肺炎链球菌在体外触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排

目的　通过体外实验研究肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae ,S .pn)侵袭A54 9细胞和微丝肌动蛋白细胞骨架重排之间的关系。方法　采用F actin特异性FITC phalloidin荧光染料 ,观察S .pn作用于A54 9细胞前后的F actin细胞骨架重排情况 ;用F actin细胞骨架重排抑制剂———细胞松弛素D预处理A54 9细胞 ,观察S .pn对A54 9细胞的侵袭率 ;分别使用PLC、TPK信号转导抑制剂U7312 2、Genistein处理因素预处理A54 9细胞 ,观察其与F actin细胞骨架重排的关系。结果　S .pn作用A54 9细胞后 ,F actin细胞骨架呈块状、丝状聚集 ;F actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低S .pn对A54 9细胞的侵袭率 ,在其浓度为 0 .2 5 μg ml时 ,未得到可测的细菌数 ;PLC(磷脂酶C)、TPK(酪氨酸蛋白激酶 )信号转导途径抑制剂可部分抑制A54 9细胞F actin细胞骨架重排 ,其相关系数分别为 :rPLC =- 0 .88(P <0 .0 5 ) ;rTPK =- 0 .91(P <0 .0 5 )。S .pn细胞壁作用A54 9细胞后 ,F actin细胞骨架呈块状、丝状聚集 ,二者间存在剂量依赖关系。结论　S .pn可通过PLC、TPK细胞信号转导途径触发A54 9细胞F actin细胞骨架重排 ,进而导致S .pn侵袭A54 9细胞。     

Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化

目的研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用。方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达。Runx3干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad1/5/8的转录活性。结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P0.05)及DLX5蛋白的表达(P0.05)。结论敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化。     

肺炎链球菌的转化缺陷导致细菌毒力减弱

的探讨肺炎链球菌的自然转化与其条件致病的关系。方法采用插入失活的方法制备肺炎链球菌的转化缺陷菌株，通过黏附实验和小鼠毒力实验观察它们毒力的变化，应用RT-PCR测定黏附因子PsaA在野生和缺陷菌株中的表达。结果实验获得了3株肺炎链球菌(1、2和22)的转化缺陷菌株(1d、2d和22d)。毒力研究发现转化缺陷菌株对ECV 304细胞的黏附能力显著弱于相应的野生菌株，1和2株肺炎链球菌腹腔感染BALB／c小鼠的能力显著强于相应的转化缺陷菌株；研究还发现PsaA基因在2和22株肺炎链球菌中的表达量显著高于其缺陷菌株。结论肺炎链球菌具有自然转化的能力有助于其毒力的表现，且可能通过黏附因子PsaA等相关毒力因子表达增加而增强其毒力。     

穿心莲内酯对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其机制

目的:探究穿心莲内脂(AG)对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在的机制。方法:体外培养人骨肉瘤143B细胞,使用不同浓度(0～20μmol/L)的AG处理143B细胞,分别用结晶紫染色、MTT法和集落形成实验来检测AG对143B细胞增殖的影响。划痕愈合实验检测骨肉瘤143B细胞的迁移能力。Transwell小室实验检测骨肉瘤143B细胞的侵袭能力。Hoechst 33258染色实验和流式细胞术检测AG对骨肉瘤细胞凋亡的影响。不同浓度AG处理后,使用Western blot检测骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭和凋亡相关蛋白的水平。应用Western blot进一步检测Wnt信号通路中的β-catenin及其相关分子c-Myc的表达量。结果:与空白组相比,AG处理组中143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0. 05),且呈浓度依赖性。迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的水平均下调(均P<0. 05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达量升高,凋亡相关蛋白caspase-3的蛋白水平下降而cleaved caspas...     

Notch信号通路及其与肿瘤的关系

20世纪80年代中期一种可引起果蝇翅膀残缺的跨膜受体基因被克隆出来,并被命名为Notch受体。研究发现包括哺乳动物在内的很多生物都能表达这种受体,Notch信号通路与细胞的分化、增殖、凋亡、黏附及表皮细胞向间充质细胞的转化有密切联系,     

HBX基因逆转录病毒载体的构建及在LO2细胞内的稳定表达

目的 构建乙型肝炎病毒X基因(HBX)逆转录病毒载体,并使其在人正常肝细胞LO2内的进行稳定表达.方法 PCR扩增HBX基因,克隆到逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag中,构建表达HBX的重组逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag-HBX,通过通过PCR、酶切、测序验证HBX基因后;体外将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBX基因的重组逆转录病毒,并感染靶细胞人正常肝细胞LO2,稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,获得成功转入HBX的LO2细胞.通过RT-PCR和Western blot进一步验证HBX基因及HBx蛋白在LO2细胞内的表达.结果 (1)成功获得携带HBX基因的阳性重组质粒pSEB-Flag-HBX;(2)HBX基因被逆转录病毒成功地导入靶细胞LO2细胞,并实现稳定表达,RT-PCR检测到HBX mRNA在靶细胞中的表达,Western blot检测到HBx蛋白在靶细胞LO2-HBx细胞中的表达.结论 成功构建了携带HBX基因的重组逆转录病毒载体,感染人正常肝细胞LO2后能够稳定表达HBx蛋白,为进一步探讨HBx在肝癌发生发展中的作用提供了较为理想的实验模型.     

淋病奈瑟菌自身猝灭荧光定量PCR方法的临床应用

目的 评价自身猝灭荧光定量PCR(FQ-PCR)检测临床标本中淋病奈瑟菌的应用价值.方法 应用培养法和FQ-PCR法分别检测59份疑为淋病奈瑟菌感染病人的分泌物标本.结果 两者特异性均为100%(28/28),而FQ-PCR敏感性100%(38/38),高于培养法81.6%(31/38)(P＜0.05).对其中32例经正规治疗,症状、体征消失2～3周的患者进行追踪检测,培养法均转阴,FQ-PCR检测仍有5例为阳性.结论 自身猝灭荧光定量PCR方法具有快捷、敏感、特异、价格低廉和稳定性较好的特点,是辅助诊断淋病的有效方法之一.     

高强度聚焦超声抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-F10在体内的转移

目的在黑色素瘤的小鼠模型上,探讨高强度聚焦超声（HIFU）处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小
鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7~10 mm时进行HIFU处理,并设置实验对
照组（荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭,即假照组）;治疗后每3 d测量肿瘤长径和短径,共观察3周,绘制肿瘤曲
线,统计生存率和转移率,并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色
素瘤细胞的数量,它们分别是黑色素瘤相关抗原A3（MAGE-A3）、T细胞1识别的黑色素瘤抗原（MART1）以及同源转化成对框
基因转录因子PAX3);在HIFU治疗后14 d,通过尾静脉注射再次移植B16-F10细胞,观测其肺转移率。结果（1）各自的中位生
存时间及95 %可信区间（CI）：假照组分别为19.00 d和17.14~20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76~27.25 d,生存率差异显
著（P<0.01）;从治疗后第20天起,两组小鼠的肿瘤体积差异明显,从HIFU处理后第20天开始,包括处理后第23、26天,辐照组
小鼠肿瘤体积明显小于假照组（P<0.05）;（2）实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3、MART1
和PAX3三个指标都明显低于假照组（P<0.05）,在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组（P<0.05）;（3）在
HIFU治疗后14 d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞,HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组（P<0.05）,肿瘤转移抑制率为
42.4%。结论HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生,其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在
肺部的定植能力。
     

超声微泡介导双报告基因在椎间盘髓核中表达的研究

目的:探索超声微泡能否介导外源性基因在椎间盘髓核中表达.方法:40只SD大鼠被随机分为4组.第1组仅于髓核内注入含舣报告基因的质粒;第2组为在第1组基础上加超声照射;第3组同时注入含双报告基因的质粒和微泡的混悬液;第4组为在第3组基础上加超声照射.每只大鼠末接受手术和照射的第4、5椎间盘作为对照.一周后处死大鼠取出全部椎间盘做荧光素酶检测.结果:第4组(96.7×103±72.3×103)荧光素酶强度最高,与第1组(8.7×103 ±7.2×103)、第2组(3.1 × 103±2.4×103)、第3组(47.5×103± 443.3×103)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论:超声微泡介导的基因转染系统能促进外源基因髓核中的高表达,为今后椎间盘病变的基因治疗提供了方法和依据.     

骨形态发生蛋白9促成骨的分子机制

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins ,BMPs）属于转化生长因子β（trans-forming grow th factor-β, TGF-β）超家族的成员,因其具有诱导骨形成的能力而得名。在人类中,BM Ps家族至少包括15个以上的成员,其中具有促成骨作用的（成骨性 BM Ps ）包括BM P2、BM P4、BM P6和BM P7,而 BM P2和 BM P7已经在临床用于促进脊柱融合。近年发现,BM Ps中的成员BMP9又称生长分化因子2（growth differentiation fac-tor 2,GDF2）也具有诱导成骨分化和骨形成的能力,而BM P9促成骨的相关分子机制也得到了一定的解析。