运用蛋白质指纹图谱技术建立系统性红斑狼疮诊断模式的研究

目的 运用蛋白质指纹图谱技术筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的特异性蛋白标志物,建立SLE疾病相关的蛋白质组学诊断模型.方法 联用弱阳离子磁珠与蛋白质芯片阅读仪绘制64例SLE患者组及168例对照组的血清蛋白质指纹图谱,用Biomarker Patterns Software 5.0(BPS)软件筛选特异性的血清蛋白标志物并建立SLE诊断模型.结果 在SLE患者组和对照组之间找到60个差异蛋白峰(P<0.05),其中28个蛋白峰在SLE患者表达增高,32个蛋白峰表达降低.由BPS软件筛选的4个蛋白标志物(质荷比为3376.02、4070.09、7770.45、28045.10)建立的诊断模型能很好的把SLE患者与其他自身免疫性疾病和健康对照者区分出来,经过盲法验证,其对SLE的诊断敏感性为78%,特异性为96%.结论 采用蛋白质指纹图谱技术能筛查识别出与SLE疾病相关的特异性血清蛋白标志物,由4个质荷比分别为3376.02、4070.09、7770.45和28045.1的SLE特异性血清蛋白标志物建立的SLE疾病诊断模型具有高敏感性及特异性.     

抗U1核糖核蛋白抗体在系统性硬化症诊治中的临床意义

目的探讨抗U1核糖核蛋白（U1RNP）抗体在系统性硬化症（SSc）诊治中的价值。方法前瞻性序贯纳入在北京协和医院入选欧洲抗风湿病联盟硬皮病试验研究组（EUSTAR）的131例中国汉族SSc患者,记录其临床表现、脏器损伤和实验室检查结果（包括抗U1RNP抗体的检测结果）,分析抗U1RNP抗体阳性组与阴性组临床特征及实验室指标的特点。结果131例SSc患者中含87例弥漫型SSc、36例局限型SSc、8例重叠综合征,抗U1RNP抗体阳性率为28．2％（37／131）。弥漫型SSc和局限型SSc的抗U1RNP抗体阳性率相近,分别为28．7％（25／87）和25．0％（9／36）,P=0．673。抗U1RNP抗体阳性者较阴性者易重叠系统性红斑狼疮,肺动脉高压和心脏受累发生率增加,白细胞和血小板计数减低（均P〈0．05）;而在皮肤硬化评分及关节炎、肌炎、肺间质病变发牛率上差异无统计学意义（均P〉0．05）。抗U1RNP抗体阴性的SSc有更高的抗DNA拓扑异构酶Ⅰ抗体检出率。结论抗U1RNP抗体是中国SSc患者的常见自身抗体,与其他自身抗体联合检测有助于SSc的诊断,对预测肺动脉高压、心脏和血液系统受累有重要价值。     

系统性硬化病合并原发性胆汁性肝硬化的临床分析及文献复习

目的 探讨系统性硬化病(SSc)合并原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床特征,提高对此重叠综合征的认识.方法 收集北京协和医院2005年4月至20l0年4月确诊为SSc合并PBC的病例资料,对符合条件的9例患者的临床表现、实验室检查和组织病理检查进行分析.同时进行文献复习,与国外资料进行比较.结果 ①9例患者中男性1例,女性8例,平均年龄(54±8)岁;以SSc起病者7例,以PBC起病者2例,二病发生间隔1～8年、平均(4.3±2.3)年.②弥漫型SSc(dcSSc)仅1例,而局限型SSc(lcSSc)8例(完全型CREST综合征2例,不完全型5例),8例有雷诺现象和食管运动功能障碍,并均以雷诺现象起病.有PBC临床表现者5例,亚临床型4例,胆管酶升高8例,2例行肝穿刺病理检查为PBC的Ⅰ和Ⅱ期.③抗核抗体均阳性,抗着丝点抗体(ACA)阳性8例,抗线粒体抗体(AMA)阳性9例,AMAM2阳性8例.④早期给予糖皮质激素和熊去氧胆酸治疗有效,3例因肺间质纤维化、肺动脉高压和肝硬化疗效欠佳.结论 SSc可以合并PBC,以lcSSc、尤其是CREST综合征多见,筛查ACA、AMA、AMA-M2可早期识别SSc合并PBC,早期干预有助改善预后.     

抗线粒体抗体M2亚型抗体三种检测方法的比较及其对原发性胆汁性肝硬化的诊断价值研究

目的 比较三种方法检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)抗体在原发性胆汁性肝硬化诊断中的应用价值.方法 分别用以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法;以三联体(BPO)为靶抗原的ELISA法;以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法检测原发性胆汁性肝硬化患者,自身免疫性疾病患者和健康体检者血清中的AMA-M2抗体.结果 以PDC为靶抗原的ELISA法测定AMA-M2抗体检出率(敏感性)达81.25%,特异性达97.15%;以BPO为靶抗原的ELISA法测定AMA-M2抗体检出率(敏感性)达88.54%,特异性达98.37%;以M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法测定AMA-M2抗体检出率(敏感性)达96.88%,特异性达97.15%.结论 包被有天然M2抗原和BPO融合蛋白这两种抗原联合制备的三联体检测AMA-M2抗体的阳性率最高,特异性达到97.15%,为原发性胆汁性脉硬化的诊断提供了简便、快速而有效的手段.     

联合检测炎症性肠病患者抗酿酒酵母细胞抗体和抗中性粒细胞抗体的临床意义

目的 探讨联合检测炎症性肠病(IBD)患者血清中抗酿酒酵母细胞抗体(ASCA)和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)对IBD诊断和鉴别诊断的应用价值.方法 用ELISA法和间接免疫荧光法分别测定159例IBD患者[溃疡性结肠炎(UC)97例,克罗恩病(CD)62例],167例主诉为腹痛、腹泻并除外IBD的患者和25名健康人血清中IgG型与IgA型ASCA和ANCA.结果 ASCA-IgA/IgG在CD组、UC组、疾病对照组和健康对照组中的阳性率分别为43.5%、14.4%、29.3%和0;CD组的阳性率显著高于UC组和疾病对照组(X2值分别为16.76、4.12,P分别<0.01、<0.05).ANCA在以上各组中的阳性率分别为8.1%、56.7%、4.8%和0;UC组中阳性率显著高于CD组和疾病对照组(X2值分别为38.08、90.47,P均<0.01);ASCA+/ANCA-组合诊断CD的敏感度、特异度、阳性预测值分别为40.3%,93.8%和80.6%;而ANCA+/ASCA-组合诊断UC的敏感度、特异度和阳性预测值分别为48.5%,98.4%和97.9%;ASCA在手术治疗与未手术治疗CD患者中的阳性率差异具有统计学意义(P=0.03).结论 ASCA或ANCA单项检测不能有效的筛选IBD患者,但2项指标联合检测有助于对UC和CD进行鉴别诊断.同时检测IgA型和IgG型ASCA可提高CD诊断的敏感度.中国人群中ASCA阳性可能与手术治疗相关.     

抗中性粒细胞胞浆抗体间接免疫荧光法检测现状调查

目的通过抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)检测判读网络培训系统注册用户的问卷调查,了解我国ANCA间接免疫荧光法检测现状。方法中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员通过网络形式向我国风湿免疫病诊疗领域工作的人员发放问卷调查通知。自愿参与者在指定时间内通过IIF-ANCA荧光判读培训认证项目网站注册并填写相关信息。收集整理注册人员填报的各自所在实验室IIF-ANCA检测相关资料并进行统计分析。结果我国能开展IIF-ANCA检测的实验室分布于22个省、4个直辖市及5个自治区的311家医院和4家第三方检测公司。其中检验科实验室占78.44%,专科实验室占11.68%,第三方实验室占5.99%。IIF-ANCA检测量检验科实验室为15 138人次/周,占68.39%;第三方实验室3 788人次/周,占17.11%;专科实验室2 821人次/周,占12.75%。从事IIF-ANCA检测人员中,检验科实验室1 250人,占80.08%;专科实验室175人,占11.21%;第三方实验室89人,占5.70%。开展IIF-ANCA检测实验室采用10的开方系统和倍比稀释系统的比例为1∶1.4。结论 IIF-ANCA检测实验室已经遍及全国各省市自治区,主要采用的滴度系统为10的开方系统和倍比稀释系统。第三方实验室和专科实验室IIF-ANCA平均每周检测量占有较高比例。     

中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义

目的 检测中国系统性硬化症(SSc)患者血清中硬皮病相关自身抗体-抗Sol-70抗体、抗着丝点抗体(ACA)和抗RNA多聚酶Ⅲ抗体(ARA),分析其与各种临床表现之间的关系.方法 序贯纳人入选欧洲抗风湿病联盟硬皮病实验研究组(EULAR Scleroderma Trial and Research Group,EUSTAR)的135例巾国SSc患者,分别用线性免疫印迹法、免疫双扩散法和间接免疫荧光法检测ARA、抗Scl-70抗体、ACA在患者血清中表达水平,并进一步分析自身抗体与患者各种临床表现之间的相关性.结果 在135例SSc患者中抗Sel-70、ACA、ARA的阳性率分别为49 6%、13 3%和8.9%.抗Scl-70抗体阳性组患者的病程显著短于阴性组[(71±59)个月vs(90±103)个月,P=0 041],肺问质病变的患病率亦显著高于阴性组(P=0.031),但阳性组肺动脉高压的患病率显著低于阴性组(P=0 042),修订的Rodnan皮肤硬化评分(P=0 008)、面颈部皮肤硬化(P=0.002)、肘/膝关节远端皮肤硬化(P=0.004)以及指端凹陷性瘢痕/指垫消失的发生率(P=0.01)均显著高于阴性组;ACA附性组患者的病程长于阴性组,差异具有统计学意义[(90±107)个月vs(69±64)个月,P=0.036],肺间质病变的患病率显著低于阴性组(P=0 045),IgM水平亦显著低于阴性组(P=0 045);ARA阳性组和阴性组患者的病程等各项临床指标差异均无统计学意义,但阳性组血清肌酐和尿素氨水平显著高于阴性组(P＜0.001).ACA和ARA患者各项皮肤硬化指标在阳性组和阴性组差异均尤统计学意义.结论 硬皮病特异相关的自身抗体与不同的临床表现紧密相关,检测此类抗体可能有助于SSc的诊断、脏器受累和预后评估.这些自身抗体在中国SSc患者的临床相关性可能不同于其他地区的SSc患者.

Abstract：

Objective To detect the expression of scleroderma-related autoantibodies, such as anti-Scl-70, anli-centromere antibody ( ACA)and anti-RNA polymerase Ⅲ ( ARA) , and their relationship with clinical features in Chinese systemic sclerosis (SSc) patients. Methods One hundred and thirty-five Chinese SSc patients from the clinical database of the Scleroderma Trials and Research Group proposed by European League Against Rheumatism's Scheroderma Trial and Research Group( EUSTAR) were consecutively enrolled. The expression of ARA, anti-Scl-70 and ACA were detected through linear immunoblotting, double immunodiffusion and indirect irnmunofluorescence, respectively. The relevance between the existing of autoantibodies and clinical manifestations was analyzed statistically. Results Among the 135 Chinese SSc patients, the prevalence of anti-Scl-70, ACA, ARA were 49. 6% , 13.3 % and 8.9% respectively. Patients with anti-Scl-70 antibody had significantly shorter disease course [(71 ±59) month vs (90 ± 103) month, P = 0.041] , higher proportion of interstitial lung disease ( P = 0. 031) but lower of pulmonary arterial hypertension (P =0.042). Modified Rodnan's skin score (P=0.008) and prevalence of facial and cervical cutaneous sclerosis (P = 0. 002) , distal (to elbow/knee ) cutaneous sclerosis ( P = 0. 004 ) and digital pitting scarring/disappear of digital pad were all significantly higher in anti-Scl-70 positive group. Patients with AC A had longer disease course ( P = 0. 036) , lower IgM level ( P = 0. 045) and were less prevalent of interstitial lung disease ( P =0. 045). Patients with ARA had higher serum creatinine and urea nitrogen level ( P ＜ 0.001) although otherwise features had unremarkable differences. Conclusion Scleroderma-related autoantibodies have relevance with different clinical manifestation and detection of these autoantibodies may be helpful to the diagnosis of SSc, organ involvement evaluation and predicting outcomes. The clinical relevances of autoantibodies in Chinese SSc patients may differ from other areas or races.     

系统性硬化病患者指溃疡的关联因素分析:来自中国欧洲抗风湿病联盟硬皮病试验研究组数据库的资料

目的 了解出现指溃疡的系统性硬化病( SSc)患者的临床特点及危险因素,以便早期预防及治疗,提高生活质量.方法 北京协和医院欧洲抗风湿病联盟硬皮病试验研究组数据库中,在2009年2月至2010年8月间前瞻性地收集SSc患者共166例,均满足1980年美国风湿病学会SSc分类(诊断)标准.对出现指溃疡的患者的临床表现、实验室检查与未出现者进行对比分析.计量资料采用-x±s表示,采用t检验,计数资料采用X2检验进行对比;采用Logistic回归进行危险因素分析.结果 ①166例患者中,共49例患者(29.5％)出现指溃疡,出现指溃疡的年龄(36±12)岁,全部患者存在雷诺现象.②有指溃疡患者的年龄(40±12)岁,雷诺现象发病年龄(33±12)岁,从雷诺现象到出现其他临床表现的时间(18±15)个月,与无指溃疡的SSc患者[分别为(46±12)岁,P=O.005;(39±13)岁,P=0.005;(115±307)个月,P=0.002]相比差异均有统计学意义.③与没有指溃疡的患者相比,有指溃疡的患者男性比例升高,以弥漫型SSc更常见,食管受累多(P＜0.05).结论 SSc患者中指溃疡并不少见,尤其在男性以及弥漫型SSc患者中更常见,有指溃疡者,其出现雷诺现象的年龄偏小,该组患者更易合并食管受累.     

三种方法检测抗dsDNA抗体的比较

目的 比较间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附测定(ELISA)及放射免疫检测法(Farr)检测抗dsDNA抗体的敏感性及特异性,为开展临床联合检测寻找合适的方法.方法 收集我院门诊和住院患者血标本共200份,其中包括门诊和住院及后期追踪经临床诊断的系统性红斑狼疮(SLE)120份标本、类风湿关节炎(RA)20份标本.进行性系统硬化症(PSS)20例.混合型结缔组织病(MCTD)20例,干燥综合征(SS)20例,另健康体检者50例(全部经排查不具有结缔组织病)同时用以上三种方法检测抗dsDNA抗体.结果 用IIF、ELISA及Farr检测抗dsDNA抗体,SLE患者抗dsDNA抗体阳性率分别为25%、32%和32%.RA患者抗dsDNA抗体阳性率均为0.PSS患者抗dsDNA抗体阳性率分别为0.0和5%.MCTD病抗dsDNA抗体阳性率分别为0、5%和10%.SS患者抗dsDNA抗体阳性率均为0.健康体检者抗dsDNA抗体阳性率均为0.结论 用两种方法联合检测抗dsDNA抗体,尤其是IIF和ELISA检测,能提高单一一种方法对SLE患者抗dsDNA抗体检出率,有助于SLE的诊断及病情回顾.