBDNF基因的rAAV病毒载体（AAV-hBDNF）,使用病毒载体转染Aβ诱导损伤的海马神经元。使用MTT检测和流式细胞仪分析观察细胞凋亡变化,同时使用免疫细胞化学技术检测了BDNF蛋白以及Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,使用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]）i的变化。结果 结果显示重组病毒对培养的海马神经元进行了有效的转染,BDNF蛋白表达水平明显增高,表达的BDNF对Aβ诱导的神经元损伤有显著的保护效应,在BDNF治疗组表现出抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增高和有效地维持了[Ca^2＋]i平衡。结论 表达的BDNF通过抑制Aβ依赖的细胞内钙超载和增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,有效地保护神经元抵抗Aβ神经毒性引起的凋亡。     

加强综合管理 提高留学生教学质量

为了增加对外交流的机会,提高师资的综合素质,我院于1995年开始招收临床医学专业本科留学生,所有课程采用全英语教学。经过10年教学管理及教学实践,留学生管理人员、带课教师的综合素质及教学质量有了明显提高。     

p16基因转染对胰腺癌JF305细胞的抑制作用

目的 :探讨抑癌基因 p1 6对胰腺癌 JF30 5细胞的抑制作用。方法 :以L ipofectamine TM2 0 0 0脂质体介导 p1 6基因转染胰腺癌 JF30 5细胞 ,MTT法测定 OD值 ,计算细胞生长抑制率 ,描绘 p1 6基因转染后 JF30 5细胞增殖曲线。结果 :p1 6基因转染对JF30 5细胞具有明显抑制作用 ( t=4.0 6,P<0 .0 1 ) ,细胞抑制率为 2 6.85 % ,细胞增殖曲线较 JF30 5细胞明显降低。结论 :p1 6基因转染对胰腺癌 JF30 5细胞具有明显抑制作用。     

提高人体解剖学实验室管理水平的探索与实践

如何加强人体解剖学实验技术队伍的建设和实验室管理 ,是高等医学院校发展中必须面对的问题。了解人体解剖学实验室管理现状 ,分析存在问题 ,提出应对措施 ,使实验室管理工作与时俱进 ,必将促进教学质量和科研水平的提高     

大鼠苍白球乙酰胆碱酯酶阳性神经元的衰老变化——形态计量学研究

本研究结合组织化学和形态计量学方法,观察幼龄(3月龄)和老龄(24月龄)雄性大鼠苍白球内乙酰胆碱酯酶阳性(AChE-P)神经元的衰老变化。老龄苍白球AChE-P神经元的数量,比幼龄组减少约11.8％;幼龄阳性神经元的突起总长度是老龄组的1.4倍;但在老龄组中,约有8.6％阳性神经元的突起总长度,大于幼龄的平均突起总长度(232.1μm);老龄苍白球AChE-P神经元的灰度值,明显高于幼龄组,但约有6.8％老龄阳性神经元的灰度值低于幼龄的平均灰度值(117.8);老龄苍白球AChE-P神经元的截面积,比幼龄增大约9.2％。形态学观察发现,大部分老龄AChE-P神经元呈退行性改变,但有一部分老龄AChE-P神经元胞体增大,染色加深,突起茂密,分支增多。上述结果表明,苍白球内AChE活性的增龄性下降及其神经元的退行性改变,并不是在所有的AChE-P神经元中同步发生。从而提示,在衰老过程中,苍白球AChE-P神经元可能存在着一种与衰老机制密切相关的代偿机制。     

父母教养方式与儿童网络成瘾行为的关系

目的 :探讨父母教养方式与儿童网络成瘾心理行为的关系。　方法 :用父母养育方式评定量表 (EMBU) ,艾森克个性问卷 (EPQ)儿童版 ,Achenbach儿童行为量表 (CBCL)分别对 4 2名网络成瘾儿童及 4 2名正常儿童进行评定。　结果 :网络成瘾儿童的父母在教养方式上对孩子过于严厉 ,惩罚过多 ,而理解关心不够。在CBCL评定中 ,网络成瘾儿童在交往不良、不成熟、违纪等评分明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。　结论 :网络成瘾儿童父母教养方式存在缺陷 ,他们的孩子存在较多的心理行为问题