索拉非尼通过抑制WNT信号通路诱导白血病细胞株U937凋亡

本研究观察多激酶活性抑制药物索拉非尼对急性白血病细胞株U937细胞增殖活力的影响及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。以不同浓度的索拉非尼作用于U937细胞48小时后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖活力变化;Annexin V/PI染色后通过流式细胞仪观察索拉非尼对U937细胞株的促凋亡作用;PI染色后利用流式细胞仪分析细胞周期中各期细胞比例变化;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达变化。结果表明,同对照组相比较,索拉非尼以浓度依赖方式抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡(p<0.05)。Western blot检测结果显示,与索拉非尼处理前后相比,WNT通路中失活型GSK-3β蛋白、β-catenin及cyclinD1表达均下调,并呈现出浓度依赖性。使用GSK-3β抑制剂氯化锂上调失活型GSK-3β蛋白后仍得出同样趋势(p<0.05)。结论:索拉非尼通过减少WNT信号通路负向调节蛋白GSK-3β失活,进而下调β-catenin,cyclin-D1水平,使U937细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡。     

异常复杂核型改变的骨髓增生异常综合征——难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多一例

 目的　探讨细胞遗传学在骨髓增生异常综合征（MDS）中的重要意义。方法　对1例应用骨髓细胞形态学诊断为MDS-RAS的患者分别进行常规染色体反带核型分析和白血病细胞分化抗原检测。结果　患者原始粒细胞占0.03,红系有明显的病态造血,环形铁粒幼细胞占0.20;流式细胞术检测原始细胞群占0.036,CD34、CD33、CD117阳性,CD13部分阳性;染色体分析为44,XX,der(5)add(5)(q33),del(7)(q22),add(9)(p23),der(10)add(10)(q21),del(12)(p12),add(16)(q23),-17,-22[14]/46,XX[6]。结论　该病例具有异常复杂的核型改变,在MDS-RAS中尚属少见,且在国际预后评分系统（IPSS）中占较大的分值,提示细胞遗传学检查对MDS的诊断和治疗具有重要意义。染色体的异常可能要早于骨髓形态学和白细胞表面分化抗原的变化,能及早监测疾病的进展和转变。     

罗格列酮诱导白血病NB4细胞凋亡的作用及机制探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)时白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的RGZ(20-80 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用RT-PCR法检测PPARγ的表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.应用Western blot检测60 μmol/L的RGZ作用不同时间后凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平,同时检测不同浓度药物作用不同时间后Caspase-3活性的变化.结果:40μmol/L以上的RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.RGZ在诱导细胞凋亡的同时.PPARγmRNA的表达水平逐渐升高.而凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平显著下降.Western blot结果还显示Caspase-3被活化出现20 kD亚单位片段.结论:RGZ可以通过PPARγ信号途径抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,下调凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平以及激活Casapse-3可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

罗格列酮对U937细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS)对人急性单核细胞白血病U937细胞生长抑制作用及其作用机制.方法:体外培养人急性单核细胞白血病U937细胞,应用不同浓度的罗格列酮处理人急性单核细胞白血病U937细胞,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术、AnnexinV/PI双染色法现察细胞凋亡率;并分析细胞周期改变;RT-PCR法分析PPARγ/mRNA表达.结果:ROS浓度>80#mol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用,P<0.05;AnrlexinV/PI双染色法观察细胞凋亡率>50%,并将细胞周期阻滞在G1期,P<0.05;RT-PCR检测U937细胞中PPAR7 mRNA表达无明显变化.结论:ROS浓度>80 μmol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用及诱导凋亡作用,同时将细胞周期阻滞在G1期,但是PPARγ mRNA表达无明显变化,推测可能与激活PPARγ表迭无明显相关,可能存在另外的信号转导途径.     

pLXSN-bcr/abl质粒载体的构建及其逆转录病毒的生成

目的:构建bcr/abl融合基因的逆转录病毒载体,通过细胞包装获取高滴度含bcr/abl基因的逆转录病毒.方法:RT-PCR法克隆K562细胞bcr/abl基因断裂点DNA片段,构建pLXSN-bcr/abl表达载体;阳离子脂质体法将重组体转染EcoPack2TM-293包装细胞,序列测定鉴定病毒并测定病毒滴度.结果:成功构建pLXSN-bcr/abl重组体,序列测定与已知相应bcr/abl融合基因序列相同;脂质体法将重组体转染293包装细胞获得携带bcr/abl基因病毒,测滴度为6×105 cfu/mL.结论:成功构建pLXSN-bcr/abl表达载体,并获得高滴度含bcr/abl融合基因的逆转录病毒.     

冬凌草甲素对THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲素(16～56 μmol/L)作用于体外培养的THP-1细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,用免疫印迹法(Western Blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化.结果 32 μmol/L以上的冬凌草甲素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,在Hoechst 33258荧光染色后,细胞出现核浓缩及核碎裂等典型的凋亡特征.Western Blotting检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量为20×103的裂解片段,PARP被裂解后出现相对分子质量为89×103的亚单位片段.结论 冬凌草甲素能显著抑制THP-1细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3途径可能是冬凌草甲素诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这为冬凌草甲素用于白血病的辅助治疗提供了有力的实验依据.     

FMS样酪氨酸激酶3内部串联重复突变与急性髓细胞性白血病预后

近年来,鉴定同急性髓性白血病(AML)患者预后相关的获得性分子生物学标记取得了较大进展,增补了当前根据细胞遗传学异常制定的危险分层标准.FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复突变(FLT3-ITD)作为最早发现的白血病分子生物学标记之一,其存在与高白细胞血症、完全缓解后高复发率及低存活率之间的关联性已被广泛接受.     

地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制研究

目的:探讨地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制。方法:应用CCK-8法检测0.5～100μmol/L地西他滨作用Kasumi-1细胞24、48、72 h后的细胞存活率,An-nexinⅤ-FITC/PI双染色法检测0.5～20μmol/L地西他滨处理Kasumi-1细胞48 h后的细胞凋亡率,流式细胞碘化丙啶单染色法观察G0/G1期、S期、G2/M期Kasumi-1细胞比例;逆转录PCR法检测p21WAF1/CIP1基因表达水平的变化。结果:0.5～100μmol/L地西他滨均可抑制Kasumi-1细胞增殖,并呈现剂量依赖性与时间依赖性,作用24、48、72 h的IC50浓度分别为6.92、5.03、4.47μmol/L;0.5～20μmol/L地西他滨诱导Kasumi-1细胞凋亡水平较低,但能以剂量依赖的方式阻滞Kasumi-1细胞G2/M期,上调p21WAF1/CIP1基因表达。结论:地西他滨对Kasumi-1细胞具有毒性作用,其机制可能与上调p21WAF1/CIP1表达以及阻滞细胞周期有关。     

冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响

目的:探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTF法检测细胞生长抑制率,应用hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测.结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降.结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一.这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据.     

丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA(10~50μmol/L)作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞(凋亡细胞)逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。