强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达

目的探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞（sprial ganglion cell,SGC）的凋亡及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase-3信号转导有关。方法选用健康雄性白色豚鼠20只,随机分为4组,每组5只,其中3组为实验组,1组为对照组。将实验组动物暴露于4kHz、120dB SPL窄带噪声中4h,分别测试噪声刺激停止后1、4、14d及对照组豚鼠听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）。通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL）,检测SGC凋亡细胞,免疫组织化学方法检查Caspase-3蛋白的表达。结果透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变。实验组SGC的TUNEL染色明显增强,Caspase-3的表达增高,与对照组比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。结论强噪声可以诱导SGC凋亡;SGC凋亡与caspase-3的激活有关。     

A Retrospective Study on Cholesteatoma Otitis Media Coexisting with Cholesterol Granuloma

Cholesterol granuloma (CG) is a tissue reactionto foreign body cholesterol crystal.It often happensin chronic disease of middle ear and mastoid,such asidiopathic hemotympanum,chronic secretory otitismedia,chronic suppurative otitis media and somepostoperative infection in ear.In addition,ittendstocoexistwith cholesteatoma.Retrospectively reviewedin this study were 1 5 cases of middle ear cholesterolgranuloma accompanied by cholesteatoma verified bysurgery and pathology and treated in our hosp…     

串珠素反义cDNA对人喉癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究串珠素（perlecan）反义cDNA质粒（pAP）对喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的影响。方法：应用pAP转染喉癌Hep-2细胞,建立人喉癌裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠移植瘤的生长速度。分为3组：未转染的Hep-2细胞组（WT组）、空载体phβApr-neol转染组（neo组）及pAP转染组（pAP组）。用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组裸鼠移植瘤的perlecan mRNA和蛋白质的表达情况。结果：肿瘤生长4周后,WT组和neo组裸鼠移植瘤的平均体积较大,pAP组裸鼠移植瘤的平均体积较小,差异有统计学意义（P〈0.01）。perlecan mRNA在WT组和neo组高表达,在pAP组低表达,均差异有统计学意义（均P〈0.05）。perlecan蛋白在WT组和neo组高表达,定位于癌细胞的细胞核和细胞质,在pAP组低表达,均差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：pAP对喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的发生、发展有重要影响。     

衣霉素诱导螺旋神经节细胞内质网应激反应性细胞凋亡的研究

目的 探讨衣霉素是否可诱导螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGCs)产生内质网应激反应性细胞凋亡及其发生机制.方法 采用出生3 d内的SD大鼠,取出螺旋神经节细胞体外培养3 d后,加入不同浓度的衣霉素24 h后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞存活率并选取适当的诱导浓度;免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞;hochest 33258检测细胞核形态;Western blot检测GRP78/BiP、Caspase-12蛋白的表达.结果 可以选取2μg/ml的衣霉素作为诱导浓度;培养的细胞经免疫组化抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs;hochest33258核染色发现衣霉素诱导后出现凋亡样改变的细胞核;Western blot检测发现经衣霉素诱导后GRP78/BiP及Caspase-12蛋白在细胞内表达更多,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01).结论 衣霉素可以诱导大鼠离体SGCs产生内质网应激反应性细胞凋亡,且具有浓度依赖性;Caspase-12可能参与其凋亡机制的发生.     

串珠素反义cDNA质粒转染对喉癌细胞Hep-2增殖能力的影响

目的：研究串珠素反义cDNA质粒转染对喉癌细胞Hep-2增殖能力的影响。方法：利用阳离子脂质体作为载体，把重组真核表达载体串珠素反义cDNA质粒pAP转染喉癌细胞Hep-2。通过RT—PCR、Westernblot及MTT法检测转染后Hep-2细胞串珠素mRNA、蛋白质表达及细胞增殖水平，并观察转染后Hep-2细胞对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的反应性。将Hep2细胞分3组：①未转染的Hep-2细胞组（WT组）；②空载体ph8Apr—neol转染组（neo组）；③串珠素反义cDNA质粒pAP转染组（pAP组）。结果：将质粒pAP成功地转入Hep2细胞，获得了稳定表达串珠素反义cDNA基因的细胞系。串珠素mRNA和蛋白质水平在pAP组低表达，在WT组和neo组高表达，均差异有统计学意义（均P〈O．01）。在0．1％FCS的RPMI1640培养基培养下，WT组、neo组和pAP组细胞的增殖率均降低，但pAP组细胞的增殖与WT组和neo组细胞相比明显减低；在0．1％FCS加1μg／L bFGF的RPMI1640培养液培养下．WT组和neo组细胞增殖接近正常，但pAP组细胞的增殖能力较弱。结论：串珠素反义cDNA质粒转染可以有效抑制喉癌细胞Hep2的增殖能力。     

喉鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子和环氧化酶-2 mRNA检测

目的:探讨喉鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和环氧化酶(COX-2) mRNA的表达情况及与癌组织生长、浸润及转移的关系.方法:应用RT-PCR方法检测62例喉鳞状细胞癌、54例癌旁和9例正常喉黏膜组织中VEGF mRNA及COX-2 mRNA的表达.结果:喉鳞癌组织中VEGF mRNA和COX-2 mRNA的表达量高于癌旁和正常喉黏膜组织(P＜0.01),Ⅰ、Ⅱ期喉鳞癌组织2者的表达量低于Ⅲ、Ⅳ期(P＜0.01).喉鳞癌组织中VEGF mRNA和COX-2 mRNA的表达呈正相关(r＝0.756,P＜0.01).结论:VEGF和COX-2与喉鳞癌的生长、浸润及转移有密切关系,2者有协同作用.     

334机械感受器换能的分子基础

将机械性刺激转换为电信号的过程即为机械性换能.从果蝇的刚毛感受器及蠕虫的触觉感受器到脊椎动物的毛细胞和皮肤感受器,机械敏感性细胞对于有机体的生命活动是至关重要的.本文将对其换能机制的分子基础进行阐述.     

细菌内同源重组制备重组腺病毒及其初步应用

目的通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒。方法质粒pAdTrack酶切线性化后，通过电转化方法转化AdEasier细菌，线性化的腺病毒重组质粒转染293包装细胞后获得重组腺病毒，观察腺病毒感染喉癌细胞Hep-2后的报告基因表达情况及病毒对培养细胞生长的影响。结果构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确；扩增的腺病毒转染培养的Hep-2细胞8 h后即开始表达报告基因，48 h后全部细胞均有报告基因表达；该重组的腺病毒对培养Hep-2细胞生长无明显影响。结论通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒，方法简单、成功率高、实验周期短。     

喉鳞癌中碱性成纤维细胞生长因子及其双受体系统的研究

碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）通过由4个高亲合力酪氨酸激酶受体（fibroblast growth factor receptor,FGFR）和细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖（heparan sulfate proteoglycans,HSPG）组成的双受体系统发挥生物活性，     

周围神经脱髓鞘豚鼠模型听神经病变及听功能研究

目的:通过建立实验性变态反应性神经炎这一周围神经脱髓鞘动物模型,观察其听神经病变,初步探讨其听性脑干反应(ABR)和听神经复合动作电位(CAP)的改变。方法:以粗提的牛外周神经髓鞘碱性蛋白(MBP)作为抗原,免疫实验组豚鼠;对照组以生理盐水代替MBP。检测动物血清抗MBPIgG水平、坐骨神经传导速度,观察坐骨神经、听神经病理改变;检测ABR、CAP阈值及潜伏期;观察内耳病理损伤。结果:实验组血清抗MBPIgG水平升高,与对照组相比P<0.01;实验组坐骨神经传导速度减慢,与对照组相比P<0.05;透射电镜发现坐骨神经、听神经脱髓鞘改变;免疫前后实验组14只(26耳)出现ABR反应阈升高,伴Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期明显延长,与对照组比较P<0.01,而Ⅰ～Ⅲ、Ⅲ～Ⅴ波间期与对照组比较P>0.05;CAPN1、N1波潜伏期延长,与对照组比较P<0.01;另有4只(8耳)仅出现潜伏期延长而无阈值升高;免疫组织化学显示内耳免疫损伤部位主要在蜗神经、内耳神经纤维、螺旋神经节;扫描电镜显示内毛细胞纤毛紊乱、胞质溢出。结论:实验性变态反应性神经炎动物模型作为一种可靠的周围神经脱髓鞘动物模型,其病变可累及听神经出现听神经脱髓鞘改变,ABR和CAP阈值升高、潜伏期明显延长,该模型可望成为探讨听神经脱髓鞘的听力学表现的一种有用的动物模型。